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新合成阿片受体配基对δ受体的激动作用
研究新合成的阿片受体配基对δ阿片受体的激动作用.采用生物鉴定的方法,检测新型阿片受体配基、DP-DPE和吗啡对小白鼠输精管(MVD)收缩的抑制作用和检测所激动的阿片受体亚型,以达到大抑制作用的50%的药物浓度(IC50值)评价效价强度.结果表明新型阿片受体配基、DPDPE和吗啡(Mor)都可抑制MVD的电刺激收缩,显示纯激动剂作用.认为新型阿片受体配基与阿片受体的结合为可逆性结合.新型阿片受体配基A、C、D、E、F和G以及典型的阿片受体激动剂DPDPE和吗啡的IC5o值分别为31.73±3.54、15.92±9.19、88.70±16.26、1074.00±263.00、74.88±58.69和67.16±8.49、3.20±0.05、69.84±27.58 nmol/L.竞争性拮抗剂纳洛酮(Nal)可拮抗配基的激动作用,使新型阿片受体配基,DPDPE和吗啡的量效曲线平行右移.新型阿片受体配基可激动δ阿片受体,是典型的δ受体激动剂.
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吗啡对大鼠海马神经元钾、钙通道的作用
吗啡是常见的阿片类镇痛药,长时间应用可导致吗啡耐受和依赖,其作用机制十分复杂.海马中同时包含μ,κ,δ阿片受体[1],与吗啡耐受及依赖有一定的关系,并参与机体的痛觉调制过程,因而了解吗啡对海马神经元离子通道的作用对阐明吗啡的镇痛、耐受及依赖机制具有重要的理论及实际意义.
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δ阿片类物质的抗缺血心脏保护机制和临床应用前景
阿片类物质尤其是δ阿片受体激动剂,在整体动物、离体器官、培养的细胞模型,以及人的心脏组织中能够模拟缺血预适应,对抗心肌缺血-再灌注损伤.本文介绍了近年来δ阿片类物质在心肌缺血-再灌注中的作用,其心脏保护作用涉及的信号调控机制的研究进展,以及阿片类药物治疗缺血性心脏疾病的临床应用前景.
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δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠皮质神经元缺氧损伤的影响
目的 探讨δ阿片受体激动剂DADLE对于体外培养的火鼠皮质神经元抗物理缺氧损伤是否具有保护作用.方法 将体外培养8d的大鼠皮质神经兀进行MAP2免疫荧光鉴定后,随机分为4组:缺氧组(n=6),缺氧+DADLE预处理组(n=6),对照组(n/,=6),对照十DADLE预处理组(n=6).缺氧细胞置人含体积分数1%02,5%c02及94%N2的缺氧箱内37℃培养72 h.DADLE预处理组在将细胞置入孵箱之前加入DADLE(终浓度为10 μmol/L.);对照组则将细胞置入含95%空气和5%C02的恒温培养箱中培养.用hoehest 33258核染色法评价细胞凋亡情况,检测细胞乳酸脱氢酶LDH漏出量;检测各组细胞上清液葡萄糖水平,以评价其匍萄糖/能量代谢状况.应用单因素方差分析山LDH漏出及葡萄糖水平,Y2检验分析神经元生存率.结果 皮质神经元培养8 d后,经MAP2免疫荧光鉴定为95%细胞为神经元.DADLE预处理缺氧细胞组细胞存活率为(71.88±1.77)%,高于未处理缺氧细胞绀的(43.58±3.07)%,P<0.05,DADLE预处理+缺氧组的LDH活力单位为(3824.274-294.86),低于未处理缺氧组的(4516.59±605.02),P<0.05.DADLE预处理+缺氧组细胞上清液葡萄糖水平为(11.924±2.05)mmol/L,高于未处理缺氧组的(9.884±0.71)mmol/L,P<0.05.结论 δ阿片受体激动剂DADLE对体外培养的大鼠皮质神经元抗缺氧损伤具有保护作用,可能作用机制为其降低缺氧皮质神经元的葡萄糖/能量代谢需求,减轻缺氧损伤时细胞的葡萄糖/能量代谢障碍.
