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15d-PGJ2减弱香烟提取物抑制人脐静脉内皮细胞迁移
目的 探讨15-脱氧-△12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)对香烟提取物(CSE)抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移的保护作用.方法 "划痕法"检测HUVECs的迁移.毛细管样成管实验检测HUVECs的血管新生.westem blot检测occludin蛋白表达.结果 与对照组相比,CSE显著抑制HUVECs迁移,使单个视野划痕内细胞数由629±28降低至364±17(P＜0.01),15d-PGJ2干预可使细胞数回升至546+20(P＜0.01).CSE抑制HUVECs血管新生,15d-PGJ2可逆转CSE对HUVECs血管新生的抑制.与对照组相比,CSE使HUVECs occludin蛋白表达量由0.37±0.04降至0.12±0.03(P＜0.01).15d-PGJ2干预可使其回调至0.28±0.04(P＜0.01),但仍低于对照组(P＜0.05).结论 CASE对HUVEVs迁移的抑制作用可能是通过下调occludin蛋白的表达实现的.15d-PGJ2减弱CSE下调occludin表达而逆转CSE对HUVECs迁移的抑制.
关键词： 香烟提取物 内皮细胞迁移 15-脱氧-前列腺素J2 -
香烟提取物对大鼠肺泡巨噬细胞活性及基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶组织抑制剂1平衡的影响
自1963年Laurell及Eriksson报道α1抗胰蛋白酶(α1-AT)与肺气肿的关系以来,蛋白酶/抗蛋白酶失衡在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用成为研究热点.近年研究表明,中性粒细胞弹性蛋白酶主要在α1-AT缺乏的COPD中起作用,而吸烟相关的COPD发病机制则有待于深入研究.
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香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖
吸烟是影响支气管哮喘(简称哮喘)发生、发展的重要危险因素[1].香烟烟雾能增加卵清白蛋白(OVA)致敏豚鼠气道急性变应性炎症[2].我们既往的研究结果证实蛋白激酶C(PKC)信号通路在香烟提取物(CSE)促哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖过程中起重要作用[3].
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血管紧张素转化酶2在香烟提取物诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)在香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖中的作用.方法 分离大鼠PASMCs并培养,加入1μmol/L或10μmol/L氯沙坦(一种特异性的血管紧张素II受体拮抗剂)预处理30min,加入2%CSE处理24h,用CCK-8检测试剂盒检测细胞增殖,Western blotting法检测细胞ACE2蛋白含量.结果 2%CSE能显著诱导大鼠PASMCs增殖,2%CSE处理后细胞表达ACE2水平较对照组明显降低;经过10μmol/L氯沙坦预处理的大鼠PASMCs增殖较单纯用2%CSE处理的细胞增殖减慢,但细胞ACE2表达水平相对升高.结论 CSE能诱导大鼠PASMCs增殖,这可能与CSE降低细胞ACE2表达水平有关,因此ACE2在吸烟引起的肺血管重构中可能具有保护作用.
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miR-21降解PTEN影响香烟提取物诱导的PASMCs的增殖与迁移
目的 探讨微小RNA-21(miR-21)的表达对香烟提取物诱导的肺动脉平滑肌细胞中的PTEN/PI3K/AKT通路及增殖与迁移的影响.方法 分离雄性SD大鼠的肺细小动脉平滑肌细胞(PASMC),10％ CSE处理PASMCs 24h后分别在PASMCs中转染miR-NC、miR-21、anti-miR-NC、anti-miR-21,通过real-time-PCR检测转染效率.Western blot法检测4组PASMCs增殖及凋亡蛋白PCNA、Bcl-2、caspase-3以及PTEN和相关信号通路中AKT/P-AKT的表达量.通过MTT实验比较4组细胞增殖的变化.用细胞划痕和Transwell实验检测4组细胞迁移能力的变化.结果 转染miR-21组的miR-21表达量与转染miR-NC组的比较表达量上升(P =0.000),而anti-miR-21组的比anti-miR-NC的miR-21表达量下降(P=0.000).在10％ CSE处理后,过表达miR-21后抑制了PTEN的表达从而上调了AKT/P-AKT,进而使PCNA和Bcl-2的表达上升,caspase-3的表达被抑制,相反敲降miR-21后PTEN表达上升,AKT/P-AKT活性下降,PCNA以及Bcl-2的表达被抑制,caspase-3表达上升.在10％ CSE作用下过表达miR-21后PASMCs的增殖能力显著增强(P＜0.01),而敲降miR-21后PASMCs的增殖能力减弱(P＜0.01).在10％ CSE作用下过表达miR-21后PASMCs的迁移能力增强,而敲降miR-21后PASMCs的迁移能力减弱.结论 miR-21通过负向调控PTEN从而活化PI3 K/AKT信号通路促进了香烟提取物诱导的PASMCs的增殖迁移.
