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单细胞凝胶电泳技术在军事毒理学中的应用
由Ostling和Jonhanson首先提出,后又经Singh和Olive建立和改进的单细胞凝胶电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,简称SCGE)技术,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(Comet Assay).它是一种测定和研究单个细胞DNA链断裂的新电泳技术,与传统方法相比,其简便、快速、灵敏、样品量少、无需放射性标记,具有极高的实用价值.
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单细胞凝胶电泳技术在运动医学中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)又称彗星实验(comet assay),是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的新技术.SCGE实验初由Rydbery和Johanson(1978)提出,以后经Ostling和Johansont[1](1984)及Singh[2](1988)等对实验条件进行改良,使其具有简便快速、灵敏性高、重复性好、无需放射性标记等优点,目前已被广泛应用于临床药物筛选、肿瘤诊断与治疗、衰老和细胞凋亡机制的探讨以及遗传毒理学和生物监测等研究领域[3-5].
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分子病理学技术应用原理和适用范围
1 Southern杂交:Southern杂交是1975年由Southem提出,并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点,已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的常用手段之一[1]。Southern杂交的基本方法是,从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化,通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段,然后使这些DNA片段在原位发生变性,并以凝胶转移到另一种固相支持物如硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,同时保持各个DNA片段的相对位置不变。再用已标记的(通常为放射性同位素标记,也可用非放射性标记)DNA或RNA探针与固着于固相支持物上的DNA杂交。经放射自显影或化学显色的方法确定与探针互补的电泳条带的位置,从而达到检测和分析的目的。
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过氧化物还原酶Ⅰ与肿瘤关系的研究进展及其在核医学中的应用
过氧化物还原酶(Peroxiredoxin,Prx)蛋白属于抗氧化蛋白超家族新成员,它通过硫氧还蛋白还原过氧化物和超氧化物.Prx Ⅰ作为Prx家族的重要成员之一,在多种肿瘤组织细胞(肺癌、肝癌、直肠癌、甲状腺癌等)中高表达.本文从Prx Ⅰ的生物学特性、在各种肿瘤中的表达情况,及其对肿瘤分化、侵袭、复发与预后等方面的影响关系的研究进展进行了综述.而后,介绍了我核医学科新发展的靶向Prx蛋白的特异性分子探针,并对将其用于肺部肿瘤诊断的转化医学的研究进行前瞻性分析.
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45Ca标记复合钙化合物示踪钙生物动力学观察
目的用放射性核素45Ca标记4种钙制剂化合物,并观察和示踪其生物利用度.方法用45Ca标记葡萄糖酸钙、柠檬酸钙、碳酸钙和L-苏糖酸钙,测定大鼠心、肝、脾、肾、脑、胃、肠、血液、粪便和尿中钙离子吸收含量和生物利用度.结果①45Ca标记的钙制剂具有较高的放射性活度、较稳定的组织标准曲线和回收率.②示踪4种化合物生物利用度变化显示,有机钙化合物较无机钙化合物更利于组织的吸收.结论45Ca标记钙制剂生物示踪方法具有灵敏、客观、准确和稳定的特点.
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放射性同位素标记药物在药物代谢与处置研究中的应用
放射性标记药物是广泛应用于新药研究和药物残留分析等领域,用来阐明药物代谢和处置过程的完美工具.常用标记核素有3H,14C,18F,125I等.在新药研究和药物残留分析研究中药物的吸收、分布、生物转化、排泄途径、残留时间及物料平衡等都需要利用标记在药物的代谢稳定部位上的放射性标记化合物完成.本文阐述放射性同位素示踪技术在药物代谢及处置研究中的应用,并举例说明了相关研究中的检测方法和手段,介绍了放射性标记药物的检测方法及相关仪器设备的发展、种类,未来发展的可能方向.