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δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血-再灌注大鼠血清S-100B蛋白的影响
目的 通过比较血清S-100B蛋白水平来观察δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的影响,从而探讨DADLE在脑复苏中的神经保护作用.方法 用二血管阻断加低血压法制作大鼠全脑缺血-再灌注模型.50只SD大鼠随机分为五组,每组各10只;假手术组:不制模不干预;模型组:单纯制作全脑缺血-再灌注模型;DADLE预处理组:在缺血前给予DADLE;DADLE缺血后处理组:在缺血后给予DADLE;DADLE再灌注期处理组:在再灌注早期给予DADLE.实验结束后分别取血,用酶联免疫检测法(ELISA)测定大鼠血清S-100B蛋白水平.数据用均数4±标准差((x)±s)表示,统计分析采用单因素方差分析,两两组间均数之间的比较采用SNK法,以P<0.05为差异具有统汁学意义.结果 假手术组的血清S-100B蛋白水平为(475.56±41.93)pg/ml,模型组和DADLE处理各组的山清S-100B蛋白水平均比假手术组高(P<0.05),DADLE处理各组的血清S-100B蛋白水平均比模型组低(P<0.05),DADIE处理各组间的血清S-100B蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血-再灌注损伤有保护作作用.
关键词： δ阿片受体 全脑缺血-再灌注:S-100B蛋白 -
鞘内注射δ阿片受体特异性拮抗剂对慢性痛大鼠吗啡耐受的影响
目的:观察鞘内注射δ阿片受体特异性拮抗剂对吗啡耐受大鼠慢性疼痛的疼痛行为学的影响,探讨吗啡耐受机制.方法:选择鞘内置管成功SD大鼠在成功建模后第10天随机分为8组并给药:骨癌痛+生理盐水对照组(BC组)、骨癌痛+吗啡组(BM组)、骨癌痛+呐曲吲哚+吗啡组(BN组)、骨癌痛+DPDPE (D-丙2-D-亮5-脑啡肽,[D-Pen2,D-CI-Phe5]-enkephalin,δ受体特异性激动剂)+吗啡组(BD组)、SNI (spared nerve injury,坐骨神经分支选择性损伤模型)+生理盐水对照组(SC组)、SNI+吗啡组(SM组)、SNI+呐曲吲哚+吗啡组(SN组)、SNI+DPDPE+吗啡组(SD组).BC组和SC组鞘内注射10 μl生理盐水,BM组和SM组鞘内注射10 μg/10 μl吗啡,BN组和SN组鞘内注射10 μg/10μl呐曲吲哚20 min后加注10 μg/10μl吗啡,BD组和SD组鞘内注射1μg/10μl DPDPE 20min后加注10 μg/10 μl吗啡.SNI模型大鼠1天两次给药,骨癌痛模型大鼠1天3次给药,连续9天.采用von Frey丝分别于建模前(基础状态),建模后3、5、7、9 d(T3、T5、T7、T9),鞘内给药1、4、7、9 d (I1、I4、I7、I9)时测定术侧机械痛阈.骨癌痛模型大鼠连续9天鞘内注药后灌注取左右两侧胫骨,冰冻切片,HE染色,观察肿瘤生长及骨结构破坏情况.结果:HE染色显示种植侧胫骨癌细胞大量生长,异型性明显,骨质大片缺损,骨癌痛模型建模成功.两种慢性疼痛模型中,给药前各组大鼠机械阈值皆明显降低形成痛觉过敏(P＜0.05)；给药过程中,各治疗组均有镇痛作用,其大鼠机械阈值均明显升高(P＜0.05)；在给药第7天及第9天,大鼠机械痛阈较治疗第1天相比明显降低(P＜0.05).骨癌痛模型中,与BN组相比,BM组在第9天其机械阈值明显降低(P＜0.05).在SNI模型,与SN组相比,SM组及SD组其机械阈值在给药的第7、9天皆明显降低.结论:鞘内注射δ阿片 受体特异性拮抗剂呐曲吲哚可以抑制或延缓吗啡耐受,δ阿片受体参与吗啡耐受形成.
