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Rab5在胰腺癌细胞BxPC3中对Notch1活性的调节
目的 本研究拟阐明内吞调节蛋白Rab5在Notch活化中的作用.方法 用RNA干扰的方法抑制BxPC3细胞中Rab5蛋白的表达,用Western blot测定Notch1活性型Notch ICD的表达.用Wortmannin和LY294002抑制PI3激酶的活性,观察Notch活性的变化.结果 抑制Rab5蛋白的表达,或者抑制PI3激酶的活性后,Notch1的活性型Notch ICD的表达量均显著下降,同时BxPC3细胞的生长受到抑制.结论 在胰腺癌细胞BxPC3中内吞调节蛋白质Bab5和PI3激酶在Notch活化中起着关键的作用,提示Notch的活化依赖于内吞.
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Dynamin-I的功能结构域及其在突触囊泡内吞过程中的作用
在神经系统中,突触是神经元间信息传递的桥梁.突触囊泡通过胞吐和内吞作用完成一次突触囊泡循环.Dynamin-I(又称发动蛋白-1),为三磷酸鸟苷酶(GTPase)家族的一员,由四个功能结构域组成,分别为N末端GTPase域、普列克底物蛋白同源域、GTPase效应结构域和C末端脯氨酸和精氨酸富集域.目前大量研究证明,dyanmin-I的四个功能结构域各自具有特定的功能、接受不同的调控机制,在突触囊泡胞吞过程中发挥重要作用.因此深入研究dyanmin-I的四个功能结构域以及其在突触囊泡内吞过程中的生理调控的方式和位点,具有重要的理论和实践意义.
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G蛋白偶联受体失敏及内吞相关蛋白的研究进展
G蛋白偶联受体的 失敏和内吞对受体功能的调节非常重要，但其具体机制并不十分清楚，在某些方面还存在分 歧。近年来的研究发现，第二信使激酶、G蛋白偶联受体激酶、arr estin及笼形蛋白等在此过程中扮演了重要的角色，本文就与受体失敏和内吞关系密切的几 种蛋白的研究进展进行综述。
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前蛋白转化酶枯草溶菌素9在胆固醇代谢中作用的研究进展
血浆LDL-C水平与动脉粥样硬化密切相关.清除血浆LDL-C主要通过肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)介导的内吞过程.家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)是常染色体显性遗传病,由于LDLR及LDLR配体(apolipoprotein B,ApoB100)的基因突变所致.2003年5月,Abifadel等[1]发现前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proproteinconvertaqse subtilise kexin 9,PCSK9)与FH有关.
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突触内吞关键蛋白Dynamin在小鼠耳蜗内毛细胞中的表达研究
目的：研究生理情况下Dynamin各亚型在小鼠耳蜗内毛细胞(IHC)的表达分布特点，为探讨其在毛细胞内可能发挥的生理功能以及与听信号传导的关系做铺垫。方法取成年小鼠耳蜗基底膜行免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察Dynamin各亚型表达及定位分布情况。结果Dynamin各亚型在小鼠耳蜗内毛细胞中均有表达。其中，Dyna?min-1表达于整个内毛细胞内，Dynamin-2点状分布在内毛细胞胞质，Dynamin-3高表达于内毛细胞核下近螺旋神经节区域。结论网格蛋白介导内吞过程是毛细胞内吞作用的重要机制，作为该过程中的关键蛋白，Dynamin各亚型在耳蜗内毛细胞中均有表达，提示Dynamin在内毛细胞中可能发挥着重要的生理功能。
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谷甾醇葡萄糖苷和卞泽双重修饰肝实质细胞靶向阳性脂质体介导的基因转染和抗乙肝病毒作用
目的 研究载乙型肝炎病毒(HBV)反义寡核苷酸的双重表面修饰肝实质细胞靶向阳性脂质体的基因转染,抗乙肝病毒作用和其介导基因转染的机制.方法 以3β-[N-(N′,N′-二甲氨基乙基)-氨甲酰基]胆固醇(DC-Chol)和二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)为脂材,分别以谷甾醇葡萄糖苷(sito-G)和卞泽(Brij 35)为膜表面修饰成分,制备载HBV反义寡核苷酸的阳性脂质体.采用大鼠原代肝实质细胞和人肝癌细胞HepG 2.2.15,通过流式细胞分析、荧光显微镜观察和酶联免疫吸附试验(ELISA),考察脂质体对基因转染的促进作用及其病毒抑制作用;通过评价渥曼青霉素、尼日利亚菌素以及无涎胎球蛋白对其病毒抑制作用的影响,探讨其转染机制.结果 以sito-G和Brij 35对脂质体进行双重表面修饰,显著提高了脂质体的转染率和病毒抑制作用;荧光显微镜下观察到较强转染,反义寡核苷酸的胞内分布以在细胞核中为主;渥曼青霉素、尼日利亚菌素和无涎胎球蛋白均不同程度地降低了载反义寡核苷酸脂质体的病毒抑制作用.结论 Brij 35和sito-G双重修饰阳性脂质体显示出较高的基因转染效率和显著的病毒抑制作用,其基因转染过程以内吞和膜融合为主,并表现出肝实质细胞表面去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)的靶向选择性.
