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萎胃消对萎缩性胃炎癌前病变患者PTEN和ERK2蛋白表达的影响
目的:观察萎胃消对慢性萎缩性胃炎伴胃黏膜上皮异型增生或/和不完全型结肠上皮化生的治疗效果及PTEN和ERK2蛋白表达的影响.方法:60例患者随机分为治疗组和对照组.治疗组给予萎胃消颗粒,对照组给予维酶素,疗程3个月.观察临床症状和体征、胃镜和病理组织学变化及PTEN和ERK2的表达.结果:治疗前后症状缓解总有效率:治疗组90.00％,对照组55.67％；胃镜和病理改变总有效率:治疗组70％,对照组33.33％；2组间比较差异均有显著性(P＜0.01).PTEN和ERK2表达:治疗组治疗前后PTEN和ERK2表达差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),而对照组治疗前后PTEN和ERK2表达水平变化不明显.结论:萎胃消具有良好的胃癌前病变逆转治疗效应,其上调抑癌基因蛋白PTEN的表达和有效抑制ERK信号通路的异常激活可能是萎胃消治疗萎缩性胃炎癌前病变的部分作用机理.
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异丙肾上腺素活化蛋白激酶Cε诱导心肌细胞ERK磷酸化
目的 研究异丙肾上腺素(Iso)刺激心肌细胞后是否激活PKCε,探讨直接被cAMP激活的交换蛋白(Epac)在其中的作用及其与ERK信号通路的关系.方法 以原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞为实验细胞,用β肾上腺素能受体(β-AR)激动剂Iso、Epac激动剂8-CPT、Epac抑制剂Epac R279K(DN)及腺病毒编码兔肌肉cAMP依赖的蛋白激酶抑制剂(Ad.PKI)和PKCε转位抑制肽处理细胞,Western blot检测细胞颗粒部分PKCε及pERK1/2,激光共聚焦显微镜观察PKCε转位情况.结果 Iso引起心肌细胞颗粒部分PKCε增加,PKCε转位于胞核周围.8-CPT增加细胞颗粒部分PKCε(P＜0.05).Epac R279K感染细胞后再予Iso处理,颗粒部分PKCε与对照组相比无增加.Ad.PKI未抑制Iso引起的颗粒部分PKCε增加(P＜0.01).PKCε转位抑制肽阻断Iso诱导的ERK1/2磷酸化.结论 心肌细胞中β-AR通过Epac介导以不依赖于PKA的方式活化PKCε并诱导ERK1/2磷酸化.
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雌激素提高去卵巢大鼠海马CA4区ERK1/2的磷酸化水平
目的 研究雌激素对去卵巢大鼠海马CA4区神经元细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平的影响.方法 成年Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组(INT)、去卵巢组(OVX)和去卵巢加雌激素组(OVX+estrogen).用放射免疫分析方法测定血中雌二醇含量,用免疫组化检测ERK1/2的磷酸化水平.结果 去卵巢组大鼠体内雌激素水平明显降低,与对照组和加雌激素组比较均有显著性差异(P＜0.001);采用免疫组织化学定位检测,显示磷酸化ERK1/2主要表达在神经元胞核和胞质;免疫组化阳性细胞统计分析显示:去卵巢组大鼠海马CA4区神经元胞核和胞质着色浅,ERK1/2磷酸化水平降低,其阳性细胞计数明显减少,与对照组比较有显著性差异(P＜0.001);去卵巢加雌激素组与去卵巢组相比,海马CA4区神经元胞核和胞质染色深,磷酸化ERK1/2表达阳性神经元增多(P＜0.001),但仍明显低于对照组.结论 雌激素提高衰老雌性大鼠脑内ERK1/2磷酸化水平,提示雌激素可通过对衰老状态下ERK信号通路的调节作用达到改善学习和记忆的目的.