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脊髓缺血再灌注损伤中δ阿片受体的表达变化
目的 通过建立兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)模型,研究SCIRI中脊髓组织δ阿片受体(DOR)mRNA表达的变化.方法 24只健康新西兰大耳白兔随机分成4组(每组6只),动物麻醉进腹后均钳夹腹主动脉,S组(假手术组)仅分离腹主动脉,不阻断血流;E-l组仅钳夹腹主动脉45 min; E-2组钳夹腹主动脉45 min后松钳再灌注30 min; E-3组钳夹腹主动脉45min后松钳再灌注60 min.在各时间点,采血检测血清神经特异性烯醇化酶(NSE)浓度后处死动物,取脊髓组织利用实时荧光定量PCR检测DOR mRNA表达情况.结果 缺血45 min、再灌注30 min和60 min时血清NSE浓度均高于假手术组(P＜0.01),脊髓组织DOR mRNA表达均低于假手术组(P＜0.01).结论 脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织DOR mRNA的表达明显下降,提示DOR可能参与脊髓缺血再灌注损伤.
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复方苦参汤对溃疡性结肠炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用
目的:探讨复方苦参汤对溃疡性结肠炎大鼠DOR-β-arrestinl-Bcl-2信号转导通路的干预作用.方法:SD ♂大鼠84只(体质量200 g±20 g)随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、复方苦参汤大剂量组、复方苦参汤中剂量组和复方苦参汤小剂量组,每组14只.除对照组外,其余5组均依据Morris等三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.造模后观察记录大鼠的大便和精神状态,并于第3天随机处死2只造模大鼠,取结肠镜下观察其病理组织学变化发现:大鼠结肠糜烂、充血及溃疡,证明造模成功.建立大鼠溃疡性结肠炎模型后给予美沙拉嗪组大鼠3mL/d(0.5g/L)美沙拉嗪混悬液灌胃,复方苦参汤大、中、小剂量组分别按不同含生药浓度的复方苦参汤液3 mL/d(0.67、0.34、0.17 g/L)灌胃,对照组和模型组给予等量的生理盐水3 mL/d灌胃,连续灌胃15 d后,禁食24 h,处死大鼠,取结肠组织石蜡包埋切片,HE染色比较各组结肠组织病理组织学改变,Real time-PCR和免疫组织化学技术检测实验大鼠结肠组织的Bcl-2、β-arrestin1及δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR) mRNA和蛋白表达表达变化.结果:各组大鼠结肠组织中Bcl-2、β-arrestin1 和DOR表达有显著差异(P＜0.05).与对照组比较,模型组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1和DOR表-达明显升高(24.11±12.61vs 11.88±5.90,38.90±5.30 vs 14.34±8.97,23.57±9.96 vs 9.68±3.94,均P＜0.05)；与模型组比较,美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达均显著下降,但美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组之间比较Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达无显著差异.结论:在实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中DOR、β-arrestin1和Bcl-2的表达升高,DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路可能参与了溃疡性结肠炎的病理过程,复方苦参汤可改善溃疡性结肠炎大鼠的结肠组织病理学改变,机制可能与调节该信号通路有关.
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DADLE对离体兔心缺血再灌注损伤的保护作用
心肌缺血-再灌注可能会导致心肌顿抑,甚至心肌细胞凋亡;而冬眠状态的动物心肌可以耐受缺血达几个月.引起动物冬眠的物质结构和功能类似于δ阿片受体,人工合成的δ阿片受体激动剂DADLE(右旋2-丙氨酸,5-亮氨酸脑腓肽)也可以引起类似冬眠的保护效果[1].
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δ阿片受体信号转导的研究进展
δ阿片受体属G蛋白偶联受体,其配体可抑制细胞内环磷酸腺苷水平和调节电压依赖的钙离子通道和钾离子通道.近研究还发现,δ阿片受体选择性配体可介导细胞内储存钙的释放,并且调节各种蛋白激酶.本文就δ阿片受体的信号转导途径的研究进展进行.
