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氯丙烯对大鼠神经组织中蛋白激酶C含量的影响
氯丙烯(allyl cholride,AC)又称烯丙基氯,广泛应用于有机合成、医药、农药、合成树脂等工业中.已知氯丙烯可以引起中毒性周围神经病,患者主要表现为对称性远端型运动及感觉障碍,以及周围神经纤维的轴索变性.
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慢性染铝大鼠海马 PKC、MAPK活力与LTP的相关性
目的 研究慢性铝暴露引起大鼠海马蛋白激酶C(PKC)、有丝分裂激活蛋白激酶(MAPK)活力的变化,对海马齿状回(CAI区)产生长时程增强(LTP)幅值改变的调节作用,探讨铝暴露对学习记忆功能的影响.方法 选择断乳后Wistar大鼠,随机分4组(1个对照组,3个染毒组),每组20只,染毒组大鼠分别喂食质量浓度为0.2%、0.4%和0.6%氯化铝的水,饲养3个月后,测量大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC、MAPK活力的变化.结果 3个浓度的染铝,PKC的活力均依浓度依赖方式被抑制,细胞浆比活力的倍数分别为:4.95±0.76、5.31±0.90、5.50±1.46(P＜0.01);细胞膜为9.84±3.84、8.35±2.32、7.56±2.06(P＜0.01).MAPK活力依浓度依赖方式被抑制,比活力的倍数分别为:3.43±0.91、2.53±1.21和2.64±0.55(P＜0.05).结论 慢性铝暴露引起PKC及ERK活力降低,导致大鼠海马LTP幅值下降.
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针刺对肝郁化火型失眠患者的临床研究
目的 探究针刺对肝郁化火型失眠患者血清中NE含量及PKC、BDNF基因表达水平的影响.方法 病例来源为2013年1月-2014年10月期间我院针灸科收治的住院患者,共120例,临床诊断失眠,中医证候分型为肝郁化火型.所有患者按随机数字表分为两组,对照组60例,对照组患者每晚临睡前口服枣仁安神胶囊,5粒/次,1次/d;治疗组60例,选取四神聪穴(百会穴前后左右各相去1寸).操作方法穴位常规消毒,病人安静仰卧,向后平刺0.5-1寸,行平补平泻手法,针刺得气后,15 min后行针1次,提插捻转手法,共留针30 min.出针后按压针孔以防出血.针刺治疗共14 d.针刺时注意患者状态.治疗结束后对患者血清中NE含量及PKC、BDNF基因表达水平进行检测.结果 经治疗后,两组患者的失眠均有好转,与对照组相比,实验组的总有效率更高(P<0.05);治疗后,两组患者的NE水平均显著降低,与治疗前相比,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗后实验组的NE改善水平明显优于对照组,经统计学分析,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患者的PKC、BDNF水平均明显改善,与治疗前相比,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗后与对照组相比,治疗组的PKC、BDNF水平改善更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 针刺能够明显降低肝郁化火型失眠患者血清中NE及PKC基因表达水平、升高BDNF表达水平,对临床有指导意义.
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金钗石斛对糖尿病大鼠肾组织PKC和TGF-β1表达的影响
目的 研究金钗石斛对糖尿病大鼠肾脏PKC和TGF-β1表达的影响.方法 建立糖尿病大鼠模型,分为糖尿病组和金钗石斛组,同时设正常组.各组分别给药8周,测定大鼠空腹血糖、血清尿素氮和肌酐的含量、肾指数,免疫组化法分别分析各组大鼠肾脏PKC和TGF-β1蛋白表达.结果 与正常组相比,糖尿病组大鼠空腹血糖、血清尿素氮、肌酐和肾指数均增高,肾脏PKC和TGF-β1蛋白表达也增加(均P＜0.05).与糖尿病组相比,金钗石斛组大鼠的空腹血糖、血清尿素氮和肌酐分别降低了17.33%、24.06%和30.81%(P＜0.05),肾指数降低了14.29%(P＜0.05),而肾脏PKC和TGF-β1蛋白表达分别下调了44.44%和38.24%(P＜0.05).结论 金钗石斛对糖尿病大鼠的肾脏有明显的保护作用,其机制可能与减少肾组织中PKC和TGF-β1的表达有关.
