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高表达血管紧张素转化酶2的内皮祖细胞降低野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压
目的 探讨高表达血管紧张素转化酶2(ACE2)基因的内皮祖细胞(EPCs)对肺动脉高压(PAH)大鼠的干预作用.方法 体外分离大鼠骨髓EPCs并对其进行鉴定;用携带ACE2基因的慢病毒载体感染EPCs,检测感染前后EPCs中ACE2蛋白的表达及其增殖、成管功能的变化.将大鼠随机分为对照组(control组)、肺动脉高压组(PAH组)、内皮祖细胞治疗组(EPCs组)以及感染ACE2的内皮祖细胞治疗组(lenti-ACE2-EPCs组).用野百合碱诱导肺动脉高压大鼠模型,3周后测定平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RV/LV+S).肺组织HE染色,观察肺小动脉分布及炎性浸润,计算管壁厚度指数(TI)、面积指数(AI).Western blot检测肺组织中ACE2蛋白表达.结果 干预3周后,PAH组的 mPAP、RV/LV+S、TI 及 AI 均较对照组有显著上升(P<0.01);lenti-ACE2-EPCs 组的mPAP、RV/LV+S、TI 及 AI 则较 PAH 组、EPCs 组水平有显著下降(P<0.01);lenti-ACE2-EPCs 组大鼠肺组织中ACE2蛋白表达水平较PAH组明显增加(P<0.01).造模3周后,EPCs组的mPAP、RV/LV+S、TI及AI均较PAH组有明显下降(P<0.01),但与对照组及lenti-ACE2-EPCs组比较则均明显升高(P<0.01).结论 高表达ACE2基因的大鼠内皮祖细胞能有效降低肺动脉高压大鼠肺动脉压力,且其治疗作用优于内皮祖细胞.
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氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞泡沫化氧化损伤后血管紧张素转化酶2的表达变化及意义
目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化后血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化与氧化应激损伤的关系,探讨ACE2的抗氧化作用.方法 用不同浓度ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7泡沫化,油红O染色观察巨噬细胞内脂质堆积变化,并定量分析细胞内脂滴含量,通过检测细胞上清中丙二醛(MDA)含量鉴定细胞氧化损伤程度,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ACE2及MAS mRNA表达,化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性与还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 不同浓度(20、40、60、80mg/L)ox-LDL处理巨噬细胞24 h,油红O染色可见巨噬细胞变大、变圆,胞质内脂滴含量呈剂量依赖性增加;用60mg/Lox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型组中MDA含量较对照组明显升高(P＜0.01);Real-time PCR结果显示,模型组ACE2和MAS mRNA表达水平较对照组显著减少(P＜0.05);与对照组比较,模型组中SOD活性与GSH含量显著降低(P＜O.05或P＜0.01).结论 巨噬细胞泡沫化氧化损伤进程与ACE2及其下游受体MAS表达下调密切相关,提示ACE2具有一定的抗氧化作用,其机制可能与SOD及GSH有关.
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局部肾素-血管紧张素系统稳态失衡与急性肺损伤
肺组织存在局部的肾素-血管紧张素系统(RAS),ACE-AngⅡ-AT1轴和ACE2-Ang(1～7)-Mas轴作为RAS的两条核心轴,其调节失衡与急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发病机制相关.ACE-AngⅡ-AT1轴能够促进炎症反应、组织水肿和纤维化,对ALI/ARDS的发生发展起推动作用,而ACE2-Ang(1～7)-Mas轴具有负向调控RAS活性的作用,对ALI/ARDS发挥保护作用.因此,下调或阻断ACE轴、上调或激动ACE2轴将会为治疗ALI/ARDS提供新的可能.
