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标记免疫分析技术进展
1959年Berson和Yalow报道放射免疫分析测定血浆胰岛素,由此开创了放射免疫分析(RIA)技术检测微量物质的新纪元,四十余年RIA已成为成熟的技术,在临床检测和科学研究中产生重要影响.我国自二十世纪六十年代起的三十余年,经历了几个发展阶段取得了瞩目的进展和广泛应用.近十余年,应用相关的放射免疫原理,以非同位素物质替代放射性核素标记抗原或抗体,相继出现了一些新的非同位素标记免疫分析技术如酶、化学发光、酶放大和荧光免疫分析等技术,与放射免疫分析技术一起统称为标记免疫分析技术.现就标记免疫分析技术的现状和发展作如下综述.
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188Re-,99mTc-octreotide,[125I-Tyr3]octreotide体外受体活性对比研究
目的:体外受体结合实验比较188Re-, 99mTc-, 和125I-标记生长抑素受体结合多肽的生物活性.材料和方法:采用直接法标记188Re-OCT,99mTc-OCT,氯胺T法标记125I-TOC.以大鼠脑皮质细胞为组织受体,进行饱和试验,测定3种标记物的Kd值.结果:125I-TOC对大鼠脑皮质细胞的Kd=3.56±0.92nM, Bmax=35.31±1.63fmol/μg;99mTc-OCT的Kd=11.25±1.26nM, Bmax=35.06±1.87fmol/μg;188Re-OCT的Kd=18.28±2.13nM, Bmax=34.70±1.01fmol/μg.结论:99mTc-OCT、188Re-OCT亲和力小于125I-TOC,但仍保持较高生物活性,有希望作为具有临床实用价值的生长抑素受体显像剂和治疗剂.
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单管多重聚合酶链反应对缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血的基因分析
α-珠蛋白生成障碍性贫血(a地贫)是热带及亚热带常见的单基因遗传病,超过95%的α地贫位于16p13.3[1]上,α珠蛋白基因缺失是导致α地贫的主要原因,即含有1条或2条α-珠蛋白缺失.传统的缺失型α地贫的常用基因分析方法是Southern blot 分析.这种方法存在操作繁琐、实验周期长及使用放射性核素标记等诸多限制,不利于临床推广应用.随后建立起来的聚合酶链反应(PCR)技术也由于各类型的缺失型α地贫在其反应中,因所需试剂及热循环要求不同,对不同缺失型的α地贫需分别进行检测,不能满足临床筛查的需要.为此,我们参照国外的文献[2],设计了单管多重PCR方法,能在单管内一次性完成这3种单基因或多基因缺失的分析.
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胃肠道肿瘤核素诊断
0引言与常规的医学影像诊断技术(超声、X线CT、及MRI等)不同,核医学显像(或核素显像)需要特定放射性核素标记的显像剂即放射性药物,显像时先将放射性药物引入(通过注射或口服等途径)人体内,再通过显像仪器γ相机、单光子计算机断层显像仪(SPECT)或正电子计算机断层显像仪(PET)进行体外平面、全身或断层扫描.
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胃肠胰神经内分泌肿瘤诊治新进展
胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastro -entero -pancreaticneuroendocrine tumors,GEP-NETs)是一种来源于胃肠道散在神经内分泌细胞的相对罕见疾病.尽管被归为同一类肿瘤,但是不同的胃肠胰神经内分泌肿瘤有其生物学多样性.在其诊断,重要的进步在于病理学诊断的规范化以及内镜超声和生长抑素受体显像等各学科的协助诊断.手术治疗仍然是胃肠胰神经内分泌肿瘤的首选治疗手段,但是随着其基因和分子机制的研究,新的靶向治疗药物投入临床试验,一些新的药物,如酪氨酸激酶抑制剂、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂、放射性核素标记生长抑素类似物如90钇(90yttrium,90Y)-DOTA和177镥(177lutetium,177Lu) -DOTA奥 曲 肽(octreotate)被证实在晚期转移患者中有一定疗效.GEP-NETs这种相对罕见疾病的发病率近年来有所上升,患者长期生存率无明显改善,因此,各种基础及临床试验仍是胃肠胰神经内分泌肿瘤的研究重点.