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黄芩苷调节DN大鼠肾脏局部生物活性物质的实验研究
目的 研究黄芩苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏局部生物活性物质的调节作用.方法 采用链尿佐菌素单次腹腔注射法制作DN模型大鼠,随机分为模型组、黄芩苷低剂量组及高剂量组,另设正常对照组.黄芩苷低、高剂量组大鼠分别腹腔注射黄芩苷水溶液40 mg·kg-1·d-1、60 mg·kg-1·d-1.治疗6 w后,取各组大鼠血液及肾脏,检测血AngⅡ、肾脏TGF-β1及PKC活性.结果 黄芩苷低、高剂量组血AngⅡ降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05).黄芩苷低、高剂量组肾小管TGF-β1表达与模型组比较明显减少,肾小管上皮细胞膜PKC表达与模型组比较减少,其中以黄芩苷低剂量组更接近正常对照组的表现.结论 黄芩苷可降低血AngⅡ,对改善肾脏血流动力学有一定帮助.黄芩苷可降低肾组织内增高的TGF-β1、PKC,从而调节细胞外基质(ECM)的沉积和降解.
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犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染小鼠肺组织MLC磷酸化信号通路的影响
目的：以流感病毒感染的小鼠为模型，检测犀角地黄汤合银翘（ XDY）对小鼠肺组织中肌球蛋白轻链（ MLC）磷酸化信号通路的影响，以明确其抗病毒作用的分子机制。方法将50只雄性Balb/c小鼠按体重随机分为5组，每组10只，分别为正常组、病毒组和XDY低、中、高剂量给药组，除正常组小鼠外，其余组用A/FM/1/34（H1N1）病毒株滴鼻感染。1 h后，病毒组蒸馏纯水灌胃，2次/d；其余三组分别用低、中、高剂量的XDY灌胃，2次/d。感染后第4天摘眼球处死小鼠，RT-PCR检测各组小鼠肺组织中病毒RNA水平；Western bolt 检测肺组织MLC、p-MLC、PKC、p-PKC、ROCK-1、ERM、p-ERM蛋白表达水平。结果与病毒组相比，XDY中剂量组病毒RNA含量显著降低，差异有统计学意义（ P﹤0.01），而高剂量组和低剂量组病毒RNA含量则无明显变化。XDY中剂量组Rho/ROCK、PKC以及p-MLC、p-ERM蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。与正常组相比，病毒组小鼠肺组织中ROCK1、PKC表达显著增加，p-MLC、p-ERM蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论 XDY可通过抑制Rho/ROCK、PKC信号通路活化，抑制p-MLC蛋白表达，减少流感病毒在体内的复制，从而起到抗病毒作用。
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预先电刺激小脑顶核对局灶缺血/再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响
目的:观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相蛋白激酶C同工酶γ、δ蛋白表达.方法:采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注模型,缺血时间均为1.5 hr/再灌注24 hr;于缺血前1、4、7天分别刺激小脑顶核、齿状核1 hr.以尾状核冠状切面作为观察对象,应用免疫组织化学方法观察单纯缺血/再灌注组、假手术组、刺激小脑顶核组和刺激齿状核组PKC γ、δ的表达情况.结果:缺血前1、4、7天刺激小脑齿状核各组、单纯缺血/再灌注组、假手术组PKCγ、δ阳性细胞数比较无显著性差异(P＞0.05),而缺血前1、4、7天预刺激小脑顶核能明显抑制PKC γ、δ蛋白的表达(P＜0.05).结论:缺血性脑损害能诱导PKC γ、δ蛋白表达上调,预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ、δ蛋白表达有关.
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预先电刺激小脑顶核对局灶缺血/再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响
目的:观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相蛋白激酶C同工酶γ、δ蛋白表达.方法:采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注模型,缺血时间均为1.5 hr/再灌注24 hr;于缺血前1、4、7天分别刺激小脑顶核、齿状核1 hr.以尾状核冠状切面作为观察对象,应用免疫组织化学方法观察单纯缺血/再灌注组、假手术组、刺激小脑顶核组和刺激齿状核组PKC γ、δ的表达情况.结果:缺血前1、4、7天刺激小脑齿状核各组、单纯缺血/再灌注组、假手术组PKCγ、δ阳性细胞数比较无显著性差异(P＞0.05),而缺血前1、4、7天预刺激小脑顶核能明显抑制PKC γ、δ蛋白的表达(P＜0.05).结论:缺血性脑损害能诱导PKC γ、δ蛋白表达上调,预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ、δ蛋白表达有关.
