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寒喘舒和安喘舒对过敏性支气管哮喘豚鼠IL-6mRNA表达的影响
目的:探讨寒喘舒和安喘舒对过敏性支气管哮喘豚鼠IL-6mRNA表达的影响.方法:建立稳定的豚鼠过敏性支气管哮喘模型,随机分为正常对熙组(A组)、过敏性支气管哮喘模型组(B组)、寒喘舒低、高剂量组(C1,C2组)和安喘舒低、高剂量组(D1,D2组)6组,观察其过敏行为变化；并于治疗后不同时间段处死各组动物,观察肺色泽、大小等并提取RNA,逆转录聚合酶链反应法检测IL-6 mRNA.结果:A组肺泡管和肺泡壁结构完整,B组肺泡管和肺泡壁结构受损,C组肺泡管和肺泡壁结构受损程度轻于B组,D组镜下基本正常.至敏引发哮喘后可提高豚鼠IL-6 mRNA的表达,模型组表达上升(P＜0.01)；寒喘舒和安喘舒组与模型组比较表达下降；安喘舒与寒喘舒组比较表达降低.结论:寒喘舒和安喘舒能明显抑制IL-6mRNA的表达.
关键词： 过敏性过敏性支气管哮喘 OVA TGF-βmRNA IL-6mRNA -
日本血吸虫感染对过敏性哮喘影响的实验研究
目的 建立日本血吸虫感染并发过敏性哮喘实验动物模型及探讨日本血吸虫感染对过敏性哮喘的作用. 方法 取25只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为日本血吸虫感染并发过敏性哮喘组,B组为单纯过敏性哮喘组,C组为健康对照组.A组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(23±3)条.8周后,以卵白蛋白(OVA)分别对A组、B组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型.12周后,取小鼠脾脏制成单细胞悬液并培养72 h,收集脾细胞上清液,检测细胞因子IL-4和IFN-γ水平;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),观察嗜酸性粒细胞(EOS)所占的百分比;取小鼠肺组织作病理切片,观察小鼠肺组织的炎症变化. 结果 与B组比较,A组小鼠BALF涂片中EOS数减少(P＜0.05),A、B两组EOS百分比分别为(7.30±5.01)%和(43.60±2.53)%,而C组小鼠BALF中仅见少数气管上皮细胞,无炎细胞;ELISA法检测A、B、C组小鼠脾细胞培养上清IL-4水平分别为(96.02±38.54) pg/ml、(414.86±175.12) pg/ml和(13.55±1.66) pg/ml,IFN-γ水平分别为(11.60±4.18) pg/ml、(7.43±3.60)pg/ml和(7.55±1.57) pg/ml.与B组比较,A组小鼠IL-4水平降低(P＜0.05),IFN-γ水平无显著性变化(P＞0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P＜0.05).肺部病理改变A组小鼠较轻,B组较重,C组无炎症反应. 结论 日本血吸虫感染对过敏性哮喘的发生有抑制作用.
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新疆栽培荒漠肉苁蓉粗多糖肌肉免疫对OVA蛋白免疫效果的影响
目的 探讨新疆栽培荒漠肉苁蓉粗多糖(cultivated C. deserticola crude polysaccharides,CCDCP)作为模式抗原卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)佐剂的免疫增强作用.方法 将低、中、高3 个剂量的CCDCP 分别配伍OVA 蛋白,肌肉免疫小鼠,免疫2 次,间隔2 周,阳性对照为铝佐剂组,ELISA法检测小鼠血清中的IgG 及其分型IgG1、IgG2a 抗体的表达水平;MTT 法检测脾细胞增殖;并观察免疫后小鼠的生长状况.结果 高剂量CCDCP 组在免疫后7 d 就可以显著提高IgG 的水平(P<0. 05),在免疫后的21 d 和28 d 可极显著提高IgG 的抗体水平(P<0. 01),与铝佐剂组相比差异有统计学意义(P<0. 05);高剂量CCDCP 组可以显著提高IgG1 和IgG2a 的抗体水平(P<0. 05),与铝佐剂组相当;中剂量和低剂量的CCDCP 显著增强脾细胞的增殖水平(P<0. 05),与铝佐剂组相比差异有统计学意义(P<0. 01);CCDCP 对小鼠体重的影响差异无统计学意义(P>0. 05).结论 CCDCP 作为OVA 蛋白的佐剂能够增强Th1 型和Th2 型的免疫应答,尤其可以诱导早期抗体的产生和Th1 型的免疫应答,为CCDCP 作为疫苗佐剂的研究提供参考.