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188Re标记放射性药物研究进展
188W/188Re发生器的发展极大提高了188Re在各种疾病治疗中的应用.188Re是一种非常理想的治疗用放射性核素.已经开发了许多新的188Re标记的放射性药物并普遍地应用于临床试验中.188Re-MAG3、188Re-DTPA用于防止冠状动脉再狭窄,188Re-HEDP、188Re-ABP、188Re-EDTMP等用于骨痛缓解的治疗,188Re-HDD碘化油溶液用于治疗肝癌,188Re标记的胶体和微球用于治疗关节炎及其他的实质性肿瘤.然而,仍需要发展新的靶向性更强的188Re标记的放射性药物如肿瘤特异的单克隆抗体和肽及葡萄糖类似物.188Re从发生器可方便地获得以及合理的价格使188Re标记药物的临床应用前景广阔.
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一种新的阿片受体显像剂125I-7α-O-碘烷-特培洛菲的制备及生物学评价
1985年Frost等[1]开始研制用碳[11C]标记的甲芬基太尼(11C-carfentanil,11C-CFN)和正电子发射断层显像术(PET)首次对人脑阿片受体进行显像研究,之后陆续报道了11C-特培洛菲(11C-deprenorphine,11C-DPN)[2],11C-哌替啶(11C-pethidine)[3]及放射性标记的吗啡、海洛因和可待因等适用于PET的阿片受体配体,但因在恒河猴上或人体中的研究发现它们的特异性/非特异性摄取比值较低而放弃或限制了其进一步的研究.不少学者进行了氟[18F]标记的阿片配体的应用研究,如18F-cyclofoxy用于正常人和癫痫疾患的研究[4] ,11C-苯丁洛菲(11C-buprenorphine,11C-BPN)成功地用于狒狒的脑阿片受体显像[5].国外阿片受体PET显像的工作已有较多的报道,但用单光子发射型计算机断层显像(SPECT)的研究工作报道甚少.因此研发适合于SPECT显像的阿片受体显像剂,尤其在镇痛、吗啡成瘾和/或戒毒研究方面具有重要意义.本研究拟研发碘标记的7α-O-碘烷-特培洛菲(7α-O-iodoallyl-deprenorphine,7α-O-IA-DPN)作为SPECT阿片受体显像剂,并对其进行初步的生物学评价.
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放射性核素标记小分子多肽治疗肿瘤的研究进展
近年来,应用放射性核素标记多肽进行受体靶向治疗在肿瘤治疗领域已变得非常重要.临床应用多的是生长抑素类似物.现已成功开发出放射性核素标记的α-黑色素细胞刺激激素、神经紧张素、血管活性肠肽、铃蟾肽、P物质、神经肽Y、缩胆囊素类似物等,并已进行体内、外研究.综述了应用90Y和177Lu标记的生长抑素类似物进行受体介导放射性核素靶向治疗的情况,以及放射性核素标记的缩胆囊素和神经肽Y用于内照射治疗的前期临床资料.
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肝细胞生长因子在正常和轻型急性胰腺炎小鼠的药动学研究
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在轻型急性胰腺炎(MAP)小鼠的药动学及胰腺分布.方法:于正常小鼠背部皮下注射125I-HGF 80 ng,注射后1、2、3、4、5、10、15、30、60、90、120、180、300、300min分别取血清及胰腺组织,测定HGF含量,计算HGF半减期;小鼠分为对照组和模型组,以雨蛙肽100μg/kg体重腹腔注射复制MAP模型,125I-HGF给药后30、60、120、180、360 min测定血清及胰腺组织HGF含量,计算HGF半减期.结果:HGF在正常小鼠血液及胰腺组织中呈先快后慢的代谢特征,后期半减期约为130 min;复制MAP后HGF在模型组小鼠血液中的后期半减期约为195 min,较对照组延长(P<0.01);模型组胰腺HGF含量高于对照组(P<0.01).结论:HGF在正常小鼠血液及胰腺中均呈先快后慢的代谢特征;MAP后HGF半减期延长,胰腺中的HGF含量增高.