关键词： miR-21 香烟提取物 肺动脉平滑肌细胞 PTEN/PI3K/AKT -
热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用及机制
目的 探讨热休克蛋白70 (HSP70)在气道黏液高分泌中的作用及机制.方法 用8％香烟提取物(CSE)处理人气道A549细胞后,分别给予HSP70抗体阻断剂、c-Jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125进行干预.实验共分4组:空白对照组(无血清培养基培养)、CSE刺激组(加入8％ CSE培养24 h)、HSP70抗体组(HSP70单抗预处理30 min,再给予8％ CSE继续培养24h)、SP600125组(加入JNK特异性抑制剂SP600125 30 μmol/L预处理30 min,再给予8％ CSE继续培养24 h).酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组中MUC5AC蛋白的相对表达量,逆转录-PCR检测MUC5AC mRNA的相对表达量,Western印迹法检测HSP70水平,Western印迹法检测JNK及激活蛋白-1(主要为c-Jun)磷酸化水平.结果 CSE刺激组细胞MUC5AC蛋白、MUC5AC mRNA、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun相对表达量(0.52±0.07、0.64±0.11、0.73±0.06、0.67±0.10、0.67±0.09)均显著高于空白对照组(0.26±0.10、0.28±0.06、0.30±0.05、0.30±0.08、0.36±0.08)、HSP70抗体组(0.30±0.12、0.29±0.09、0.34±0.06、0.47±0.19、0.39±0.13)和SP600125组(0.38±0.06、0.31±0.14、0.39±0.04、0.44±0.12、0.48±0.11),HSP70 (0.75±0.09)也显著高于空白对照组(0.29±0.03)、HSP70抗体组(0.40±0.11)(均P＜0.05).结论 HSP70可能通过JNK/激活蛋白-1信号通路上调气道A549细胞中MUC5AC的表达.
关键词： HSP70热休克蛋白质类 黏蛋白类 香烟提取物 激活蛋白 -
香烟提取物诱导牛冠状动脉内皮细胞损伤的机制
目的 通过观察香烟提取物对牛冠状动脉内皮细胞(BCAEC)的损伤作用,为研究吸烟与心血管疾病之间的关系提供依据.方法 以吸烟者体内通常的尼古丁浓度为基准,分别用尼古丁、香烟主流烟雾提取物(MSW)和侧流烟雾提取物(SSW)对BCAEC进行染毒(尼古丁染毒终浓度分别为1×10-5、0.8×10-5、0.9×10-5mol/L),用显微数码成像系统记录细胞形态变化,检测凋亡细胞与坏死细胞的发生比例,测定caspase酶活力.结果 经尼古丁、MSW处理的BCAEC形态上发生凋亡样变化,处理24 h后凋亡细胞发生率为5.89%和11.94%,而SSW处理后的BCAEC呈坏死样变化,处理24 h后62.84%的细胞发生坏死.尼古丁和MSW可诱导caspase-3活力增高.结论 香烟提取物可诱导牛冠状动脉内皮细胞损伤,MSW可引起细胞凋亡,SSW导致细胞坏死,caspase-3的激活可能是香烟提取物诱导牛冠状动脉内皮细胞凋亡的机制.