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来氟米特对糖尿病肾病大鼠肾脏PKC及TGF-β1表达的影响
目的 研究来氟米特对糖尿病肾病(DN)大鼠蛋白激酶C(PKC)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨来氟米特的肾脏保护作用及可能机制.方法 健康雄性Wistar大鼠36只随机分为3组:对照组(A组)、DN组(B组)及来氟米特组(C组,Smg/kg ·d),应用链脲佐菌素一次性大剂量腹腔注射建立糖尿病肾病大鼠模型:C组在成模后每日灌胃来氟米特Smg/kg.A组、B组按等剂量生理盐水腹腔注射共8周.实验第4周、8周末各组分别取6只动物测24h尿蛋白定量:心内采血测肌酐、血清白蛋白:免疫组织化学染色及逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测肾组织PKC及TGF-β_1蛋白的表达.结果 B组大鼠随着病程的延长,内生肌酐清除率增高,并出现蛋白尿,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).C组大鼠尿蛋白、血清肌酐、与同期B组相比明显减少,差异有显著性(P<0.05).IHC.RT-PCR结果示:与对照组、治疗组相比,4.8W末模型组大鼠肾脏组织PKC mRNA.TGF-β_1 mRNA、的表达均显著升高(P<0.05).结论 来氟米特可通过抑制PKC,TGF-β1的表达,从而对DN大鼠发挥良好的肾脏保护作用.
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神经节苷脂调节PKC信号通路及其对PC12细胞去血清损伤的保护作用
目的 研究去血清损伤中PKC信号通路的改变,同时阐明神经节苷脂对大鼠嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12)细胞去血清损伤的保护作用及其作用机制.方法 采用去血清损伤24h作为损伤模型,MTT测定细胞存活率,Hoechst 33258/PI观察细胞损伤后的死亡类型及坏死、凋亡的细胞数;Western blotting检测PC12细胞在损伤后细胞浆和细胞膜PKC:蛋白的变化.结果 去血清损伤时间依赖性对PC12细胞有损伤,多数细胞呈凋亡征象,而神经节苷脂对去血清损伤有明显的保护作用;去血清损伤时,PKC信号通路被活化,主要表现为PC12细胞胞浆中的PKC:蛋白减少,胞膜上的PKC蛋白逐渐增加,实现 PKC 蛋白转位;而神经节苷脂可以抑制这种转位,从而起到保护作用.结论 神经节苷脂对去血清损伤有保护作用,其保护作用部分是由于神经节苷脂抑制PKC信号通路的活化.
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刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白结合作用的研究
目的 研究刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白之间的结合特性. 方法 采用PCR方法扩增弓形虫RACK1基因,双酶切后与pGEX 4T-1连接,构建原核表达载体pGEX-4T-1-RACK1,转化入BL21大肠埃希菌中,用0.8mmol/L IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE检测并进行Ni-IDA亲和层析纯化,采用Western blot分析RACK1蛋白与PKC蛋白的结合作用. 结果 PCR扩增出966 bp的RACK1基因开放读码框,成功构建pGEX4T-1-RACK1原核表达载体,转化BL21后用IPTG诱导4h～6h,SDS-PAGE检测到约36 ku的表达产物,Western blot检测RACK1蛋白能与PKC蛋白结合. 结论 成功构建了pGEX-4T-1原核表达载体,表达产物RACK1蛋白能与PKC蛋白结合.