关键词： 雌激素 去卵巢 海马 细胞外信号调节激酶(ERK) 大鼠 -
肥胖2型糖尿病患者血浆中葡萄糖转运蛋白表达及其与细胞外信号调节激酶关系的临床观察
目的：探讨肥胖T2DM患者血浆中葡萄糖转运蛋白（Glut）的表达及其与细胞外信号调节激酶（ERK）的关系。方法将研究对象分为T2DM合并超重／肥胖（T2DM＋ OB／OW）组、单纯T2DM （T2DM ）组、糖调节正常合并超重／肥胖（OB／OW）组及正常对照（NC）组。采用全自动生化分析仪测定血糖浓度；ELISA检测血胰岛素含量；比色法检测血脂四项及 HbA1 c水平；Western blot检测Glut1、Glut2和Glut4蛋白的表达；RT‐PCR检测 Glut1、Glut2、Glut4和 ERK mRNA 的表达。结果 T2DM ＋ OB／OW组及 T2DM 组 FPG、2 hPG、HbA1c水平[FPG ：（8.90±3.70），（9.30±2.80）mmol／L vs（3.90±0.70），（4.10±0.90）mmol／L ；2 hPG ：（20.10±3.50），（18.48±4.59）mmol／L vs（6.70±0.80），（6.60±0.75）mmol／L ；HbA1c：（9.9±3.19）％，（8.68±2.75）％ vs（5.05±0.37）％，（5.47±0.59）％]均高于OB／OW组及NC组（P＜0.01）；T2DM ＋ OB／OW、T2DM 及OB＋ OW组 TC和 TG水平[TC ：（5.06±0.97），（5.13±1.27），（4.67±0.83） vs（3.51±0.89）mmol／L ；TG ：（3.52±2.68），（3.79±3.56），（1.87±0.95） vs（1.41±1.21）mmol／L]均高于NC组（P＜0.01）；OB／OW组FIns水平[（7.98±2.01）vs（5.91±3.02），（5.49±1.36）mmol／L]高于T2DM、NC组（P＜0.05）。 T2DM＋ OB／OW、T2DM 组Glut1，Glut2， Glut4表达均低于OB＋ OW、NC组（P＜0.01）；T2DM ＋ OB／OW组Glut2表达低于 T2DM 组；T2DM ＋OB／OW、T2DM组Glut2和Glut4的mRNA表达低于 OB／OW、NC组；T2DM ＋ OB／OW、T2DM 组 ERK的mRNA表达高于OB／OW、NC组。结论肥胖T2DM患者体内Glut1、Glut2和Glut4的表达均降低，其中，Glut2和Glut4的表达与ERK的表达呈负相关。
关键词： 糖尿病 2型 葡萄糖转运蛋白(Glut) 细胞外信号调节激酶(ERK) -
急性恐惧应激对大鼠行为、激素水平及脑Erk1/2活化表达的影响
目的:探讨急性恐惧应激对大鼠情感行为、激素水平及不同脑区Erk1/2活化表达的影响.方法:采用足电击+白噪声刺激方式建立急性恐惧应激大鼠模型,观察其情感行为的改变;放射免疫法及荧光分光光度法检测血浆和脑组织激素水平;Western blot检测Erk1/2的活化表达.结果:应激后大鼠旷场活动性降低、拒俘反应性增加、惊吓反应增强(P＜0.01);血浆及脑组织去甲肾上腺素、5-羟色胺、皮质醇水平增高,而肾上腺髓质素水平降低(P＜0.01);海马、纹状体、前额皮质、小脑等脑区磷酸化Erk1/2蛋白的表达均显著增高(P＜0.01).结论:急性恐惧应激可以显著影响大鼠的情感行为和激素水平,Erk1/2蛋白磷酸化水平的增高可能参与了急性恐惧应激所致的情感行为异常.
关键词： 恐惧应激 大鼠 情感行为 激素 细胞外信号调节激酶(ERK) -
miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究
目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用.方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR 质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中.利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平.结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p 及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05).结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础.
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碘化N-正丁基氟哌啶醇对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的抑制作用
目的 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对血管紧张素Ⅱ(AngII)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制.方法 培养大鼠心肌细胞株(H9C2细胞),测量细胞表面积和BCA法测定细胞蛋白含量作为心肌肥大指标;Western blot检测核转录因子ERK1/2 及CREB蛋白表达.结果 (1) AngII (10-7mol·L-1)处理细胞48 h,心肌细胞表面积增大,蛋白含量明显增加,F2 (10-8、10-7、10-6 mol·L-1)剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞表面积的增大以及蛋白含量的增加;(2) AngII (10-7mol·L-1)处理心肌细胞1 min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)和磷酸化CREB蛋白(p-CREB)表达即开始增加,5~10 min 达高峰,可持续活化60 min,ERK1/2和CREB蛋白总量没有变化.以AngII处理心肌细胞5 min,p-ERK1/2和p-CREB表达为标准,预先以F2 (10-8、10-7、10-6 mol·L-1)处理心肌细胞30 min,F2剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞 p-ERK1/2和p-CREB表达的增高.结论 F2可以抑制AngII诱导的心肌肥大,其机制可能与抑制磷酸化ERK1/2和CREB表达有关.
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卵巢癌细胞及组织中P38MAPK信号通路调控uPA蛋白的表达及临床意义
目的 探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在49例卵巢癌组织中的表达,Western blot检测HO8910及HO-8910PM细胞系中uPA、P38MAPK蛋白的表达,特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后uPA蛋白表达水平的变化.结果 uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在卵巢癌组织中表达阳性率分别为61.22％、57.14％、53.06％、55.10％.uPA与p38MAPK蛋白表达呈正相关(r=0.8645,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期、分化、转移程度有关(P均＜0.05),而与患者的年龄、组织学类型无明显相关(P＞0.05).ERK、AKT蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移、大网膜转移有关(P均＜0.05),而与患者的年龄、组织类型、病理分期无明显关系(P＞0.05).HO-8910PM细胞系中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910,SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高,uPA蛋白表达逐渐降低.P38MAPK及uPA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(r=3.897,11.044,P=0.048,0.001).结论 卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;该通路的激活可上调uPA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和uPA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用.P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标之一.