关键词： 肾素-血管紧张素系统 血管紧张素转化酶 血管紧张素转化酶2 急性肺损伤 稳态失衡 -
肾素-血管紧张素系统的新调节分子:ACE2
血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)为含锌的金属蛋白酶,是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)重要的调节分子.血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是迄今发现的唯一的ACE同系物(homologue),它主要分布于睾丸、肾脏和心脏.ACE2可水解血管紧张素Ⅰ(angiotensin Ⅰ,Ang Ⅰ)和血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)羧基端的1个氨基酸残基,分别形成Ang1-9和有血管舒张作用的Ang1-7.ACE 2的生理病理作用还不甚明了,传统的ACE抑制剂不能抑制ACE2的活性.ACE2在心血管、肾脏系统的作用可能与ACE相反,与ACE共同调节心脏、肾脏等脏器的正常功能.
关键词： 肾素-血管紧张素系统 血管紧张素转化酶2 血管紧张素 -
维生素D对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织血管紧张素转化酶2和维生素D受体表达水平的影响
目的 观察维生素D(vitamin D,Vit D)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致Wistar大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)肺组织中血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzyme 2,ACE2)和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达水平的影响.方法 采用尾静脉注射LPS方法制备大鼠ALI模型;将30只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为6组:正常对照组(NC组)、LPS组:尾静脉注射LPS 5mg/kg、Vit D组:给予Vit D活性形式(骨化三醇)25 μg/kg连续灌胃3d和(LPS+ Vit D) 1-3组:分别于骨化三醇1μg/kg、5μg/kg、25 μg/kg灌胃3d后尾静脉注射LPS 5mg/kg,所有大鼠于注射LPS的24 h后进行后续实验.分别观察大鼠一般情况,肺组织病理及肺干/湿重比变化、肺组织中VDR、ACE2蛋白及基因水平的表达.结果 LPS组大鼠病态表现(呼吸浅快、精神萎靡、口鼻可见血性分泌物)明显,(LPS+ VitD) 1-3组病态表现和肺组织病理损伤均较LPS组明显减轻.LPS组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较NC组和Vit D组显著降低(P＜0.05),(LPS+ VitD) 1-3组各组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较LPS组有所升高(P＜0.05),但仍显著低于Vit D组(P＜0.05),其中(LPS+ Vit D) 1-3组各组VDR蛋白及基因水平的表达差异无统计学意义(P＞0.05),ACE2的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Vit D能使LPS致ALI大鼠肺组织中ACE2和VDR蛋白及基因表达水平增加,故此推测ACE2和VDR表达增加可能对ALI的发生、发展起保护作用.
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血管紧张素转化酶2激活预防肺动脉高压的实验研究
目的:探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)激活,对肺叶切除联合野百合碱注射,诱导重度肺动脉高压(PAH)的预防作用.方法:左肺切除+野百合碱注射建立大鼠重度PAH模型.雄性SD大鼠50只,随机分为5组,A组为空白对照组、B组为Resorcinolnaphthalein (Res)对照组,C组为PAH组,D组为Res预防组,E组为Res+ A-779干预组.测量平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI)；弹力纤维染色分析肺血管病变；ELISA、Western Blot分析肾素血管紧张素系统各主要成分的水平.结果:处理3w后,C组大鼠mPAP、RVHI明显升高,出现了严重的肺动脉中膜肥厚、内膜增生(与A组比较,P＜0.05),D组上述4项指标明显减轻(与C组比较,P＜0.05)；E组则比D组病变严重(P＜0.05).ACE、Ang-Ⅱ及AT1R水平,D组明显低于C组(P＜0.05),而ACE2、Ang-(1-7)及Mas水平D组明显高于C组(P＜0.05).结论:Res激活ACE2可以抑制重度肺动脉高压的形成,调节肾素血管紧张素系统的平衡,可能是其作用的主要机制之一.