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075 用非放射性标记杜氏利什曼原虫全虫DNA探针筛选自然感染的白蛉
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放射性探头在前哨淋巴结定位中的应用
用放射性核素标记肿瘤组织,指导外科手术并非是新概念.早在1949年,Selverstore等[1]报道了用手持γ-探头探测放射性标记的骨骼病灶,引导手术切除原发骨肿瘤和骨转移性病灶.1977年,Cabanias[2]在阴茎癌病人中提出前哨淋巴结的概念,认为前哨淋巴结是癌转移的首发部位,并且常常是肿瘤唯一转移的淋巴结.近年,随着单克隆抗体技术的发展,肿瘤组织的特异性标记可通过发射γ-射线的核素标记抗体而达到.
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用于放射性核素铼标记的fac-[188Re(CO)3(H2 O)3]+的制备研究
目的:探讨放化中间体fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成条件,并对其进行优化研究.方法:参照Schibli介绍的方法进行放化中间体fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成,分别从反应温度、反应时间和反应物BH3·NH3的用量对合成fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+产率的影响进行观察.结果:合成放化中间体fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的佳反应条件为:反应时间为15min,反应温度为70℃,BH3·NH3的用量为5mg;pH值<2.在佳的反应条件下,产物的放化产率为85%,经Sep-Pak硅胶柱分离后,放化纯度>95%.结论:本文结果为放化中间体fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+标记生物分子作为新一代治疗药物的发展提供了有力的实验基础.
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肺癌特异性靶向小分子多肽的核素分子探针的制备
目的:研究用NHS-MAG3作为双功能螯合剂进行99mTc标记针对肺癌特异性靶向小分子多肽的核素分子探针的制备方法.方法:利用组合化学肽库技术筛选得到与非小细胞肺癌(A549)发生特异性结合的小分子多肽cNGQGEQc,在合成多肽的过程中直接完成多肽与双功能螯合剂NHS-MAG3的偶联,然后采用氯化亚锡直接进行99mTc的标记,并采用正交设计法进行99mTc佳标记条件的摸索,纸层析法测定标记率,并观察99mTc标记小分子多肽的体外稳定性.结果:在固相法合成小分子多肽的过程中直接完成NHS-MAG3的联接,简化了偶联步骤,提高了偶联产率.佳标记条件下标记率约为85%,经HPLC纯化后放化纯度>95%,且在室温条件下和血清中具有较好的体外稳定性.结论:以NHS-MAG3作为双功能螯合剂,用99mTc标记小分子多肽cNGQGEQc,具有良好的标记率和体外稳定性,可满足后续进一步的体内、外实验要求.
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多肽受体介导的放射性核素靶向治疗的研究进展
利用放射性标记多肽类似物进行多肽受体靶向放射性核素治疗(PRRT),对于手术无法切除或转移性肿瘤病人来说是一种较新的和很有希望的治疗方法.20世纪80年代中期人们发现在一些肿瘤中可过度表达多肽激素受体,为了评估肿瘤受体表达情况则引入了放射性标记的多肽类似物,例如生长抑素、蛙皮素、神经降压素和胃泌素类似物等,其中常用的受体靶向制剂是各种生长抑素(somatostatin,SST)的类似物.
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188 Re标记单克隆抗体的应用研究进展(文献综述)
放免治疗(Radioimmunotherapy, RIT)是一种新型的治疗方法,其基本原理是将针对肿瘤相关抗原的放射性标记单抗注射到肿瘤病人体内,利用抗体作为放射性核素的载体将β辐射导向肿瘤部位,来达到选择性破坏肿瘤的目的.目前已用于多种肿瘤的治疗,包括神经母细胞瘤、黑色素瘤、结肠癌、卵巢癌和淋巴瘤等恶性肿瘤,RIT尤其适于手术无法切除的肿瘤、早期复发肿瘤和远处转移瘤.RIT的效果取决于肿瘤组织接受的辐射剂量(cGy)以及核素在肿瘤内滞留的时间.与药物和毒素不同,放射性标记抗体不仅可以杀死抗原表达阳性的肿瘤细胞,而且对附近抗原表达阴性的肿瘤细胞也具有杀伤作用.因此,RIT较体外放射治疗具有更高的选择性和特异性.虽然RIT仍处在发展阶段,但初步临床试验结果令人满意[1~3].在近十年中,RIT已有多个项目进入Ⅰ~Ⅱ期临床试验.