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抗肿瘤活性的新型高效细胞穿膜肽[Cys-CPT2,9]penetratin的设计及活性评价
本文将半胱氨酸-喜树碱(Cys-camptothecin,Cys-CPT)引进penetratin第2、9位,合成新型穿膜肽类似物[Cys-CPT2,9] penetratin,旨在探索一条具有强穿膜活性且具有抗肿瘤活性的新型细胞穿膜肽.通过激光共聚焦实验和流式细胞术观察[Cys-CPT2,9] penetratin在HeLa细胞中荧光摄取情况,使用不同内吞抑制剂研究[Cys-CPT2,9] penetratin的细胞摄取机制,后通过MTT实验测试[Cys-CPT2,9] penetratin抗肿瘤活性.在激光共聚焦及流式细胞术实验中显示[Cys-CPT2,9] penetratin的穿膜活性显著增强,它的胞内荧光强度比penetratin明显提高5倍.而对于[Cys-CPT2,9] penetratin的细胞摄取机制,它主要通过网格蛋白和巨胞饮内吞途径进入细胞内.[Cys-CPT2,9] penetratin对HeLa细胞具有抗肿瘤活性,并强于抗肿瘤药物喜树碱.结果说明,[Cys-CPT2,9]penetratin是一个新的高膜转导活性的细胞穿膜肽,同时对HeLa细胞具有抗肿瘤活性.
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胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ阿片受体下调的影响及可能机制
目的:观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体(I1R)对阿片预处理引起的μ阿片受体(MOR)下调的影响及可能的分子基础.方法:以CHO-μ和CHO-μ/IRAS (imidazoline receptor antisera-selected protein)细胞作为研究对象,用[3H]diprenorphine结合实验方法,确定胍丁胺-I1R作用系统对MOR下调的影响以及可能产生的分子基础.结果:在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,DAMGO([D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin,1 μmol*L-1)处理两细胞12 h后均可出现MOR的下调,胍丁胺(1-100 nmol*L-1)浓度依赖性地抑制CHO-μ/IRAS细胞中MOR的下调,而相同浓度胍丁胺在CHO-μ细胞中无此作用.胍丁胺这一作用能被I1R阻断剂依法克生(efaroxan,Efa)所阻断.DAMGO(1 μmol*L-1)预处理两细胞30 min后,MOR均发生内吞.胍丁胺(1 nmol*L-1-1 μmol*L-1)和DAMGO共同预处理两细胞30 min,胍丁胺能浓度依赖性地抑制由DAMGO预处理引起的CHO-μ/IRAS细胞中MOR的内吞,而相同浓度胍丁胺对CHO-μ细胞中由DAMGO预处理引起的MOR的内吞无显著影响,且这一作用同样能被依法克生所阻断,提示胍丁胺通过激活I1R对DAMGO预处理引起的MOR内吞具有显著的抑制作用,这可能是胍丁胺-I1R作用系统抑制MOR下调的分子基础.结论:胍丁胺通过激活I1R抑制阿片激动剂诱导的MOR的内吞,进而进一步抑制MOR下调.
