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抗肿瘤活性的新型高效细胞穿膜肽[Cys-CPT2,9]penetratin的设计及活性评价
本文将半胱氨酸-喜树碱(Cys-camptothecin,Cys-CPT)引进penetratin第2、9位,合成新型穿膜肽类似物[Cys-CPT2,9] penetratin,旨在探索一条具有强穿膜活性且具有抗肿瘤活性的新型细胞穿膜肽.通过激光共聚焦实验和流式细胞术观察[Cys-CPT2,9] penetratin在HeLa细胞中荧光摄取情况,使用不同内吞抑制剂研究[Cys-CPT2,9] penetratin的细胞摄取机制,后通过MTT实验测试[Cys-CPT2,9] penetratin抗肿瘤活性.在激光共聚焦及流式细胞术实验中显示[Cys-CPT2,9] penetratin的穿膜活性显著增强,它的胞内荧光强度比penetratin明显提高5倍.而对于[Cys-CPT2,9] penetratin的细胞摄取机制,它主要通过网格蛋白和巨胞饮内吞途径进入细胞内.[Cys-CPT2,9] penetratin对HeLa细胞具有抗肿瘤活性,并强于抗肿瘤药物喜树碱.结果说明,[Cys-CPT2,9]penetratin是一个新的高膜转导活性的细胞穿膜肽,同时对HeLa细胞具有抗肿瘤活性.
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PEG修饰对PEI聚电解质复合物的药学特性及人乳腺癌细胞的摄取效率影响的研究
荧光素阴离子葡聚糖(DFA)和寡核苷酸(ODN)呵以和带正电的聚乙亚胺(PEI)通过自组装的方式形成聚电解质复合物.为了调查PEG修饰对PEI聚电解质复合物的约学特性及细胞摄取效率的影响,我们进行了此项研究.DFA和ODN与PEI及PEI-PEG通过吹吸混匀形成聚电解质复合物.我们分别采用动态光散射法及琼脂糖凝胶电泳法对聚电解质复合物的表而性质(粒径,ξ电位),PEI及PEI-PEG延滞ODN的能力等进行了评价.MCF-7对DFA/PEI及DFA/PEI-PEG的摄取效率通过流式细胞术进行测量,并通过激光扣描聚焦显微镜(CLSM)法来观察DFA/PEI及DFA/PEI-PEG聚电解质复合物的细胞内摄作用. N/P比对ODN/PEI聚电解质复合物的粒径和ξ电位影响很大,而ODN/PEI-PEG复介物的粒径受N/P比的影响要小一些,在N/P=2～16范围内,ODN/PEI-PEG复合物的粒径在30～100nm右.PEI和PEI-PEG在N/P比等于4时就开始出现延滞ODN的现象,彻底延滞在N/P比等于8时出现.MCF-7的细胞摄取效率与DFA浓度及转染时间呈正相关,在适宜条件下.细胞摄取率可超过99%.本实验结果显示通过隐形修饰的PEI自组装形成的聚电解质复合物可以提高其作为基凶载体递送基因进入细胞的能力.
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99mTc标记c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌显像的实验研究
用放射性核素标记癌基因反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肿瘤进行显像,可以探测只有癌基因激活、扩增和过度表达还没有形成实体的肿瘤组织,以实现对肿瘤的早期诊断[1,2].乳腺癌是妇女发病率和死亡率高的主要恶性肿瘤[3],如果能在肿瘤早期鉴别其癌基因的表达类型及临床分期,施行"量体裁衣"式的治疗,可提高乳腺癌治疗的效果.c-erbB2是乳腺癌原癌基因,与乳腺癌的恶性转化和不良预后密切相关[4].本课题以c-erbB2为靶基因,设计一段15 mer与目的基因mRNA互补的反义寡脱氧核苷酸,用放射性核素锝(99mTc)标记,与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)联接,得到反义探针.探针获得受体/配体特异结合的导入特性,通过肿瘤细胞膜上表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的介导进入细胞,增加寡核苷酸的细胞摄取率.本文拟对反义探针在荷瘤小鼠体内的组织分布,以及对癌基因过度表达肿瘤组织的显像进行研究.
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叶酸受体介导99mTc标记c-erbB2癌基因反义寡核苷酸的乳腺癌细胞摄取率
目的研究叶酸受体介导的99mTc标记c-erbB2癌基因反义寡核苷酸乳腺癌细胞的摄取率.方法用双功能鳌合剂次已酰双半胱氨酸(EC)连接15mer寡脱氧核苷酸(ODN)和叶酸(FA),形成ODN-EC-FA,用99mTc标记,形成99mTc-ODN-FA.同样的方法不加叶酸,形成99mTc-ODN.加2μCi的99mTc-ODN-FA和99mTc-ODN到107cell/瓶对数生长期乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别于20、40、60、120、180、240分钟测定细胞的摄取率.结果乳腺癌细胞对99mTc-ODN-FA的摄取率明显高于99mTc-ODN.结论叶酸配体与受体的特异结合使寡核苷酸的乳腺癌细胞摄取率明显增加.