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电针和氟西汀治疗抑郁症对血小板蛋白激酶C的影响
目的:通过对不同治疗前后抑郁症患者血小板蛋白激酶C(PKC)含量的测定,研究细胞信号传导系统在抑郁症的变化和不同治疗对信号传导的影响.方法:临床采用双盲对照设计,选取符合DSM -IV抑郁症(MDD)和ICD-10抑郁症(MDD)诊断标准的抑郁症患者,随机分入三个治疗组:电针组20例,氟西汀组21例,针刺对照组21例.疗程6周.30名年龄和性别匹配的健康志愿者作为正常对照.在治疗前后各提取血小板,并分离血小板膜和血小板质,用免疫沉淀、放射自显影等方法测定血小板膜和血小板质中不同PKC亚型的蛋白含量.结果:抑郁症患者血小板膜和血小板质PKC的含量均有降低.氟西汀治疗后经典PKC含量有进一步减少的趋势,非经典PKC和新PKC的含量则出现升高的趋势.电针和针刺治疗后经典PKC的含量呈升高的趋势,新PKC和非经典PKC的含量呈下降趋势.结论:结果提示抑郁症患者存在有磷脂酰肌醇信号传导通路的异常.电针和氟西汀对血小板膜和血小板质不同亚型的PKC含量变化的影响不同,提示电针治疗抑郁症的受体后机制不同于氟西汀.
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miR-205通过调控PKC蛋白影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡
目的 探讨miR-205通过调控PKC蛋白影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡行为的作用和机制.方法 实验分为miR-NC组(转染阴性对照慢病毒)、miR-205-mimic组(转染miR-205过表达慢病毒)、miR-205-mimic+ PKC-siRNA组(同时转染miR-205过表达慢病毒和敲减PKCsiRNA).qPCR试验检miR-205在不同黑色素瘤细胞中的表达水平,Western blotting检测PKC蛋白在不同黑色素瘤细胞(C8161,A375,WM115和B16)中的表达水平;双荧光素酶实验检测miR-205和PKC蛋白的相互关系;MTT细胞增殖实验检测miR-205和PKC对黑色素瘤细胞株增殖能力的影响;流式细胞术实验检测miR-205和PKC对黑色素瘤细胞株凋亡行为的影响.结果 miR-205在B16细胞株中表达水平相对细胞株C8161,A375,WM115较低,PKC蛋白在B16细胞中表达水平较低(P＜0.05).双荧光素酶实验证实miR-205可以直接靶向调控PKC蛋白的表达活性.miR-205-mimic组的B16细胞增殖速率明显低于miR-NC组,凋亡率明显高于miR-NC组(P＜0.05);同时抑制PKC蛋白的表达后,miR-205-mimic+ PKC-siRNA组B16细胞的增殖速率明显高于miR-205-mimic组,凋亡率明显低于miR-205-mimic组(P＜0.05).结论 miR-205可以通过调控PKC的表达影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡,同时PKC蛋白对miR-205有一定的反馈调节作用.
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香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖
吸烟是影响支气管哮喘(简称哮喘)发生、发展的重要危险因素[1].香烟烟雾能增加卵清白蛋白(OVA)致敏豚鼠气道急性变应性炎症[2].我们既往的研究结果证实蛋白激酶C(PKC)信号通路在香烟提取物(CSE)促哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖过程中起重要作用[3].
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大黄素诱导人胃癌细胞MKN45凋亡及其分子机制的研究
目前国内外一些学者的研究成果表明:大黄素具有诱导多种肿瘤细胞的凋亡效应,具有细胞毒潜能,其诱导凋亡的信号转导途径主要有Bax-caspase途径、PKC途径、Fas途径及ROS途径等[1-3].本研究旨在观察大黄素对人胃癌细胞MKN45的抑制作用并探讨其作用机制.
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aFGF、bFGF和genistein对大肠癌细胞CCL229TPK、PKC及ERK活性的影响
目的 观察aFGF、bFGF及TPK抑制剂genistein对大肠癌细胞CCL229细胞内TPK,PKC及ERK活性的影响,探讨其信号传导途径.方法 以不同浓度的aFGF(0.15μg/ml,0.3μg/ml,0.6μg/ml,1.2μg/ml)、bFGF(25ng/ml,50ng/ml,75ng/ml,100ng/ml)和genistein(6μg/ml,12μg/ml,24μg/ml,48μg/ml)诱导CCL229细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK,PKC及ERK活性.结果 随着aFGF/bFGF浓度的增加,TPK、PKC及ERK活性随之升高,与aFGF/bFGF浓度呈显著正相关(P＜0.05).对比之下,胞膜PKC活性比胞质PKC活性升高更为明显.Genistein抑制细胞内TPK、PKC及ERK活性,且与genistein浓度呈剂量依赖效应(P＜0.05).Genistein对bFGF诱导的TPK、PKC及ERK活性抑制更显著.结论 aFGF和bFGF诱导大肠癌细胞CCL229后,TPK、PKC及ERK活性均增高,且与aFGF及bFGF呈剂量依赖效应.PKC激活时发生膜转移现象.Genistein诱导CCL229细胞后,TPK、PKC及ERK活性均低于对照组;随着genistein浓度的升高,活性降低的趋势越明显,提示大肠癌中PKC及ERK位于TPK下游.