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包载香豆素-6的PEO-(hb-PG)-g-PCL杂臂聚合物胶束的体外评价,细胞摄取以及跨膜转运
当今聚合技术的发展为合成各种非线形两亲性聚合物提供了手段,对于包载模型药物的杂臂聚合物胶束的摄取和跨膜转运却鲜有报道.本文对两种不同分子量的PEO-(hb-PG)-g-PCL杂臂聚合物胶束的物理性质和Caco-2细胞对其包载的香豆素-6 (C6)的摄取量进行了比较,随后选择了PEO113-(hb-PG)15-g-PCL22聚合物胶束来研究PMs-C6在Caco-2单层的摄取和转运.细胞摄取和跨膜转运试验发现,对于Caco-2细胞单层,PMs是很好的摄取和跨膜转运促进剂.对内吞通路的研究发现,PMs-C6的摄取是通过小窝蛋白介导的内吞途径而非网格蛋白介导的内吞途径进行的.本文中制备的PEO-(hb-PG)-g-PCL杂臂聚合物胶束有较小的临界胶束浓度,对Caco-2细胞无显著细胞毒性,以及强大的增加Caco-2细胞单层对疏水性荧光探针C6摄取的作用提示很有潜力用于口服药物递送.
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人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能
目的 利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能.方法 采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋白在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点.结果 HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9-EGFP在CHO细胞和S4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位.结论 HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节.
关键词： HSD-9 人睾丸组织特异表达基因 clathrin 内吞 -
胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ-阿片受体内吞的影响及机制探讨
[目的]观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体(I1R)对阿片预处理引起的μ阿片受体(MOR)内吞的影响及可能的分子基础.[方法]以CHO-μ和CHO-μ/IRAS (imidazoline receptor antisera-selected protein)细胞作为研究对象,用[3H]diprenorphine结合实验方法,确定胍丁胺.I1R作用系统对MOR内吞的影响以及可能产生的分子基础.[结果]在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,DAMGO([D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin,1 μmol/L)预处理两细胞30 min后,MOR均发生内吞.胍丁胺(1 nM-1 μM)和DAMGO共同预处理两细胞30 min,弧丁胺能浓度依赖性地抑制由DAMGO预处理引起的CHO-μ/IRAS细胞中MOR的内吞,而相同浓度胍丁胺对CHO-μ细胞中由DAMGO预处理引起的MOR的内吞无显著影响,且这一作用能被依法克生所阻断,提示胍丁胺通过激活I1R对DAMGO预处理引起的MOR内吞具有显著的抑制作用.Ser357 磷酸化是影响MOR内吞的重要因素之一,而胍丁胺(10 nM-1μM)和DAMGO共同预处理CHO-μ/IRAS和CHO-μ细胞30 min,对两细胞中MOR ser375磷酸化作用均无显著性影响,提示胍丁胺.I1R作用系统并不是通过抑制MOR ser375 磷酸化作用而抑制MOR内吞的.[结论]胍丁胺通过激活I1R可抑制DAMGO处理所致的μ-阿片受体内吞,此作用可能与胍丁胺抑制阿片依赖有关,但其分子机制并不是通过抑制MOR ser375 磷酸化作用而抑制MOR内吞.
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晚期糖基化修饰白蛋白在实验性BREC内吞中的作用
目的研究晚期糖基化修饰白蛋白(AGE modified bovine serum albumin,AGE-BSA)撤退对体外培养牛视网膜内皮细胞(bovine retinal endothelial cell,BREC)内吞活性及细胞内信号传递的影响.方法 BREC事先在AGE-BSA下持续作用24h,研究金雀异黄素(genistein,Gen)对AGE-BSA撤退后12h和24h的BREC内吞活性以及eNOS活性和NO浓度的变化的影响.结果 AGE-BSA撤退12h和24h后BREC内吞、eNOS活性和NO的浓度下调,Gen在对以上变化没有明显的影响.结论 AGE-BSA撤退过程中BREC内吞的变化不依赖于酪氨酸蛋白激酶活性物,而直接或间接与eNOS-NO系统相联系.
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Genistein影响AGE-BSA诱导牛视网膜微血管内皮细胞内吞的实验研究
目的视网膜内皮细胞内吞加强和视网膜微血管渗漏密切相关.近年的研究表明晚期糖基化终末产物(AGEs)可造成实验动物视网膜微血管的渗漏,但是其确切机制尚不明确.本实验研究金雀异黄素(genistein Gen)对糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)诱导视网膜微血管内吞、eNOS和NO变化的影响,以探讨糖基化终末产物造成视网膜微血管渗漏的机制.方法体外培养并纯化牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)近融合后进行实验.检测不同浓度AGE-BSA在不同时间对BREC内吞辣根过氧化物酶(HRP)情况.在此基础上研究Genistein对AGE-BSA诱导BREC内吞、eNOS活性和NO浓度的影响.结果Gen抑制AGE-BSA诱导体外培养的BREC内吞,并对由AGE-BSA诱导的eNOS-NO系统活化也有抑制作用.结论DR早期微血管渗漏发生机制较为复杂,AGE-BSA诱导内皮细胞内吞活跃和渗漏发生有关.Gen作为大豆提取物可以抑制实验性BREC内吞,对于DR的防治具有重要意义.