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香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖作用的研究
目的：探讨香烟提取物（CSE）对人气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖以及钙网织蛋白（CRT）、CCAAT增强子结合蛋白α（CEBPα）表达的影响及机制。方法（1）通过收集经不同浓度CSE处理24 h的ASMCs，分为对照组、2.5%CSE组、5%CSE组、10%CSE组。以MTT法分析各组细胞增殖情况，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞CEBPα的mRNA水平；免疫印迹法检测4组细胞CRT、CEBPα的蛋白水平。（2）在10%CSE组，分别在ASMCs中转染阴性对照siRNA、CRT的siRNA，比较2组ASMCs的CEBPα、CRT表达及细胞增殖情况。结果（1）对照组、2.5％CSE组、5％CSE组、10％CSE组ASMCs的CEBPα蛋白表达依次递减，CRT和细胞增殖程度呈依次增高（P＜0.05）；而CEBPαmRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）在10％CSE作用下，CRTsiRNA组中ASMCs的CEBPα表达较阴性对照siRNA组增强（P＜0.05），而CRT和细胞增殖程度均较相应阴性对照siRNA组减弱（P＜0.05）。结论 CSE可使ASMCs中CRT的表达增强，从而抑制CEBPαmRNA的翻译，使CEBPα的表达减少，终促进ASMCs的增殖。
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普伐他汀预处理对香烟提取物诱导的小鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能机制研究
目的 探讨普伐他汀预处理对香烟提取物(CSE)诱导的小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及可能机制.方法 2017年6月—2018年1月,采用负压吸引装置抽吸香烟烟雾并经过滤除菌制备CSE原液,取10代以内生长状态良好的对数期VSMCs进行实验.(1)将实验细胞分为不同浓度CSE诱导组,其中空白组使用不含CSE的DMEM培养基培养12 h,低浓度组、中浓度组、高浓度组分别于含1%、5%、10% CSE的DMEM培养基培养12 h.(2)将实验细胞分为不同剂量普伐他汀预处理组,其中对照组使用不含普伐他汀的DMEM培养基培养12 h;低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予1 μM、10 μM、100 μM普伐他汀预处理2 h,然后使用含5% CSE的DMEM培养基培养12 h;部分实验设置阳性对照组,阳性对照组给予4-苯丁酸(4-PBA)2 mM预处理2 h,然后使用含5% CSE的DMEM培养基培养12 h.采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2、Bax、GRP78、Chop mRNA相对表达量,采用Western Blot检测Bcl-2、Bax、GRP78、Chop蛋白相对表达量.结果 (1)低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞凋亡率高于空白组,中浓度组和高浓度组细胞凋亡率高于低浓度组,高浓度组细胞凋亡率高于中浓度组(P<0.05).(2)低浓度组、中浓度组和高浓度组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量低于空白组,中浓度组和高浓度组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量低于低浓度组,高浓度组Bcl-2蛋白相对表达量低于中浓度组(P<0.05);低浓度组、中浓度组和高浓度组Bax mRNA和蛋白相对表达量高于空白组,中浓度组和高浓度组Bax mRNA和蛋白相对表达量高于低浓度组,高浓度组Bax mRNA相对表达量高于中浓度组(P<0.05).(3)低浓度组、中浓度组、高浓度组GRP78、Chop mRNA和蛋白相对表达量高于空白组,中浓度组、高浓度组GRP78、Chop mRNA和蛋白相对表达量高于低浓度组,高浓度组GRP78 mRNA、Chop蛋白相对表达量高于中浓度组(P<0.05).(4)低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋亡率低于对照组,中剂量组细胞凋亡率低于低剂量组和高剂量组(P<0.05).(5)低剂量组、中剂量组、高剂量组Bcl-2蛋白相对表达量高于对照组,Bax蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05);中剂量组Bax蛋白相对表达量低于低剂量组和高剂量组(P<0.05).(6)阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组GRP78和Chop蛋白相对表达量低于对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组GRP78蛋白相对表达量低于阳性对照组,中剂量组GRP78蛋白相对表达量低于低剂量组、Chop蛋白相对表达量低于阳性对照组(P<0.05).结论 CSE可诱导小鼠VSMCs凋亡,且呈浓度依赖性;普伐他汀预处理对CSE诱导的小鼠VSMCs凋亡具有一定保护作用,其中10 μM普伐他汀预处理的抗细胞凋亡作用佳,其机制可能与调控内质网应激信号途径有关.