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残余卵清蛋白ELISA定量检测方法建立及初步验证
卵清蛋白(ovalbumin,OVA)作为异源物质,接种人体后易引起过敏副反应.因此残余OVA含量检测是生物制品尤其是以鸡胚为培养基质的流感疫苗生产过程中必须监控的指标之一[1].本研究在建立定量检测OVA双抗体夹心ELISA两步法后,对此方法进行优化,建立双抗体夹心ELISA一步法.通过与德国Seramun试剂盒对比,考察此检测方法的适用性.
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香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖
吸烟是影响支气管哮喘(简称哮喘)发生、发展的重要危险因素[1].香烟烟雾能增加卵清白蛋白(OVA)致敏豚鼠气道急性变应性炎症[2].我们既往的研究结果证实蛋白激酶C(PKC)信号通路在香烟提取物(CSE)促哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖过程中起重要作用[3].
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大鼠被动皮肤过敏试验影响因素探讨
目的：系统性研究大鼠被动皮肤过敏试验（ PCA）的影响因素，为选择敏感试验条件和提高试验预测的准确性提供依据。方法：采用卵白蛋白（ OVA）为PCA试验抗原，在不同条件下（ OVA致敏剂量、添加佐剂、佐剂用量、致敏和被动致敏动物体质量及致敏时间）进行PCA试验。结果：①在不加弗氏完全佐剂（FCA）的条件下，在2．5～80 mg／只剂量范围内均未得到 PCA 阳性结果。②FCA 显著增加大鼠肌体免疫应答的敏感性；加用 FCA时， OVA 用量宜选用5～20 mg／只。③以每只动物致敏1 ml计，0．4 ml FCA∶0．6 ml溶媒、0．5 ml FCA∶0．5 ml溶媒及0．6 ml FCA∶0．4 ml溶媒三种配比方式均可用于PCA试验。④推荐佳实验动物体质量为200～300 g。⑤致敏后12～14 d，PCA蓝斑直径可达峰值，短致敏周期为8 d。结论：OVA致敏剂量、添加佐剂、佐剂用量、致敏和被动致敏动物体质量及致敏时间因素均对PCA结果有影响，试验时应予以重视。
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抗TNF-α、IL-1β IgY抗体抗豚鼠过敏性支气管哮喘的实验研究
目的:探讨抗TNF-α、IL-1β IgY抗体治疗过敏性支气管哮喘的作用机制.方法:卵清白蛋白雾化吸入制备Hartley豚鼠过敏性支气管哮喘动物模型,随机分正常对照组(A组)、过敏性支气管哮喘模型组(B组)、0.1%抗TNF-α、IL-1β IgY(C组)和1.0%抗TNF-α、IL-1β IgY雾化吸入治疗组(D组).各组豚鼠治疗结束后2、4、8、24小时处死,肺组织切片H.E.染色;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)Wright's染色计数炎症细胞.结果:①肺组织病理改变:B组各时间点可见肺泡管和肺泡壁结构受损,肺泡腔内充满渗出液、上皮细胞和白细胞,肺间质水肿、炎性细胞浸润、毛细血管扭曲或扩张淤血、有效血流的毛细血管显著减少.C组和D组肺泡管和肺泡壁结构受损轻于B组,肺泡腔内偶见少量炎症细胞,支气管腔及肺泡中的粘液栓较B组明显减少,支气管周围少见炎性细胞浸润,支气管粘膜上皮修复现象明显.②BALF细胞学变化:与B组相比,C和D组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量显著下降(2、4、8小时,P均<0.05);巨噬细胞显著上升(2、4、8小时,P均<0.05).结论:抗TNF-α、IL-1β IgY抗体雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘能够显著减轻炎症病理反应.0.1%与1.0%的抗TNF-α、IL-1β IgY抗体疗效相当.