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δ阿片受体结构及其镇痛机制
阿片类药物是临床治疗疼痛常用药物,但其具有严重的耐受成瘾性.开发结构全新的或新的作用机制的镇痛药物,是从根本上解决这一问题的有效途径,深入探讨阿片受体的结构特点和作用机制成为必然.
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δ阿片受体激活对血清饥饿致大鼠成骨细胞凋亡的影响及机制
目的 利用体外培养大鼠成骨细胞,研究δ阿片受体激活对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 培养大鼠成骨细胞,分组给药作用48 h后,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-F1TC/PI双标记法测定细胞凋亡率,Western blot测定PKC和Caspase-3表达.结果 给予δ阿片受体激动剂DADLE l μmol·L-1处理可显著抑制由血清饥饿导致的成骨细胞凋亡,表现为细胞存活率增加,凋亡率降低,S+G2+M期百分比增加,Caspase-3表达下降,PKC表达增加；但这种现象可被Naltrindole所拮抗；并且给予10 μmol·L-1 GF109203X亦可拮抗DADLE的这种抑制细胞凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率增加；S+G2-M期百分比降低；caspase-3表达增加；PKC表达下降.结论 DADLE激活δ阿片受体对血清饥饿诱导的成骨细胞凋亡起保护作用,且这种作用是通过PKC途径实现的.
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兰茵凤扬化浊解毒方治疗大鼠溃疡性结肠炎的作用机制
目的 观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中δ阿片受体(DOR)、β-arrestin1、Bcl-2 mR-NA表达的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组10只与造模组50只.采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇联合造模法造模.造模组大鼠按照随机数字表分为模型组9只、中药高、中、低剂量组各9只,美沙拉嗪组9只,予相应药物灌胃2 w,观察大鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜病理学改变,结肠组织中δ阿片受体(DOR)、β抑制蛋白(β-arrestin1)及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果 DAI评分:与空白组比较,其余各组均升高,与模型组比较,各治疗组均降低(P<0.05).DOR mRNA与β-arrestin1 mRNA:与模型组相比,各治疗组DOR mRNA及β-arrestin1 mRNA表达均明显降低(P<0.05),而中药中剂量组与美沙拉嗪组比较无明显差异(P>0.05).Bcl-2 mRNA:与模型组相比,各治疗组Bcl-2 mRNA表达均明显降低(P<0.05),中药高剂量组与空白组比较无明显差异(P>0.05).结论 兰茵凤扬化浊解毒方可能通过对DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路活化环节的干预,促进肠黏膜中T细胞凋亡,从而恢复肠道免疫稳态达到治疗UC的目的.
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长时间给予高选择性δ阿片受体激动剂抑制δ受体mRNA表达
我们采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察了δ阿片受体肽类激动剂[D-Pen2.5]enkephalin(DPDPE)及非肽类激动剂BW373U86对δ受体mRNA表达的影响,并比较了两者作用的差异性.结果如下:(1)DPDPE作用24及48h可使δ受体mRNA表达水平显著降低,而BW373U86只在24h有显著抑制作用;(2)DPDPE在10-6 mol/L时即可使δ受体的mRNA表达水平显著降低;而BW373U86在10-5 mol/L时才有效.可见长时间(24h)给予肽类及非肽类δ阿片激动剂均可显著抑制δ受体的mRNA表达;DPDPE作用较强,作用时程较长.
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缺氧缺血时神经元保护的新观点
阿片类镇痛剂的临床应用具有悠久的历史. 然而,阿片受体的功能,特别是其在脑内的作用,尚未完全阐明.近年来,有关阿片受体介导的功能及其作用机制的研究,产生了大量新资料.其中,令人兴奋的发现或许是δ阿片受体(δ-opioid receptor,DOR)对缺氧缺血神经元的保护作用.DOR表达的上调和内源性阿片释放可增加神经元对缺氧缺血应激的耐受性.根据应激的持续时间和严重程度的不同,DOR信号可在多个水平触发不同机制,从而保护神经元,使之得以在应激环境中生存.这些机制包括稳定离子内环境、增强促生存信号通路的转导(如PKC-ERK-Bcl2通路)和增加抗氧化损伤的能力.DOR保护缺氧缺血神经元的新资料,给神经保护并籍以对抗神经系统疾患的研究提供了一个新观念,对某些严重脑疾病(如中风)的预防和治疗可能具有较大的意义.
