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降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞FoxO1表达的影响
目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞FoxO1因子表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛β细胞的分子机制.方法:通过慢病毒转染的方法制备FoxO1高表达INS-1稳定细胞株,以2.5μg/mL四环素干预12 h诱导FoxO1高表达以成模.以10%的降糖消渴颗粒含药血清干预细胞模型24 h,正常鼠血清作对照.高倍镜下观察细胞形态,MTT法计算细胞存活率,全自动生化仪检测细胞培养液中葡萄糖含量以计算葡萄糖消耗量,Elisa法检测细胞胰岛素分泌量,Western blot检测细胞中FoxO1总蛋白表达水平及其磷酸化水平,以qRT-PCR检测FoxO1mRNA表达情况.结果:高倍镜下观察细胞形态、细胞存活率均无统计学意义.降糖消渴颗粒含药血清组葡萄糖消耗量与细胞胰岛素分泌量均显著升高(P<0.01).Western-blot结果显示FoxO1总蛋白表达无统计学意义(P>0.05),而p-FoxO1蛋白表达增加(P<0.05).qRT-PCR结果显示FoxO1mRNA表达量稍有降低,但差异没有统计学意义(P>0.05).结论:降糖消渴颗粒含药血清不能降低INS-1细胞FoxO1蛋白表达水平,但能促进FoxO1磷酸化,进而达到改善胰岛β细胞功能的作用.
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降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞磷酸肌醇-3激酶/AKT/FOXO1通路的影响
目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制.方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1％ 、5％ 、10％ 、15％ 、20％ 不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定佳药物浓度开展后续实验.细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量.结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10％ 为佳药物干预浓度.10％ 含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10％ 含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致.结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用.
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黄芪多糖小檗碱下调IR-INS-1细胞miR-126-3p改善胰岛素抵抗
目的:研究黄芪多糖小檗碱(APBBR)调控miR-126-3p改善胰岛素抵抗INS-1细胞(IR-INS-1)的作用机制.方法:高糖诱导INS-1细胞建立胰岛素抵抗模型,放射免疫法检测黄芪多糖(AP)、小檗碱(BBR)以及APBBR干预后IR-INS-1细胞胰岛素含量;利用生物信息学方法分析miR-126-3p的潜在靶基因;RT-PCR测定各组细胞miR-126-3p靶基因IRSl mRNA水平;miR-126-3p模拟物miR-126-3p mimic和抑制剂miR-126-3p miR-inhibitor转染IR-INS-1细胞后,用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因IRS mRNA及其靶蛋白表达水平.结果:AP组和BBR组的基础胰岛素分泌量(BIS)与模型(model)组比较无显著性差异;AP和BBR的葡萄糖刺激胰岛素分泌量(GSIS)与model组比较均有显著性差异(P＜0.05);APBBR组BIS值和GSIS值与model组比较均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).生物信息学方法分析结果显示IRS1为miR-126-3p潜在靶基因.RT-PCR检测结果表明,model组IRS1表达量显著低于control组(P＜0.01);AP组、BBR组及APBBR组IRS1表达量均显著高于model组(P＜0.05,P＜0.01).转染miR-126-3p mimics后,IRS1水平显著降低(P＜0.01);转染miR-126-3p inhibtor后,IRS1水平未明显降低;APBBR对转染miR-126-3p mimics的IR-INS-1细胞IRS1水平的降低有显著抑制作用.Western blot结果表明,control组的IRS1蛋白表达显著高于model组和IR negative control(IR-NC)组;126M+APBBR和126I+APBBR组的IRS1蛋白表达均显著高于model组和IR-NC组.结论:APBBR能显著促进IR-INS-1细胞的胰岛素分泌;miR-126-3p过表达能促使INS-1细胞胰岛素抵抗,APBBR可能通过下调IR-INS-1细胞miR-126-3p的表达从而增加IRS1 mRNA水平及其蛋白的表达,改善胰岛素抵抗.
关键词： 黄芪多糖小檗碱 胰岛素抵抗 INS-1细胞 miR-126-3p IRS1 -
菩人丹改善高糖波动状态下INS-1细胞胰岛素分泌功能的分子机制
目的:考察菩人丹改善高糖波动状态下INS-1细胞胰岛素分泌功能的分子机制.方法:将INS-1细胞置于含33.3 mmol·L-1和11.1 mmol·L-1葡萄糖RPMI1640培养液内12h交替培养,持续培养5d构建高糖波动细胞模型.分别以5％、10％菩人丹含药血清对高糖波动状态下INS-1细胞干预24 h,并以二甲双胍含药血清作为阳性对照.正常对照组细胞以含11.1 mmol· L-1葡萄糖的RPMI1640培养液进行培养.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,大鼠胰岛素ELISA试剂盒测定胰岛素分泌量,Western blot 分析IRS2、Akt、mTOR、P70s6k和PTP1B的蛋白质表达水平及磷酸化水平.结果:与正常组比较,高糖波动能够显著降低INS-1细胞活力及胰岛素分泌量,下调INS-1细胞的IRS2蛋白质表达水平,提高IRS2磷酸化水平,降低INS-1细胞Akt、mTOR和P70s6k的磷酸化水平,上调PTPlB蛋白质表达水平.与模型组比较,菩人丹含药血清能增加INS-1细胞活力及胰岛素分泌量,上调IRS2蛋白质表达,抑制IRS2磷酸化,促进Akt、mTOR和P70s6k的磷酸化,下调PTPlB蛋白表达水平.结论:菩人丹调控高糖波动诱导的INS-1细胞IRS2、Akt、mTOR、P70s6k和PTPlB的蛋白质表达水平及磷酸化水平,改善高糖波动状态下胰岛B细胞胰岛素分泌功能.