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泛素蛋白酶体系统组成及其在疾病中的作用
人体组织细胞中存在多种蛋白降解途径,目前研究多的是溶酶体降解途径和泛素-蛋白酶体降解途径,其中溶酶体途径主要降解细胞内吞的胞外蛋白质,泛素化降解途径主要降解胞内泛素标记的蛋白质.泛素蛋白降解系统是细胞内一系列生命进程的重要调节方式,与疾病的发生发展关系密切.目前的研究热点主要是针对泛素蛋白酶体系统的治疗疾病的新方法研究.该文就泛素蛋白酶体系统的组成及其在癌症、病毒感染、神经变性性疾病、糖尿病中的作用和治疗进行综述.
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衔接蛋白2敲除对AT1受体介导的AngⅡ内吞的影响
目的 通过RNAi沉默AP2-μ2亚单位的表达,观察其是否影响AT1R介导的AngⅡ内吞.方法 通过设计构建的AP2-μ2 RNAi表达载体,转染H9C2细胞,通过Western印迹验证沉默效果;激光共聚焦显微镜观察沉默AP2-μ2基因对AT1R介导的AngⅡ内吞的影响.结果 蛋白质水平检测siRNA重组质粒对AP2-μ2蛋白表达的影响,可见pSH1Si-AP2 plasmid-1表达质粒可明显抑制AP2-μ2蛋白表达.给予AngⅡ不同时间点,可见其在15 min时受体内吞至胞内数量多.重组质粒沉默AP2-μ2亚单位后,外源加入AngⅡ后,可明显抑制AT1R介导的AngⅡ内吞. 结论 AT1R介导AngⅡ内吞的发生,与其他GPCR一样,主要通过网格蛋白依赖的内吞方式进行,并且需要AP2蛋白参与.
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HIP1基因沉默对HeLa细胞内吞的影响
目的 探讨HIP1沉默后对HeLa细胞内吞的影响.方法 转染si-HIP1重组质粒到HeLa细胞中；Western印迹方法检测转染siHIP1重组质粒的HeLa细胞中HIP1、表皮生长因子受体(EGFR)和AP2蛋白表达情况；激光共聚焦显微镜检测不同时间HeLa细胞EGF内吞情况.结果 转染si-HIP1重组质粒能有效抑制HeLa细胞HIP1蛋白表达,细胞内EGFR和AP2蛋白表达降低,同时减慢EGF在细胞中内吞和降解速度.结论 HIP1通过降低EGFR和AP2表达影响HeLa细胞对EGF的内吞.
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EGFR的内吞转运机制
上皮生长因子受体(EGFR)是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体,在增殖和迁移等基本细胞功能中起着关键作用.已经有大量的研究对配体刺激的EGFR信号转导的分子机制进行了分析,但这些研究主要集中在EGFR转运失调导致的促有丝分裂的信号转导通路,对EGFR内吞转运机制的途径阐述得仍不透彻.本篇综述主要对EGFR内化过程中的不同内吞转运途径及其涉及到的分子机制进行了总结.
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轮状病毒的早期细胞侵入机制
轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界范围内婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的主要传染性病原.该无囊膜病毒可以通过多种方式侵入细胞,而且不同的病毒毒株在细胞侵入机制上存在较大差异.阐明RV的细胞侵入机制将有助于解析病毒的致病机制并有利于疾病防控,降低其所造成的社会负担和经济损失.本文对RV在细胞侵入的早期阶段的侵入机制作一综述.
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蓖麻毒素在细胞内逆向转运途径的研究进展
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒蛋白,能抑制蛋白质合成.近年来被用来合成肿瘤导向药物一免疫毒素,在临床应用中仍具有一定的副作用.研究Ricin在细胞内的逆向转运途径有助于其在临床应用中更加完善.本文就Ricin在细胞内的逆向转运途径作一综述.
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网格蛋白介导的突触囊泡内吞机制
突触囊泡在神经末梢进行着精确而快速地胞吐、内吞循环.近年来进行的研究发现网格蛋白介导的内吞是囊泡蛋白回收的主要途径.本文介绍了这些在内吞早期阶段发生的事件和参与分子的研究进展.