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环孢霉素A对OVA免疫TCR转基因DO11.10小鼠CD4+CD25+T细胞的影响
目的:研究免疫抑制剂CsA对处于免疫应答状态的小鼠脾脏调节性CD4+CD25+T细胞影响.方法:采用流式细胞术检测卵白蛋白(OVA)免疫的DO11.10小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及其中Foxp3+T细胞的变化.结果:OVA免疫后脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞百分数及Foxp3+T细胞占CD4+CD25+T细胞百分数均增加,显示CsA可明显减少正常及免疫应答状态下小鼠脾脏CD4+CIY25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分数.结论:CsA在抑制免疫应答的同时也可能抑制了免疫耐受的诱导.
关键词： CD4+CD25+T细胞 CsA OVA -
不同剂量低分子姬松茸多糖联合OVA诱导ICR小鼠Th1/Th2免疫反应的机制
目的 探讨不同剂量低分子姬松茸多糖(LMPAB)联合OVA诱导ICR小鼠Th1/Th2免疫反应的机制.方法 将84只6~8周龄体质量(18±2)g SPF级雄性ICR小鼠随机分为7组(n=12),即OVA组(OVA 100μg/只)、Alum组(OVA 100μg/只+Alum 200μg/只)、LMPAB-1组(LMPAB 25μg/只+OVA 100μg/只)、LMPAB-2组(LMPAB 50μg/只+OVA 100μg/只)、LMPAB-3组(LMPAB 100μg/只+OVA 100μg/只)、LMPAB-4组(LMPAB 200μg/只+OVA 100μg/只)及LMPAB-5组(LMPAB 400μg/只+OVA 100μg/只),分别于1 d和15 d背部皮下两点注射免疫,28 d后分别取抗凝血及脾并分别分离血清及脾淋巴细胞,采用CCK-8法及ELISA法观察不同剂量LMPAB联合OVA分别诱导ICR小鼠对其脾淋巴细胞增殖及特异性抗体IgG1、IgG2 b、IgG表达的影响.结果 与OVA组相比,LMPAB-1、2、3、4组对OVA受免小鼠脾淋巴细胞有一定促进增殖作用(P<0.05),且LMPAB-2、3、4、5组IgG1、IgG2b、IgG表达均较明显(P<0.05);与Alum组比较,不同剂量LMPAB组IgG1表达均相对较弱(P<0.05),LM-PAB-2、3、4组IgG2b表达明显(P<0.05),而LMPAB-1、2、5组IgG表达较弱(P<0.05).结论 LMPAB能够辅助OVA促进受免小鼠脾淋巴细胞增殖,同时激活并改善Th1/Th2免疫功能.
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姬松茸多糖ABP-AW1对OVA诱导CTL应答影响的研究
目的 探讨姬松茸中分离纯化的低分子量多糖(ABP-AW1)与OVA体内共同免疫后对OVA诱导CTL应答的影响.方法 用表达OVA抗原的E.G7-OVA肿瘤细胞给C57BL/6小鼠荷瘤,并将小鼠随机分成5组:PBS组、OVA组、OVA+ABP-AW1(低、中、高剂量)组.于荷瘤后第3 d按不同分组给小鼠进行第1次免疫,第1次免疫后7 d和14 d分别进行第2次和第3次免疫.第3次免疫后10 d处死小鼠,运用细胞毒性杀伤实验(LDH)检测ABP-AW1对OVA诱导CTL应答的影响.结果 OVA与中、高剂量ABP-AW1共同免疫组小鼠的CTL对E.G7-OVA细胞的杀伤活性明显高于OVA单独免疫组(P<0.05).结论 ABP-AW1促进OVA诱导的E.G7-OVA荷瘤小鼠CTL应答,ABP-AW1作为肿瘤疫苗佐剂具有一定的潜在价值.
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香菇多糖对卵白蛋白诱导小鼠哮喘模型树突细胞TIM4表达及炎症影响
目的:研究香菇多糖治疗卵白蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型后树突状细胞TIM4表达情况及炎症影响.方法:将Balbc雌性小鼠随机分为三组:正常对照组、哮喘模型组、香菇多糖治疗组.OVA诱导激发小鼠哮喘模型,治疗组于第7天起每天进行香菇多糖腹腔注射治疗,哮喘模型组用生理盐水替代香菇多糖进行腹腔注射.分离脾脏单个核细胞,流式细胞学术检测树突细胞TIM4表达;ELISA检测血清IL-4和MCP-1浓度;Q-PCR检测肺组织中TIM4表达;肺组织HE染色.结果:治疗后,治疗组能下调脾脏树突细胞TIM4表达(P<0.05),降低血清中MCP-1、IL-4浓度(P<0.05,P<0.01).肺组织中TIM4的RNA表达量下降(P<0.05).HE染色显示治疗组肺组织炎症浸润明显减轻.结论:香菇多糖能通过下调树突细胞TIM4表达,降低炎症因子IL-4、MCP-1等浓度,抑制OVA哮喘模型的炎症反应.