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氧化应激 PKC、ERK 信号通路对精子活动力影响概述
精子活动力是衡量男性生育能力的一个重要指标，只有活动的精子才能到达受精部位。精子活力低下症是男性不育的主要因素，严重危害人类的生殖健康。随着自由基等分子生物学理论的建立和发展，人们发现氧化应激信号通路对精子的损伤可能是男性不育的原因之一。蛋白激酶 C（PKC）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的研究对基于分子水平探讨精子活力低下症的发病机制，寻求其治疗新途径和方法具有重要意义。
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蛋白激酶C亚型在慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠肺动脉中的表达
目的 研究慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠在肺动脉高压形成过程中肺动脉蛋白激酶C(PKC)亚型的表达.方法 建立野百合碱诱导的慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠模型,应用Western blot技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺动脉四种PKC亚型(PKCα、PKCβⅡ、PKCδ和PKCε)的表达变化.结果 PKCα、PKCβⅡ和PKCδ亚型在正常和肺动脉高压大鼠肺动脉中均有表达,而PKCε亚型未检测到.在肺动脉高压形成过程中,大鼠肺动脉胞浆和胞膜组分表达的PKCα均逐渐上升,到第14天达到高峰后略有下降,且胞膜表达量的升高远比胞浆明显.胞浆PKCβⅡ和PKCδ表达量均在第8天达高,而胞膜中二者均表现出持续升高的趋势.结论 PKCα、PKCβⅡ和PKCδ亚型可能参与了慢性"炎症性"肺动脉高压的形成,其表达变化可能与其转位有关.
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穴位离子导入对耐力训练大鼠心肌蛋白激酶C表达的影响
目的:探讨穴位离子导入对耐力训练大鼠心肌蛋白激酶C(PKC)蛋白及mRNA水平表达的影响.方法:通过免疫组化、RT-PCR方法观察离子导入对PKC蛋白及其mRNA表达的影响.结果:PKC在正常对照组中主要存在于胞浆内,大强度跑台训练后在细胞膜上和细胞核内可见,经口服中药和穴位离子导入干预后,心肌PKC阳性表达面积明显增加,两者合用能进一步促进PKC的表达.各实验组PKC mRNA表达均明显高于安静对照组,尤以离子导入和口服中药联合应用效果更加明显.结论:穴位离子导入可激活PKC,使其发生转位,促进其蛋白、mRNA表达,且口服中药与穴位离子导入之间具有协同作用,说明激活PKC途径可能是离子导入保护心脏,预防疲劳的重要机制之一.
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头孢地嗪免疫调节作用信号转导机制的研究
目的观察头孢地嗪应用于免疫肝损伤合并败血症小鼠模型后TLR-4、PKC和NF-κB在肝脏中的表达及意义,探索头孢地嗪免疫调节作用药理作用机制.方法采用免疫组化SP法,动态检测头孢地嗪应用于免疫肝损伤合并败血症小鼠模型后TLR4、PKC和NF-κB在肝脏中的表达.采用SPSS10.0统计软件进行卡方检验,P＜0.05有统计学意义.结果头孢地嗪按不同剂量应用后分别于7d、14d、21d取小鼠肝脏观察,TLR4、PKC和NF-κB在肝脏组织的肝细胞、炎性细胞及血管内皮细胞表达显著降低(P＜0.05),TLR4、PKC和NF-κB表达强度随头孢地嗪的剂量增加而减少(P＜0.05),随头孢地嗪应用时间的延长而递减(P＜0.05),而在对照组小鼠肝脏的表达则无显著变化(P＞0.05).结论头孢地嗪抑制肝脏组织肝细胞、炎性细胞及血管内皮细胞TLR-4、PKC和NF-κB的表达,可能是其免疫药理作用机制之一.