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核医学成像技术及工作人员的放射性防护
核医学是利用核素及其标记化合物进行临床诊断治疗疾病以及生物学研究的一门学科,是现代医学的重要组成部分,对医学的发展有巨大的影响,已成为举世公认的独立学科。核医学成像技术与超声成像技术、X线CT(X-CT)技术、核磁共振成像(MRI)技术是当今医学诊断的四大影像技术,在临床诊疗中均占据举足轻重的地位。超声、X-CT、MRI所获得的影像基本为解剖结构成像,图像清晰。而核医学成像是以核素示踪技术为基础,以组织吸收功能的差异为诊断依据,以放射性浓度为重建变量,将放射性核素标记的分子探针和显像剂、示踪剂引入机体后,探测并记录引入体内靶组织或靶器官的放射性示踪剂发射的γ射线,并以影像的方式显示出来。不仅可以显示脏器或病变的位置、形态、大小等解剖学结构,更重要的是可以同时提供有关脏器和病变的血流、功能、代谢和受体密度的信息,甚至是分子水平的化学信息,因此有助于疾病的早期诊断,这也是核医学成像有特色之处。近年来,由于同时反映功能代谢和解剖形态的新型核医学显像仪器的问世,将单光子发射型计算机断层仪(SPECT)和正电子反射型断层仪(PET)即SPECT/CT,PET/CT,改写了传统的核医学影像由于引入放射性及仪器分辨率的限制不能提供病变细微结构的历史,这是核医学功能代谢显像发展的一个新的里程碑。
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荷瘤小鼠单次化疗后活体探测肿瘤细胞凋亡的实验研究
细胞凋亡(cell apoptosis)见于诸多生理现象和病理情况[1].近年来,细胞凋亡检测技术已有陆续报道[2-4],其中放射性核素标记膜联蛋白Ⅴ体内凋亡显像技术以其无创性、早期性和定量性的优势独树一帜[5,6],其原理是化疗药物诱导肿瘤细胞产生凋亡,而在细胞凋亡早期,由于磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)暴露在细胞膜表面,导致与其有高特异性结合的放射性核素标记的膜联蛋白Ⅴ的摄取增加,通过体外射线探测仪器如单光子发射型计算机断层扫描仪(single photon emission computed tomography,SPECT)、正电子发射型断层扫描仪(positron emission tomography,PET)等,可以观察到肿瘤部位的摄取状况,从而判断肿瘤对化疗疗效的反应.细胞凋亡体内显像可以对肿瘤患者进行治疗疗效的监测、预后的评价以及治疗方案的指导,同时在抗肿瘤新药研发领域也具有重要意义[7,8].
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99mTc标记c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌显像的实验研究
用放射性核素标记癌基因反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肿瘤进行显像,可以探测只有癌基因激活、扩增和过度表达还没有形成实体的肿瘤组织,以实现对肿瘤的早期诊断[1,2].乳腺癌是妇女发病率和死亡率高的主要恶性肿瘤[3],如果能在肿瘤早期鉴别其癌基因的表达类型及临床分期,施行"量体裁衣"式的治疗,可提高乳腺癌治疗的效果.c-erbB2是乳腺癌原癌基因,与乳腺癌的恶性转化和不良预后密切相关[4].本课题以c-erbB2为靶基因,设计一段15 mer与目的基因mRNA互补的反义寡脱氧核苷酸,用放射性核素锝(99mTc)标记,与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)联接,得到反义探针.探针获得受体/配体特异结合的导入特性,通过肿瘤细胞膜上表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的介导进入细胞,增加寡核苷酸的细胞摄取率.本文拟对反义探针在荷瘤小鼠体内的组织分布,以及对癌基因过度表达肿瘤组织的显像进行研究.
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NHS-MAG3在放射性药物标记中的应用
随着分子核医学的迅速发展,一种有效标记蛋白质、小分子肽和DNA寡核苷酸的双功能螯合剂NHS-MAG3(巯基乙酰三甘氨酰-N-羟基丁二酰亚胺酯)应运而生.研究表明,利用NHS-MAG3进行99Tcm标记,得到的标记物的标记率和比放射性高,体内外稳定性好,与血清蛋白的非特异结合低,为核医学提供了多种具有广阔临床应用前景的诊断和治疗的放射性药物.
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放射性核素标记奥曲肽诊断小细胞肺癌的研究进展
小细胞肺癌是神经内分泌肿瘤,起源于APUD(胺前体摄取脱羧化)细胞.其细胞表面高水平表达SSTR(生长抑素受体).奥曲肽是SST(生长抑素)的八肽类似物,它保留了SST类似的活性结构而且有更强的生物学效应和更长的生物半衰期,不易被降解.用放射性核素标记奥曲肽来诊断小细胞肺癌是一种较为理想的无创伤性检查方法.