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血管紧张素1-7预防肺动脉高压右心衰竭发展的实验研究
目的:探讨血管紧张素1-7对大鼠肺动脉高压(PAH)右心衰竭的预防作用.方法:雄性,SD大鼠,30只,随机分为四组,A组为空白对照组(n=6)、B组为PAH右心衰竭组(n=9)、C组为Ang-(1-7)干预组(n=9)、D组为Ang-(1-7)对照组(n=6),饲养6周.超声心动测定心功能,右心导管测定血流动力学参数;处死后测量右心室肥厚指数(RVHI),天狼星红染色计算心肌组织胶原容积分数(CVF);酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血浆及右心室心肌血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)含量,Western Blot测定右心室心肌信号通路分子表达.结果:超声心动检查提示与PAH右心衰竭组相比,Ang-(1-7)干预组4周时RVEDD、RVWT显著降低,RVEF显著提高.ELISA结果提示与PAH右心衰竭组相比,Ang-(1-7)干预组血浆Ang Ⅱ水平降低.病理染色提示与PAH右心衰竭组相比,Ang-(1-7)干预组CVF值显著降低.WB结果提示与PAH右心衰竭组相比,Ang-(1-7)干预组右心室心肌AT1R、Egr-1表达均显著降低.结论:PAH右心衰竭大鼠循环及右心室局部存在肾素血管紧张素系统(RAS)过度激活,血管紧张素1-7可能减缓肺动脉高压右心衰竭.
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血管紧张素转换酶2基因A9570G多态性与高血压合并左心室肥厚的相关性研究
目的 探讨血管紧张素转换酶2基因( ACE2) A9570G多态性与高血压合并左心室肥厚的关系.方法 选择高血压合并左心室肥厚(LVH)患者172例(LVH组)、高血压未合并LVH患者153例(NLVH组)以及对照组80例,应用聚合酶链反应(PCR)方法检测入选者ACE2基因A9570G多态性,按性别分别比较不同组别中基因型分布及等位基因频率的差异.结果 在女性,3组间等位基因频率比较差异有统计学意义(P=0.007),基因型分布差异也有统计学意义(P=0.034),其中LVH组GG基因型及C等位基因频率分别为30.0％和61.0％,高于NLVH组(18.7％和44.8％)及对照组(15.0％和40.0％).在男性,3组间等位基因/基因型频率比较差异有统计学意义(P =0.002),其中LVH组C基因型/等位基因频率为69.0％,高于NLVH组(47.6％)及对照组(40.0％).结论 ACE2基因A9570G多态性与高血压患者左心室肥厚相关.
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血管紧张素转化酶2在香烟提取物诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)在香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖中的作用.方法 分离大鼠PASMCs并培养,加入1μmol/L或10μmol/L氯沙坦(一种特异性的血管紧张素II受体拮抗剂)预处理30min,加入2%CSE处理24h,用CCK-8检测试剂盒检测细胞增殖,Western blotting法检测细胞ACE2蛋白含量.结果 2%CSE能显著诱导大鼠PASMCs增殖,2%CSE处理后细胞表达ACE2水平较对照组明显降低;经过10μmol/L氯沙坦预处理的大鼠PASMCs增殖较单纯用2%CSE处理的细胞增殖减慢,但细胞ACE2表达水平相对升高.结论 CSE能诱导大鼠PASMCs增殖,这可能与CSE降低细胞ACE2表达水平有关,因此ACE2在吸烟引起的肺血管重构中可能具有保护作用.
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通心络对自发性高血压大鼠肾损害的保护作用及机制
目的：研究通心络对自发性高血压大鼠（ SHR ）肾损害的干预作用及机制。方法10周龄雄性SHR 48只随机分成5组：SHR对照组（同龄Wistar大鼠作对照），氨氯地平干预组和氨氯地平＋不同剂量通心络（0.5，1.0，1.5 g· kg－1· d－1）干预组。20周后，测血压、留尿后处死，取肾组织检测指标。测尿微量白蛋白（ UMA）和β2微球蛋白（β2 MG），测血管紧张素转化酶2、血管紧张素Ⅱ1型受体基因表达。结果与同龄京都威斯特（ WKY）大鼠比较，10周龄SHR的尿β2 MG、肾组织AT1 R表达明显增加而ACE2明显减少。与单用氨氯地平组比较，伍用通心络组大鼠的尿β2 MG、UMA及肾组织AT1 R表达明显减少而肾组织ACE2表达明显增加。结论氨氯地平伍用通心络能降低蛋白尿、减轻高血压病肾损害的作用可能是通过增加肾组织ACE2、下调AT1 R表达来实现的。
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血管紧张素转化酶的研究进展
目的综述人类血管紧张素转化酶(ACE)的第一个同类酶--血管紧张素转化酶2(ACE2)的生理功能及潜在的药理作用,为新药的研发提供新的靶点.方法通过调研近期国内外文献,较全面地介绍了ACE2的研究现状及发展趋势.结果与结论 ACE2虽然在结构、功能等方面与ACE有所不同,但是它对高血压,心功能等有着重要影响,是调节肾素血管紧张素系统稳态的重要物质之一,已成为心血管及肾脏疾病的一个全新靶点.近来发现,它还作为严重呼吸窘迫综合征冠状病毒(SARS-CoV)的受体而参与其发病过程.