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不同条件下香烟提取物对血管内皮细胞纤溶平衡的影响
目的 研究不同条件下香烟提取物(CSE)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)含量的影响.方法 选用第4代～6代HUVECs,接种于24孔培养板中,分为3组:①对照组;②不同浓度(5%、10%、20%)同一时间点CSE组:6 h后收集各组细胞上清液;③同一浓度不同时间点CSE组:5%CSE刺激HUVECs,于不同时间点(4 h、6 h、8 h、12 h、24 h)分别收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析(ELISA)法测定各组上清液中t-PA和PAI-1的抗原浓度.结果 与对照组相比,不同浓度(5%、10%、20%)同一时间点CSE组中,6 h后各浓度CSE组PAI-1含量均显著增高(P<0.05),但各组间差异无统计学意义,10%与20%CSE组t-PA含量变化明显降低,而5%CSE组t-PA含量变化无统计学意义.同一浓度不同时间点CSE组中,5%CSE组PAI-1含量较对照组升高,且呈时间依赖性;t-PA含量变化无统计学意义.结论 CSE可直接损伤血管内皮细胞,并抑制其纤溶活性,从而增加血栓病的发生.
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香烟提取物影响大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子的表达
背景:血管平滑肌细胞增殖是心血管系统组织变化的基础.目的:观察不同浓度香烟提取物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响.方法:取第3代大鼠主动脉平滑肌细胞,分别用体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物进行干预.结果与结论:实时定量RT-PCR结果显示,体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物作用12 h均可促进大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,以体积分数5%香烟提取物的作用明显,且其刺激大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达在24 h内呈时间依赖性.提示香烟提取物可上调大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,导致大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖.
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香烟提取物和腺病毒E1A基因对肺泡上皮细胞ICAM-1表达的影响
目的:探讨香烟提取物(CSE)致肺泡上皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的作用及腺病毒E1A基因的影响.方法:通过脂质体转染的方法将腺病毒E1A基因转染A549细胞,获取E1A阳性表达A549细胞,不同浓度的CSE活化,测定细胞ICAM-1的表达.结果:CSE显著增加A549细胞ICAM-1表达,且呈浓度依赖性;与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较,CSE活化后E1A阳性表达A549细胞ICAM-1表达显著增加.结论:CSE能够诱导肺泡上皮细胞ICAM-1表达,而腺病毒E1A基因显著增加CSE所致的肺泡上皮细胞ICAM-1表达,提示腺病毒潜伏感染放大吸烟所致的气道炎症反应.