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125I标记注射用干扰素α2b(假单胞菌)研究雾化吸入与肌肉注射的代谢及组织分布差异
目的:比较采用雾化吸入与肌肉注射两种不同方式给药注射用重组人干扰素α2b (假单胞菌)(IFNα2b),其在兔体内的药代动力学和组织分布差异。方法采用125I标记法对IFNα2b进行放射性核素标记,按45万IU/kg体质量(参考人推荐用量15万IU/kg体重)的剂量分别进行雾化吸入和肌肉注射给药,利用放射性同位素示踪技术研究IFNα2b在大耳白兔体内的药代动力学;在0.5、2、4、8和12 h通过活体成像和γ计数检测不同组织和肺脏不同部位的干扰素分布情况。结果药代动力学结果表明,肌肉注射组的0~24 h的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-24)为(39.20±1.89)ng·h-1·ml-1,平均驻留时间(MRT)为(6.90±0.21)h,清除速率(CL)为(0.09±0.004)ml·kg-1·h-1,半衰期(T1/2)为(7.30±0.38)h;雾化吸入组的AUC0-24为(45.10±4.65)ng·h-1·ml-1, MRT为(16.10±1.37)h, CL为(0.06±0.010)ml·kg-1·h-1,T1/2为(12.10±1.19)h。体内组织分布结果表明,雾化吸入给药方式IFNα2b主要分布在肺中,12 h仍可观察到肺中有放射性信号,而肌肉注射方式在2h可观察到肾脏中有较高的放射性信号,之后逐渐减弱。结论雾化吸入给药较肌肉注射给药能够明显延长IFNα2b在体内的作用时间,且肺部药物浓度更高。与常规肌肉注射相比,雾化吸入IFNα2b的给药方式可能对治疗肺部病毒性感染和呼吸道感染具有更长的药物作用时间和更好的疗效。
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探讨氟[18F]脱氧葡糖注射液的稳定性
氟[18F]脱氧葡糖注射液是通过利用放射性核素标记的葡萄糖类似物,是正电子类放射性药物的代表,是目前临床常用的糖代谢显像剂,在肿瘤分期,寻找肿瘤原发灶和疗效观察方面发挥着重要作用.氟[18F]脱氧葡糖注射液其物理半衰期比较短,因此一般于临用前由医疗机构自行制备和合成.由于正电子类放射性药物的特殊性,临床使用前不可能对每批次正电子类放射性药物进行全项检验,为确保用药安全有效,中国药典附录《正电子类放射性药品质量控制指导原则》规定了对含18F的放射性药品的放射化学纯度在每批药品使用前要进行质量控制.下面是对我院自制的连续3批氟18F脱氧葡糖注射液的放射化学纯度在不同时间进行检测的情况分析.
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分子影像在干细胞治疗中的应用
背景:目前干细胞治疗的研究已能够持续广泛地观察不同种类的干细胞,但是还没有任何一种单独的成像模式能够全面评价干细胞治疗的效果。
目的:介绍追踪干细胞治疗的不同细胞标记方法、成像技术,对分子影像学与干细胞治疗未来的临床应用做一展望。
方法:由第一作者检索2005年1月至2012年12月PubMed数据库有关分子影像学用于追踪干细胞治疗,细胞的标记方法和成像技术的应用,干细胞治疗理想的成像模式,以及不同干细胞进行分子影像学跟踪的进展相关文献,英文检索词为“Molecular imaging,Stem cel therapy,Cel transplantation,Regenerative medicine”,计算机初检得到269篇文献,根据纳入标准保留20篇进一步归纳总结。
结果与结论:目前,为了持续追踪移植细胞的生存能力和生物学功能,大多数细胞治疗需在不同时期处死动物进行免疫组织化学分析,不仅操作复杂而且浪费了大量的实验资源。分子影像学运用影像技术显示组织、细胞和亚细胞水平的特定分子,反映活体状态下分子水平变化,非侵入性的对参与生理和病理过程的分子进行定性或定量的可视化观察,增加了干细胞治疗的可行性,帮助阐明治疗过程中新的生物学机制。 -
131 I标记槲皮素的方法
目的:探索131 I 标记槲皮素的方法并对其相关实验进行研究。方法用氯胺 T法对槲皮素进行131 I标记,对标记产物用薄层色谱法分析其标记率及放化纯,产物于37℃温育以观察其体外稳定性,用甲状腺癌细胞FTC-133/8505C观察其生物活性。结果氯胺T法为佳标记方法,标记率达96.5%,放化纯达98.3%。产物在体外稳定。结论用氯胺T法对Qu进行131 I 标记简单高效,稳定性好,且标记产物生物活性未受到明显破坏。
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放射性探头在前哨淋巴结定位中的应用
用放射性核素标记肿瘤组织,指导外科手术并非是新概念.早在1949年,Selverstore等[1]报道了用手持γ-探头探测放射性标记的骨骼病灶,引导手术切除原发骨肿瘤和骨转移性病灶.1977年,Cabanias[2]在阴茎癌病人中提出前哨淋巴结的概念,认为前哨淋巴结是癌转移的首发部位,并且常常是肿瘤唯一转移的淋巴结.近年,随着单克隆抗体技术的发展,肿瘤组织的特异性标记可通过发射γ-射线的核素标记抗体而达到.