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CLIA,TrFIA及ECLIA分析系统与临床(文献综述)
近年来,标记免疫分析技术的研究和应用取得新的进展[ 1].尤其是非放射性标记免疫技术的分析自动化已推广应用于临床.如化学发光免疫分析(CL IA)、时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)及电化学发光免疫分析(ECLIA)相继建立(以上各种分析技术的性能比较见表1).它们除与放射免疫和免疫放射同样具有高度特异性和灵敏度外, 还克服了放射性核素可能造成的环境污染、核素半衰期的影响、保存期短等缺点,得到越来越广泛的应用,成为非放射性免疫分析中有前途的方法.
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免疫调节药托西莫单抗(131I-tositumomab)
1商品名Bexxar2结构特点本品由单克隆抗体托西莫单抗和131I放射性标记的托西莫单抗组成,具有抗肿瘤和放射免疫治疗功能.CD20抗原通常于正常或恶性B淋巴细胞表面表达,而托西莫单抗为抗CD20的鼠lgGG2aγ单克隆抗体.托西莫单抗由两条各含451个氨基酸的鼠γ 2a重链和含220个氨基酸的y轻链组成.其分子量约为150kD.131I-托西莫单抗是托西莫单抗通过共价健与131I结合的放射碘化衍生物.
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153Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究
目的研究153Sm通过二乙三胺五乙酸(DTPA)环酐(cDTPAa)为双功能络合剂标记抗CEA单抗的方法.方法确定cDTPAa与抗体偶联的佳条件,并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性.结果 153Sm标记抗CEA单抗的方法简便、快速,且抗体与cDTPAa偶联后其免疫活性无明显丧失.在抗体浓度为20mg/ml时,佳偶联条件为:抗CEA单抗与cDTPAa的摩尔比为1∶20,偶联反应中pH为7~8.在佳偶联条件下,用高比活度的153Sm(22.2GBq/ml),CEAMcab-DTPA的标记率可达60%.结论通过DTPA环酐法将153Sm标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂.
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帕金森病模型大鼠脑D2受体与血流灌注的对比研究(摘要)
目的对偏侧帕金森病(PD)模型大鼠脑多巴胺(DA)D2受体改变与脑血流灌注进行对比研究。方法立体定位脑黑质、腹侧被盖区,以6-羟基多巴胺定向损毁制作偏侧PD大白鼠模型,通过阿朴吗啡(Apo)诱发其向健侧旋转的转数筛选模型;并用高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD)检测PD模型及对照组大鼠脑纹状体DA含量;采用125I-左旋-3-碘-2-羟基-6-甲氧基-N[Cl-乙基-2-吡咯烷)甲基]苯酰胺(IBZM)放射自显影图分析、99mTc-6-甲基丙二胺肟(HMPAO)大鼠脑内分布观察进行D2受体与脑血流灌注研究。结果 PD模型大鼠损毁侧(右侧)纹状体DA及其代谢产物含量比左侧(健侧或未损毁侧)及假手术对照组明显降低(P<0.05);模型组损毁侧纹状体/小脑125I-IBZM摄取比值为8.04±0.71,比健侧及假手术对照组明显增高(P<0.05),提示损毁侧纹状体D2受体出现上调效应,损毁侧比健侧增高(30.11±4.53)%,这与Apo诱导偏侧PD模型大鼠向健侧旋转的30 min转数呈良好的正相关(r=0.98)。血流灌注研究显示偏侧PD模型大鼠两侧脑区内的放射性分布差异无显著性(P>0.05)。结论偏侧PD模型大鼠损毁侧纹状体DA及其代谢产物含量降低、D2受体出现上调反应,后者与Apo诱导的行为学改变呈良好的相关性;与脑血液灌注相比较,放射性标记IBZM揭示的D2受体变化更能特异及时地反映实验性偏侧PD模型的脑功能变化。 [全文刊登于中华核医学杂志2000.20(2):59]