关键词： 血管紧张素转化酶2 肾素-血管紧张素系统 高血压 严重呼吸窘迫综合征 -
血管紧张素转化酶2减少胰岛细胞的氧化应激及凋亡
目的 探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2) 在胰岛素分泌中的作用及可能的机制.方法 提取C57BL/6小鼠的胰岛,用棕榈酸诱导氧化应激及凋亡.用ACE2及对照GFP的腺病毒对胰岛进行感染.ELISA方法检测胰岛素分泌功能.DHE探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度.蛋白质印记(Western blotting)方法检测糖代谢及凋亡水平.结果 1)ACE2腺病毒感染后,胰岛素分泌增加.2)ACE2腺病毒感染降低了氧化应激水平.3)ACE2 腺病毒感染减低胰岛凋亡.结论 ACE2改善胰岛素分泌功能,其机制可能与ACE2对氧化应激和凋亡的保护作用有关.
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大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达
目的 构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率.方法 采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达.结果 克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞.结论 成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.
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血管紧张素1-7抑制剂对糖代谢的影响
目的 研究血管紧张素1-7[Ang(1-7)]的抑制剂A779对胰岛功能及其他代谢指标的影响从而为研究Ang(1-7)在糖尿病及其合并症中的作用提供新的思路.方法 对c57bl/6小鼠置入皮下泵持续给予A779干预,干预结束后行腹腔糖耐量试验、胰岛素耐量试验及胰岛素水平测定评价干预对糖代谢的影响,并测定血压、血脂及血管紧张素Ⅱ的水平,评价干预对其他代谢指标的影响.结果 A779干预组的空腹胰岛素水平明显高于对照组,差异有统计学意义;胰岛素抵抗指数和胰岛素分泌指数明显高于对照组,差异有统计学意义.结论 A779对糖耐量及胰岛素基础分泌产生负面影响,提示Ang(1-7)可能对胰岛功能具有保护作用.
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ACE2/Ang(1-7)对小鼠脂肪组织脂肪合成的影响
目的 探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)-血管紧张素(1-7)[angiotensin(1-7),Ang(1-7)]对小鼠脂肪组织脂肪合成的影响.方法 选取雄性ACE2基因敲除模型小鼠及野生C57 BL/6(wild-type,WT)对照小鼠,测体质量,计算体脂率,测定血清三酰甘油(triglycerides,TG)及总胆固醇(total cholesterol,TC)浓度,HE染色观察附睾脂旨肪细胞形态学变化,蛋白印记(Western blotting)法检测附睾脂肪组织脂肪合成因子乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylase α,ACCα)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)及脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid binding protein,aP2)的表达.将雄性db/db小鼠采用数字表法随机分为3组,分别给予0.9％(质量分数)氯化钠注射液,Ang(1-7),Ang(1-7)+A779[Ang(1-7)的拮抗剂]皮下泵入干预4周.测体质量,Western blotting法检测小鼠附睾脂肪组织脂肪合成因子蛋白的表达.结果 ACE2基因敲除小鼠体脂率及血TG浓度明显高于野生对照小鼠.Western blotting法检测结果表明ACE2基因敲除小鼠附睾脂肪组织脂肪合成因子ACCα及FAS蛋白表达明显高于野生对照组.应用Ang(1-7)干预2型糖尿病db/db小鼠显著抑制其附睾脂肪组织脂肪合成因子ACCα及FAS蛋白表达,而应用Ang(1-7)拮抗剂A779拮抗了这一作用.结论 ACE2/Ang(1-7)抑制白色脂肪合成,其机制可能是通过抑制脂肪合成相关因子的表达发挥作用.