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核医学诊断技术在生殖领域中的应用
随着核医学诊断技术的发展,生殖领域也逐渐得到广泛应用,某些独具特色的项目甚至已形成诊断常规.一、体外放射标记免疫分析技术这是一类以放射性核素标记抗原或抗体为示踪物,竞争或非竞争性免疫结合反应为基础的微量活性物质检测技术,是建立在放射性分析的高度灵敏性和免疫反应高度特异性基础之上的超微量分析技术,特异性、准确性、灵敏度极高,重复极好,测量简便,成本低,临床应用十分广泛.
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Iodogen法125I标记CD28单克隆抗体2F5的方法
目前放射性核素125碘(125I)标记技术已广泛应用于分子生物学、免疫学等基础医学研究及相关临床领域,但关于单抗2F5的放射性核素标记国内外尚未见报道,本文利用Iodogen法标记单抗2F5,对标记产物的生物学活性及体外稳定性进行探索,为不同放射性碘(123I、125I、131I)标记单抗2F5以及建立放射免疫显像和靶向治疗方法提供实验依据.
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放射性核素标记单克隆抗体靶向治疗血液系统恶性肿瘤
血液系统恶性肿瘤,包括急性白血病(AL)、慢性白血病、恶性淋巴瘤等,是严重威胁人类健康和生命的疾病.虽然骨髓移植是目前根治恶性血液疾病先进的方法,但由于人类白细胞抗原(HLA)配型成功几率小,无法满足临床的需要,而且并不是所有的血液系统恶性肿瘤患者都可以接受骨髓移植,所以目前对血液系统恶性肿瘤的治疗仍以传统的放疗和化疗为主,再辅以分子靶向治疗.
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肿瘤预定位反义显像的应用研究和进展(文献综述)
放射性核素标记抗肿瘤单抗的放射免疫显像(Radioim-munoimaging,RII)和治疗(Badioimmunotherapy,BIT)是当今肿瘤核医学研究热门领域之一.近年来,随着高亲和力单抗的问世,核素标记技术的改进,显像技术的发展等,该领域已取得了令人瞩目的成绩,但亦存在着许多亟待解决的问题,其中突出的问题是:①标记抗体进入肿瘤内部的数量甚少;②肿瘤/非肿瘤(T/NT)比值,即标记抗体浓聚于肿瘤部位与肿瘤周围正常组织或循环血液问的比值太低,使得体积较小或位于某些特殊脏器的肿瘤显像以及治疗时投入的有效剂量受到限制;此外,药代动力学研究还表明,标记抗体在肿瘤内定位和从正常组织脏器(本底)清除相对缓慢,不利于短半衰期核素的应用.
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生长抑素受体显像技术在肿瘤诊断中的应用(文献综述)
生长抑素释放抑制因子(somatostatin, SS)是20世纪70年代中期分离出的一种多肽,生理活性广泛,能抑制垂体及胃肠道分泌的多种激素.SS主要通过与细胞膜上的生长抑素受体(SSR)结合而发挥作用.天然的SS半减期仅为(2~3)min,用放射性核素标记比较困难.1982年,瑞士的Bauer等合成了含8个氨基酸的SS类似物奥曲肽(octreotide),不仅半衰期延长,而且作用增强,用放射性核素标记后,其分子结构、水化程度和所带电荷都使之易与SSR结合.受体和配体的结合具有高度的特异性和组织专一性,研究发现所有的神经内分泌肿瘤、肺癌和其它一些肿瘤都含有高密度的高亲和力的SSR,可以与SS特异性结合.生长抑素受体显像技术(SRS)就是用适当的放射性核素标记SS类似物,把放射性核素介导到上述肿瘤组织,进行肿瘤灶和转移灶的定位诊断.关于SRS技术在肿瘤诊断中的应用已经有较多报道,现综述如下.