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神经生长因子抗体对哮喘模型大鼠肺中趋化素样因子1表达的影响
目的 观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化.方法 采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng·kg-1)及NGF抗体(0.1 mg·L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达变化.结果 CKLF1在OVA诱导的哮喘模型大鼠肺组织中的蛋白表达升高(P<0.05);NGF抗体能够降低CKLF1的表达;CKLF1在哮喘大鼠BALF中的含量升高(P<0.05),NGF抗体能够降低BALF中CKLF1的含量(P<0.05);NGF对肺组织及BALF中CKLF1的表达没有明显的影响.结论 NGF抗体能够抑制哮喘模型大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中CKLF1的表达和释放,改善哮喘症状.
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日本血吸虫感染对OVA诱导的小鼠过敏反应的影响
目的 研究蠕虫感染对过敏性哮喘的影响.方法 将15只BALB/c小鼠随机分成3组,每组5只.Ⅰ组为血吸虫感染后OVA致敏组,Ⅱ组为单纯OVA致敏组,Ⅲ组为正常对照组.Ⅰ组小鼠首先建立日本血吸虫感染模型,于感染后第57～84d,与Ⅱ组小鼠一起以OVA(卵清白蛋白)诱导建立过敏性哮喘模型,第85d剖杀全部小鼠,收集脾脏、肺脏和支气管肺泡灌洗液. 制备支气管肺泡灌洗液涂片以计数其中各类细胞;制备肺组织切片以检查肺部病理变化;培养脾细胞以检测培养上清中相关细胞因子水平.另外,还要检测支气管肺泡灌洗液中相关细胞因子水平.结果 与Ⅱ组相比,Ⅰ组小鼠肺部嗜酸粒细胞数量显著减少(P＜0.05),肺部炎症明显减轻(P＜0.05), 支气管肺泡灌洗液和脾细胞培养上清中IL-4和IL-5水平均降低(P＜0.05),而IFN-γ水平无明显改变(P＞0.05).结论 日本血吸虫感染对OVA诱导的过敏性哮喘有抑制作用.
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小青龙汤抗过敏性鼻炎的实验研究
目的 探讨小青龙汤抗豚鼠过敏性鼻炎的作用机制.方法 Ovalbumin(OVA)滴鼻建立豚鼠过敏性鼻炎模型.随机分为6组.分别为空白组(A组),模型组(B组),氯雷他定组(C组),小青龙汤高、中、低剂量组(D组、E组、F组),连续给药14 d,观察各组豚鼠鼻粘膜病理变化,并采用ELISA方法检测治疗前后各组豚鼠血清中OVA-sIgE的浓度.结果 与模型组相比较,小青龙汤各剂量组豚鼠鼻粘膜炎性细胞浸润及水肿程度减轻,小青龙汤高、中剂量组血清中OVA-slgE的浓度明显减轻(P<0.05).结论 小青龙汤通过减轻炎性浸润和抗原抗体反应发挥抗过敏性鼻炎作用.
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室内燃煤PM2.5对卵蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症作用
目的:探讨室内燃煤PM2.5对卵蛋白(OVA)诱导哮喘大鼠的气道炎症作用及其对肺组织病理改变.方法:将40只6周龄雄性SD大鼠随机分为Control、OVA、PM2.5、PM2.5+OVA 4组,通过气管滴注分别予以生理盐水、OVA(15μg/mL)和(或)PM2.5(2.5 mg/mL)混悬液200μL,2周/次,共4次.末次染毒24 h后收集支气管肺泡灌洗液(Balf)检测炎性细胞的分布、白介素4(IL?4)、γ干扰素(IFN?γ),右上肺组织做HE染色及电镜切片.结果:PM2.5+OVA组炎性细胞较Control组增多(P<0.05),主要以淋巴细胞及单核细胞为主;HE染色镜下见Control组炎性细胞浸润较少,PM2.5组及OVA组炎性细胞中等量浸润,PM2.5+OVA组大量炎性细胞浸润;电镜下Control组未见异常,OVA组可见有大量即将脱落细胞,局部可见II型细胞破损,PM2.5组可见内皮细胞广泛水肿,肺泡间隔可见大量纤维,PM2.5+OVA组炎性细胞浸润,细胞器大量破坏,基底膜厚度不均,气血屏障结构不清晰;PM2.5+OVA组IL?4与Control组、OVA组及PM2.5组间均有差异(P<0.05),IFN?γPM2.5+OVA组较Control组有差异(P<0.05),IL?4与IFN?γ呈负相关(r=-0.358,P<0.05).结论:室内燃煤PM2.5加重OVA诱导的哮喘大鼠气道炎性细胞浸润及病理性改变.
