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异丙肾上腺素活化蛋白激酶Cε诱导心肌细胞ERK磷酸化
目的 研究异丙肾上腺素(Iso)刺激心肌细胞后是否激活PKCε,探讨直接被cAMP激活的交换蛋白(Epac)在其中的作用及其与ERK信号通路的关系.方法 以原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞为实验细胞,用β肾上腺素能受体(β-AR)激动剂Iso、Epac激动剂8-CPT、Epac抑制剂Epac R279K(DN)及腺病毒编码兔肌肉cAMP依赖的蛋白激酶抑制剂(Ad.PKI)和PKCε转位抑制肽处理细胞,Western blot检测细胞颗粒部分PKCε及pERK1/2,激光共聚焦显微镜观察PKCε转位情况.结果 Iso引起心肌细胞颗粒部分PKCε增加,PKCε转位于胞核周围.8-CPT增加细胞颗粒部分PKCε(P＜0.05).Epac R279K感染细胞后再予Iso处理,颗粒部分PKCε与对照组相比无增加.Ad.PKI未抑制Iso引起的颗粒部分PKCε增加(P＜0.01).PKCε转位抑制肽阻断Iso诱导的ERK1/2磷酸化.结论 心肌细胞中β-AR通过Epac介导以不依赖于PKA的方式活化PKCε并诱导ERK1/2磷酸化.
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腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移的心肌保护作用
目的蛋白激酶Cε(Protein Kinase C ε,PKCε)转基因小鼠表现了保护心肌缺血/再灌注损伤的遗传特性(心肌保护表型).本文旨在研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接的PKCε基因转移对心肌缺血-再灌注损伤的影响.方法通过克隆PKC ε cDNA到人类5型腺病毒基因组DNA的E1区建立表达PKCε基因的重组腺病毒.直接注射重组腺病毒3.3×1010菌落形成单位(pfu)/体重(kg)到小鼠(10～13周),对照鼠被直接注射相同剂量的空载腺病毒.Western免疫印迹被用于测定PKC ε蛋白质表达水平.通过冠状动脉阻断/再灌注、染色、照像和微机计算进行心肌梗死分析.结果PKC ε重组腺病毒直接心肌注射优于静脉注射;直接心肌注射后48 h,基因转移鼠心肌PKCε蛋白质表达水平比对照鼠增加近4倍.心脏重、左室重、危险区重和危险区重/左室重百分数在PKCε基因转移和对照小鼠之间无显著差异,而PKCε基因转移小鼠的梗死重[(35.4±3.1)mgvs(10.3±1.3)mg]、梗死/危险区域百分数(51.1%±0.3%vs17.0%±2.6%)、梗死/左室百分数(30.0%±3.0% vs 9.2%±0.5%)明显低于对照鼠(均P＜0.01).结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移小鼠表现了对心肌梗死的保护作用.
关键词： 基因治疗 蛋白激酶Cε(PKCε) 心肌保护 -
腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心功能损害
目的本文旨在研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接PKCε基因转移对左室收缩功能的影响.方法使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体.直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒.Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平.用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左室收缩功能.结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左室大收缩压、大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左室舒张末压、舒张压明显升高(p<0.01),异丙肾上腺素激发后左室dP/dt剂量依赖的升高明显减弱(p<0.01),PKCε基因转移鼠心脏/体重比也较对照鼠明显增加(p<0.01).结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左室收缩功能的损害,导致了心肌肥厚和心衰.
关键词： 基因转移 蛋白激酶Cε(PKCε) 心肌收缩功能 心衰 -
腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心肌损害
目的研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接蛋白激酶(PK)Cε基因转移对左心室收缩功能的影响.方法使用标准方法建立表达PK Cε基因的重组腺病毒载体.直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒.Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平.用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左心室收缩功能.结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左心室大收缩压、大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左心室舒张末压、舒张压明显升高(P＜0.01),异丙肾上腺素刺激后左心室dP/dt随剂量递增的依次升高明显抑制(P＜0.01),PKCε基因转移鼠心脏质量/体质量比也较对照鼠明显增加(P＜0.01).结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左心室收缩功能降低,导致了心肌肥厚和心力衰竭.
关键词： 基因转移 蛋白激酶Cε(PKCε) 心肌收缩功能 心力衰竭