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香烟提取物活化大鼠支气管平滑肌细胞蛋白激酶C亚型及下调钾通道BKCa、Kv1.5表达
大电导的钙活化钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel,BKCa)和电压依赖性钾通道Kv1.5在气道高反应性的发牛机制中具有重要作用.已知吸烟可致气道高反应,但钾通道的变化在其发病中的作用尚需进一步阐明.本文旨在研究香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)对培养的大鼠支气管半滑肌细胞(bronchial smooth muscle cels,BSMCs)钾通道BKCa和Kv1.5表达的直接作用,以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在其中的作用.实验采用原代培养人鼠BSMCs,用5%CSE刺激,免疫印迹检测PKC亚型的表达和转位,半定量RT-PCR、免疫印EIJ迹实验检测BKca和Kv1.5的mRNA和蛋白表达,然后用PKC抑制剂BIM和G6e6983与CSE共作用,检测其对BKCa 和Kv1.5的mRNA和蛋门表达的影响.结果显示,5% CSE使PKCε、η、θ发生明显的膜转位,并使BKCa和Kv1.5的蛋白和mRNA表达明显降低;选择性PKC抑制剂BIM或Goe6983与CSE共同作用,均可使BKCa和Kv1.5的蛋白和mRNA表达部分恢复.上述结果提示,CSE可引起BSMCs的BKCa和Kv1.5表达下调,PKC￡、T1、ε、η、θ参与其信号转导.
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香烟提取物对人非小细胞肺癌细胞系侵袭力及MTA1表达的影响
[目的]研究香烟提取物(CSE)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响及可能机制.[方法]CSE处理NSCLC细胞系A549 、LH7与BE1,对照组正常培养.Transwell实验检测两组细胞的侵袭能力,RT-PCR法和Western blot法检测两组细胞MTA1 mRNA及蛋白表达情况.[结果]CSE处理各CSE组细胞侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组;且各CSE组中MTA1 mRNA和蛋白表达水平也明显高于对照组(P＜0.05).[结论]香烟提取物导致NSCLC细胞系侵袭能力增加与其促进NSCLC细胞系中MTA1 mRNA及蛋白表达有关.
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蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2调节香烟提取物诱导的肺上皮间质转化
目的 探索蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导肺上皮间质转化(epi-thelial-mesenchymal transition,EMT)的调节作用.方法 采用Q-PCR法和ELISA法探究Shp2抑制剂PHPS1对CSE诱导的肺上皮细胞转化生长因子 β1(TGF-β1)表达的影响;免疫荧光染色法检测EMT相关因子的表达;Western blot法检测p-Shp2/Shp2、p-Smad2/Smad2的蛋白水平.结果 CSE诱导肺上皮细胞Shp2的激活,导致TGF-β1分泌释放增加,进而引起E-钙黏蛋白表达下调,以及波纹蛋白和 α-肌动蛋白表达上调,这些变化可被Shp2抑制剂PHPS1抑制.抑制Shp2活性或表达可抑制CSE诱导的Smad2的磷酸化.结论 Shp2调节CSE诱导的肺上皮间质转化可能通过Shp2/Smad2信号途径,提示Shp2可能是治疗肺癌和慢性阻塞性肺病新靶点.
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香烟提取物对血栓调节蛋白与凝血酶结合力的影响
目的：利用单分子力谱法检测香烟提取物( cigarette smoke extract, CSE)对血栓调节蛋白( thrombomodulin, TM)与凝血酶间单分子水平相互作用,探讨吸烟致血管内血栓形成机制。方法构建TM-GFP质粒并转染至COS-7细胞,应用原子力显微镜( atomic force microscope, AFM)分组测力：(1)空白质粒对照组(GFP-Thr)；(2)TM-Thr对照组；(3)5%CSE孵育TM-Thr细胞组(CSE-TM-Thr)；(4)5%CSE孵育空白质粒细胞组(CSE-GFP-Thr)。结果(1)TM与凝血酶的相互作用力为(60．90±0．82) pN,成键几率为(22．58±3．95)%,抗体阻断后成键几率为(2．58±2．0)%。(2)与TM-Thr 组比较, GFP-Thr 组、CSE-TM-Thr 组、CSE-GFP-Thr组,3组AFM成键几率明显减低,P<0．05；但3组间两两比较差异无统计学意义。在定量TM修饰的硅片表面检测证实CSE同样可减少TM与凝血酶的成键几率。结论吸烟可能通过减少TM与凝血酶结合几率,抑制TM的抗凝作用,从而导致血管内血栓形成。
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香烟提取物的致突变性研究
[目的]实验观察香烟提取物(TPM)的致突变性.[方法]取香烟TPM样品11个,按不同剂量(100、500、1 000μg/皿),采用平板掺人法进行Ames试验检测TPM的致突变性;按30、100、300 mg/kg剂量进行小鼠骨髓微核试验.[结果]Ames试验样品在不经活化时(-S9)500、1 000 μg/皿,TA98、TA100、TA97、TA102 Rt/Rc值>2有剂量-反应关系(r=0.93,P<0.01);样品经活化后(+S9)500、1 000 μg/皿,TA98、TA100、TA97、TA102Rt/Rc值均>2.25个剂量组微核阳性率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).[结论]香烟TPM有致突变作用.