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CREB磷酸化蛋白水平对δ阿片受体激动剂后处理脑保护作用的影响
目的 建立大鼠窒息性心肺复苏脑损伤模型,探讨环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化蛋白在δ阿片受体(DOR)激动剂BW373U86后处理对心肺复苏脑损伤的保护作用.方法 健康成年雄性SD大鼠随机分为四组:假手术组(Sham组)、模型组(ACA组)、激动剂组(BW组)和拮抗剂组(Nal组).除Sham组外,均采用8 min窒息法建立大鼠窒息性心肺复苏脑损伤模型.自主循环恢复(ROSC)后,ACA组和BW组分别静脉给予生理盐水1 ml和BW373U86 1 mg/kg；Nal组在静脉给予BW373U86 1 mg/kg前,静注DOR拮抗剂Naltrindole 1 mg/kg.观察四组大鼠复苏成功率,ROSC后1、2、3、7d对存活大鼠进行神经功能缺损评分,观察复苏后大鼠CREB磷酸化水平和mRNA表达的变化,以及海马CA1区神经元的损伤情况.结果 与Sham组比较,ACA组、BW组和Nal组海马组织中磷酸化的CREB(pCREB)蛋白相对表达明显升高(P＜0.05),ROSC后各时点神经功能缺损评分均降低(P＜0.05)；海马CA1区存活神经元数明显减少(P＜0.05).与ACA组比较,BW组海马组织中pCREB蛋白相对表达升高、ROSC后各时点神经功能缺损评分升高(P＜0.05).与BW组比较,Nal组海马组织中pCREB蛋白相对表达降低,ROSC后各时点神经功能缺损评分降低(P＜0.05),海马CA1区中ACA组和Nal组存活神经元数减少,病理损伤加重(P＜0.05).结论 CREB的磷酸化可能参与了DOR激动剂BW373U86后处理对心肺复苏脑损伤的保护作用.
关键词： δ阿片受体 再灌注损伤 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 脑保护 -
肠愈灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠炎症相关因子及DOR、β-arrestin1、Bcl-2表达影响
目的:探讨肠愈灌肠方对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-[β1 (TGF-β 1)及δ阿片受体(DOR)、β-抑制蛋白1(β-arrestin1)、Bcl-2表达的影响.方法:SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、肠愈灌肠方组和美沙拉嗪组,除正常组外,其余大鼠采用5％TNBS灌肠建立大鼠溃疡性结肠炎模型.肠愈灌肠方组、美沙拉嗪组分别予肠愈灌肠方药液和美沙拉嗪悬浊液灌肠,正常组和模型组给予蒸馏水灌肠,连续15d,第16d处死大鼠,取结肠标本.分别采用Elisa和Western Blotting法检测结肠组织中TNF-α、TGF-β 1及DOR、β-arrestin1、Bcl-2蛋白的表达.结果:模型组大鼠体重下降、精神萎靡,出现不同程度的腹泻及便血,造模3d后DAI评分高于正常组(P＜0.01),大鼠结肠肠管变粗、肠壁增厚,黏膜水肿、充血.肠愈灌肠方能明显改善模型大鼠的结肠炎症损伤,与正常组比较,模型组的大鼠结肠黏膜组织抑炎因子TGF-β 1显著降低(P＜0.01),炎症因子TNF-α及DOR、β-arrestin1、Bcl-2表达水平显著增高(P＜O.01);与模型组比较,肠愈灌肠方组与美沙拉嗪组抑炎因子TGF β 1明显升高(P＜0.01),炎症因子TNF-α及DOR、β-arrestin1、Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.01,P＜0.05),但肠愈灌肠方组和美沙拉嗪组之间比较无显著差异.结论:在实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中抑炎因子TGF-β 1减少,炎症因子TNF-α及DOR、β-arrestin1、Bcl-2的表达升高,炎症相关因子及DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路可能参与了溃疡性结肠炎的发展过程,肠愈灌肠方对其改善作用的机制可能与调节该信号通路有关.
