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Pep-1-vMIP-Ⅱ对小鼠抗HIV-Ⅰ基因表达的作用
目的 探讨融合蛋白Pep-1-vMIP-Ⅱ在影响宿主ARGs基因表达抵抗HIV-Ⅰ感染中的作用.方法 小鼠背部涂抹Pep-1-vMIP-Ⅱ2 h后,用免疫组织化学方法测定不同组织器官中vMIP-Ⅱ的穿膜情况.用实时定量PCR,检测24h后不同组织器官中ARGs mRNA表达水平;用Graphpad Prism 5软件分析实验数据.结果 皮肤涂抹Pep-1-vMIP-Ⅱ组2h后vMIP-Ⅱ在肾脏分布明显增加(P＜0.05);涂抹Pep1-vMIP-Ⅱ 24 h后,白细胞、肾、心、肝和肺中CCL5的mRNA表达水平有明显差异(P＜0.05),脑组织中CCL5的表达未见明显增加;MX1、MX2在多种组织中都表达上调(P＜0.05).结论 Pep-1-vMIP-Ⅱ可以穿透小鼠皮肤进入肾脏组织,主要通过激活CCL5基因表达发挥调控作用.
关键词： 细胞穿膜肽 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ 人疱疹病毒8 -
病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ在毕赤酵母中的表达及其抗HIV-1活性
目的 在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性.方法 通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达.表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot 鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用.结果 重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P＜0.05),其IC50值为1.35 ng/ml.结论 已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性.
关键词： 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ 毕赤酵母 HIV-1 -
病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ的研究进展
病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(viral macro-phage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)也称vCCL2,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者或移植病人用免疫抑制剂后卡波肉瘤的病原体卡波西肉瘤相关孢疹病毒,即人疱疹病毒-8 K4基因编码的小分子蛋白质,与人CC类趋化因子巨噬细胞炎性蛋白Ⅰ在氨基酸序列上有较高的同源性[1],是人趋化因子的类似物.这种蛋白质有其独特性,即使在不同亚科之间,也可广泛结合趋化因子受体:结合CCR 1、CCR 2、CCR 5、CXC趋化因子受体(CXCR 4)发挥拮抗作用,结合CCR3和CCR8则挥激活效应[2].
关键词： 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ 趋化因子 趋化因子受体 受体拮抗剂 综述