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血管紧张素转化酶2与心血管疾病
血管紧张素转化酶2(ACE2)是RAS系统的成员之一,可催化血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)],构成[ACE2-Ang(1-7)-Mas]轴,发挥舒血管的生物学效应,同时维持AngⅡ与Ang(1-7)的动态平衡.在心血管疾病的发生过程中,RAS系统被激活,ACE2基因表达和蛋白含量都发生了改变,对疾病发生、发展起了重要的作用,现就ACE2的特征及对心血管疾病的影响进行综述.
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肾素血管紧张素抑制剂的研究进展
肾素-血管紧张素系统(RAS)是机体维持正常血压和渗透压的重要调节机制,它由一系列激素及相应的酶组成.近年来,对RAS系统的研究使该系统不断的被完善.包括新发现的血管紧张素转换酶2(ACE2)、血管紧张素1～7(Ang1～7)、血管紧张素受体2(A12),组织局部的RAS系统等等,同时在以RAS系统为靶点的研究上也取得了很多的进展,如醛固酮抑制剂、醛固酮合酶抑制剂,肾素抑制剂等.本文就RAS系统的研究进展及应用前景展开综述.
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先天性心脏病合并肺动脉高压患者血清血管紧张素转化酶2活性变化的研究
目的 观察先天性心脏病(CHD)伴肺动脉高压(PAH)患者血管紧张素转化酶2(ACE2)活性水平的变化,探讨其与肺动脉高压的关系.方法 先天性心脏病患者68例,分为先天性心脏病肺动脉压力正常组36例、先天性心脏病合并轻中度肺动脉高压组19例和先天性心脏病合并重度肺动脉高压组13例.抽取受试者静脉血,应用比色法检测ACE2酶活性水平.结果 先心病重度肺动脉高压组血清ACE2酶活性较先心病肺动脉压力正常组明显降低(1.28±0.40比1.92±0.64,P＜0.05),血清ACE2酶活性与肺动脉压力存在低度负相关关系(r=-0.367,P＜0.01).结论 ACE2酶活性降低可能在先天性心脏病肺动脉高压的发生、发展中起着重要的作用.
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ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴及其基因学研究进展
肾素-血管紧张素系统(RAS)在心血管、肾脏功能活动调节中起着重要作用,在维持血压稳态、水盐平衡及局部组织器官的正常功能等方面具有重要的作用.
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慢病毒重组ACE2基因表达载体的构建及其感染人脐静脉内皮细胞的研究
目的 构建携带血管紧张素转换酶2(ACE2)基因的慢病毒表达载体,观察其感染人脐静脉内皮细胞后ACE2基因的转录及表达水平.方法 采用PCR技术从含有ACE2基因的质粒克隆模板pcDNA3.1-hygro (+)-mACE2上钓取ACE2基因,并将ACE2基因重组到慢病毒载体表达质粒pGC-Fu中,构建重组慢病毒载体表达质粒pGC-FU-ACE2,通过酶切、测序验证ACE2基因后,将pGC-FU-ACE2质粒和包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带ACE2基因的重组慢病毒Lentiviral-ACE2;然后感染人脐静脉内皮细胞,通过RT-PCR、Western-blot检测ACE2基因的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建携带ACE2基因的慢病毒表达载体Lentiviral-ACE2,并获得大量高纯度的慢病毒浓缩液.目的基因ACE2能被重组慢病毒高效地导入人脐静脉血管内皮细胞,并能高水平表达.结论 慢病毒表达载体Lentiviral-ACE2成功构建并能高效率感染人脐静脉内皮细胞,为研究ACE2对血管内皮细胞的影响和更深入地探索ACE2基因的功能奠定了基础.