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结缔组织生长因子在香烟提取物致人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究
目的：探讨香烟提取物（CSE）对人肺动脉平滑肌细胞（hPASMC）增殖的影响及结缔组织生长因子（CTGF）在其中的作用。方法培养的hPASMC随机分为正常对照组（A）、缺氧对照组（B）、CSE组（C）、CSE＋rhTGF‐β1组（D）、CSE＋CTGF正义寡核苷酸组（E）、CSE＋CTGF反义寡核苷酸组（F），分别检测细胞增殖、CTGF mRNA及蛋白表达、细胞培养上清液中I型胶原含量。结果细胞增殖检测，C组与A组比较明显升高，D组与C组比较，D组升高更卓著，F较C组下降显著（ P均＜0．01）；E和C组之间无显著性差异（ P ＞0．05）。hPASMC内CTGF蛋白表达量C组较A组明显升高，D较C组升高更明显，F较C组下降显著（ P均＜0．01）；E组与C组之间无显著性差异（ P ＞0．05）；CTGF mRNA表达结果及细胞培养上清液中I型胶原含量均与蛋白表达有相似趋势。结论 CSE能诱导hPASMC增殖，CTGF可能在其中起重要作用。
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香烟提取物对肺癌细胞中MTA1mRNA表达的影响
目的 研究香烟提取物对肺癌细胞肿瘤转移相关基因1( MTA1) mRNA表达的影响.方法 参照已有文献的方法制备香烟提取物(CSE),用CSE处理高转移能力的肺巨细胞肺癌PG细胞系亚系BE1细胞系、低转移能力的肺巨细胞肺癌PG细胞系亚系LH7、人肺腺癌细胞系A549,观察CSE处理前后癌细胞中MTA1 mRNA表达水平.结果 CSE处理后各肺癌细胞系MTA1 mRNA表达水平均明显增加(P均＜0.05).结论 CSE能促进肺癌细胞中MTA1 mRNA表达,其可能通过引起MTA1下游基因改变而促进肺癌的发生、发展.
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香烟提取物和脂多糖对小鼠肺上皮细胞株MLE-12活性及水通道蛋白 5 mRNA表达的影响
目的:探讨香烟提取物(CSE)和脂多糖(LPS)对小鼠肺上皮细胞株MLE-12水通道蛋白5(AQP5)表达的影响及其在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中的作用.方法:MTT法检测CSE和LPS对MLE-12的毒性,并选择合适的CSE和LPS浓度单独或共同刺激MLE-12细胞后,实时定量PCR检测其AQP5的表达.结果:与正常不含CSE的DMEM培养液相比较,MLE-12细胞在CSE小于10%时的DMEM/F12培养液中活性无明显降低(P>0.05),当CSE浓度达15% 时各组细胞活性显著降低(P<0.01).而不同浓度LPS对MLE-12活性无明显影响.CSE(10%)、LPS(20μg/ml)分别刺激MLE-12后,其AQP5的表达水平降低,CSE(10%)和LPS(20μg/ml)共刺激后,其水平进一步降低.CSE组和LPS组之间差异无显著性统计学意义.结论:CSE协同LPS可降低MLE-12细胞AQP5的表达,AQP5的下调可能参与了COPD的发生和发展.