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呼吸道合胞病毒感染后期OVA刺激对小鼠气道炎症及AHR的影响
目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染后期过敏原刺激对小鼠气道炎症及AHR的影响.方法 6～8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为Mock组、RSV组、OVA组及R+O组.检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数;苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病理损伤;全身体积描述记法检测小鼠气道反应性;ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、CXCL10、CCL5、CCL20的水平.结果 R+O组小鼠BALF中炎症细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞分类计数较其他3组均显著增高(P＜0.05);R+O组小鼠肺组织病理评分及AHR较其他3组亦显著增高(P＜0.05);BALF中各处理组IL-4、IL-5较Mock组明显增高(P＜0.05),但处理组之间无显著性差异;R+O组CXCL10水平较其他3组显著升高(P＜0.05).结论 RSV感染后期接受OVA刺激可致CXCL10表达增加,进而促使巨噬细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞募集,加重小鼠气道炎症及AHR.
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PLGA为佐剂的OVA纳米疫苗皮下注射可预防小鼠过敏反应性气道炎症和调节Thl/Th2反应
目的 探讨聚乳酸.羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactic-co-glycolic)acid,PLGA]包裹的卵清蛋白(OVA)纳米癌苗(POM)对哮喘小鼠的免疫治疗效果.方法 包裹不同剂量(低、中、高)的OVA纳米粒子和对照(OVA、空白纳米粒子、PBS)通过皮下注射给予小鼠,再用OVA进行致敏和激发,通过肺组织学、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、测定BALF和脾细胞培养上清液中细胞因子的含量,观察小鼠呼吸道炎症和免疫学改变.结果 肺部组织学和BALF中细胞计数结果显示,与PBS对照组相比,OVA治疗组、中剂量和高剂量OVA纳米组的肺部嗜酸性浸润显著减轻,BALF中总细胞和嗜酸性细胞显著减少.卸胞因子测定结果显示,与PBS对照组相比,中、高剂量OVA纳米组的BALF和脾细胞培养上清液中IFN-γ显著升高,Ⅱ,4水平显著降低.OVA治疗组中IL-4水平显著下降,而IFN-γ水平无显著差异.结论 OVA纳米疫苗可预防哮喘嗜酸性气道炎症,其可能的机制之一是调节了过敏性哮喘的Th1/Th2失平衡反应.
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Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈
目的 建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响.方法 首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC Ⅰ类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化.结果 酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHCⅠ类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立.在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降.结论 成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础.
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树突状细胞靶向性DNA疫苗的抗肿瘤免疫效应
目的: 构建含OVA-Fc融合基因并对树突状细胞具有靶向性的DNA疫苗, 评价其在肿瘤治疗中的作用.方法: 构建真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1, 以脂质体转染法将其导入CHO细胞, 用流式细胞术和ELISA法检测融合蛋白OVA-Fc的表达.建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型, 用 51Cr释放实验测定免疫小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤活性.通过观察荷瘤小鼠肿瘤的体积和生存期评价该肿瘤疫苗的疗效.结果: 酶切鉴定和序列测定证明, 真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1构建正确.用流式细胞术和ELISA法均表明, 转染的CHO细胞能表达OVA-Fc融合蛋白.OVA-Fc能激发CTL的杀伤活性, 发挥抗肿瘤作用, 从而减缓肿瘤的生长, 延长荷瘤小鼠的生存期.结论: 含OVA-Fc-pcDNA3.1的树突状细胞靶向性DNA疫苗能在体内有效地激发抗瘤免疫应答, 为进一步开展临床实验奠定了基础.