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阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:观察δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)对培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用.方法:采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞,建立H/R损伤模型,检测指标包括:(1)心肌细胞形态;(2)心肌细胞存活率;(3)超氧化物歧化酶(SOD)活性;(4)丙二醛(MDA)含量; (5)乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:模型组缺氧后心肌细胞存活率降低,复氧 30 min 后进一步下降,各个时间点细胞内SOD活性下降,MDA含量升高,LDH活性升高,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01),复氧 60 min 后各指标逐渐趋于正常状态;DADLE 1 μmol/L 组细胞存活率升高, LDH活性降低,MDA含量逐渐趋于正常,SOD活性逐渐回升,表明经DADLE干预后,心肌细胞抗损伤能力加强,发生损伤的程度减轻;δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚 10 μmol/L 抑制DADLE的保护作用.结论:DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H/R损伤具有保护作用.
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δ阿片受体对乳腺癌化疗耐药性的影响
目的 探讨δ阿片受体(delta opium receptor,DOR)在乳腺癌多药耐药性中的作用.方法 乳腺癌MCF-7细胞分为耐药组和对照组,耐药组细胞采用含阿霉素的培养液培养6周,建立耐药细胞株;对照组细胞正常培养.68例乳腺癌患者,其中化疗耐药者45例、化疗敏感者23例,取患者癌旁正常组织为正常对照组,取化疗耐药者和化疗敏感者乳腺癌组织为化疗耐药组和化疗敏感组,采用反转录PCR法检测2组细胞和3组组织中DOR mRNA表达水平,采用Western blot法检测2组细胞和3组组织中DOR蛋白表达水平.采用ELISA法检测化疗耐药组和化疗敏感组P-gp转运蛋白表达水平,分析DOR与P-gp转运蛋白表达的相关性.结果 耐药组细胞DOR mRNA和蛋白表达水平[(180.4±9.4)％、(157.2±9.3)％]高于对照组[(100.0±7.2)％、(100.0±10.1)％](P＜0.05);化疗耐药组组织中DOR mRNA和蛋白表达水平[(269.6±15.8)％、(276.8±14.9)％]高于化疗敏感组[(187.5±12.3)％、(164.6±13.5)％]和正常对照组[(100.0±6.1)％、(100.0±10.5)％](P＜0.05),化疗敏感组高于正常对照组(P＜0.05);化疗敏感组DOR和P-gp转运蛋白高表达率(42.2％、24.4％)均明显低于化疗耐药组(78.3％、82.6％)(P＜0.05),化疗敏感组和化疗耐药组DOR高表达者P-gp转运蛋白高表达率(73.3％)高于DOR低表达者(26.7％)(P＜0.05);化疗耐药组和化疗敏感组DOR蛋白表达水平与P-gp转运蛋白表达水平呈正相关(r=0.856,P=0.030).结论 DOR的表达与乳腺癌化疗耐药具有明显相关性,有可能成为重要的化疗耐药预测指标.
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大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因小发卡RNA(shRNA)及人前脑啡肽原基因(human preproenkephalin gene,hPPE)双表达慢病毒载体并鉴定.方法 根据大鼠DOR mRNA序列设计shRNA并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入至shRNA表达载体pENTR/U6 vector中,构建shRNA表达质粒,并转化至感受态细胞DH5α,抽提质粒后进行测序.合成hPPE基因序列并插入到表达载体pcDNA3.1(+)中,转化至感受态细胞DH5α,挑取多个单克隆进行测序验证.将hPPE插入已构建成功的pENTR/U6-shRNA载体中,再与慢病毒载体pLenti7.3/V5-DEST重组,构建慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA并转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序验证,保留测序验证正确的LR重组质粒.用构建的慢病毒表达载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,并测定滴度.结果经测序验证重组质粒pENTR/U6-shRNA、pcDNA3.1(+)-hPPE和慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA均构建成功.大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒包装成功,病毒滴度为1×107 TU/mL.结论大鼠DOR基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体构建成功,为研究DOR和hPPE在吗啡耐受中的作用机制及探求更加合理的镇痛方式奠定了基础.