关键词： INS-1细胞 高糖波动 胰岛素分泌 菩人丹 IRS2-PI3K/Akt -
TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡
目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响.方法 体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达.结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P<0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P<0.05).结论TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤.
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脂联素对高糖环境下胰岛细胞增殖及氧化应激水平的影响
目的 观察脂联素(ADPN)对体外高糖环境下大鼠胰岛细胞(INS-1)增殖及氧化应激水平的影响,并探讨其可能机制.方法 体外培养INS-1:将其随机分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.6 mmol/L葡萄糖)、高糖+脂联素组(2.5 mg/L脂联素),高糖+SB203580组(10.0 μmol/L SB203580)分别培养24、48和72 h后,运用CCK-8法测定INS-1细胞增殖.用比色法测定细胞上清液中总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的含量.Western blot法检测各组中t-P38 MAPK和p-P38 MAPK的蛋白表达水平.结果 高糖可抑制INS-1的增殖活性(P＜0.05),提高MDA含量,降低T-AOC含量;脂联素及SB203580均可改善高糖环境下的INS-1的增殖活性和降低MDA含量,提高T-AOC含量(P＜0.05);脂联素及SB203580可抑制高糖环境下INS-1细胞P38 MAPK的激活(P＜0.05).结论 在体外培养条件下,脂联素可通过P38 MAPK通路改善高糖环境下胰岛细胞增殖情况和氧化应激水平.
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胰岛α细胞培养上清液对INS-1细胞胰岛素释放与合成的影响
在培养的INS-1细胞中,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液(以下简称上清液),在不同浓度葡萄糖的刺激下,分别孵育不同时间,用放射免疫法测定INS-1细胞培养基中的胰岛素含量.在20MMol/L葡萄糖浓度下,不同刺激时间,不同浓度的上清液刺激INS-1细胞分泌的胰岛素显著高于0%上清液(以下简称对照组,P＜0.05或0.01).在0、1.85MMol/L葡萄糖刺激时,不同浓度的上清液对INS-1细胞的胰岛素分泌无明显作用,而在5.6、16.7和50MMol/L葡萄糖刺激时,不同浓度的上清液刺激INS-1细胞分泌的胰岛素显著高于对照组(P＜0.05或0.01).RT-PCR结果显示,在16.7MMol/L葡萄糖刺激4、12和24h后,30%上清液对INS-1细胞胰岛素mRNA水平均无明显影响.提示胰岛α细胞培养上清液对糖刺激的INS-1细胞的胰岛素分泌有促进作用,但不影响胰岛素的生物合成.
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CDK11p58基因过表达抑制INS-1细胞的增殖
目的:研究CDK11p58基因对大鼠胰岛瘤细胞INS-1增殖及周期的影响.方法:INS-1细胞分为3组:实验组转染pcDNA3.0-CDK11p58质粒;空载体组转染pcDNA3.0空载体;空白对照组不加任何干扰.48 h后,Western blot检测细胞CDK11p58基因表达水平;MTT法检测转CDK11p58基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染CDK11p58基因后细胞周期的变化.结果:转染48 h后,与空载体组相比,实验组CDK11p58基因的表达水平显著升高(P<0.01),INS-1细胞存活率下降(P<0.05),G1期细胞比例显著上升(69.87%±1.77%vs 63.03%±2.66%,P<0.01),细胞出现G1期阻滞.结论:CDK11p58基因与INS-1细胞增殖相关.其高表达引起的细胞增殖速度放缓的作用机制可能与其所致的细胞G1期延长有关.
关键词： CDK11p58基因 INS-1细胞 细胞增殖 细胞周期 -
N-乙酰半胱氨酸对脂毒性条件下INS-1细胞胰岛素信号分子基因表达影响的观察
目的 观察棕榈酸(PA)对INS-1细胞胰岛素分泌功能及胰岛素信号分子基因表达的影响及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预的效果,探讨氧化应激(OS)的作用及机制. 方法 INS-1细胞分为对照(NC)组、棕榈酸(PA)组及PA+ NAC (PA+NAC)组,分别用0.2mmol/L PA和、或0.2 mg/ml NAC进行干预,48 h后进行相关检测:(1)行胰岛素释放试验,检测INS-1细胞胰岛素分泌功能；(2)测定细胞内硝基酪氨酸(NT)含量,评价OS水平；(3)实时荧光定量PCR反应,检测各组细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)以及葡萄糖转运子2(Glut-2)基因表达的变化. 结果 (1)PA组IRI降低,PA+NAC组较PA组升高[(1.16±0.11)vs(0.84±0.12),P＜0.05];(2)PA干预细胞内NT水平增加,NAC干预水平降低；(3)与NC相比,PA组IRS-1,IRS-2以及Glut-2 mRNA表达分别降低19.9％,29.8％,42.3％.PA+ NAC组以上指标表达分别较PA组增加22.4％,47.1％,80.0％. 结论 FFA长期刺激可使INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能下降,IRS-1,IRS-2以及Glut-2 mRNA表达降低,NAC抗氧化干预能改善INS-1细胞胰岛素信号传导,部分逆转脂毒性导致的胰岛β细胞分泌功能异常,其机制可能与NAC纠正氧化及抗氧化失衡有关.
关键词： 棕榈酸 N-乙酰半胱氧酸(NAC) INS-1细胞 氧化应激 -
过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α对不同浓度棕榈酸诱导下INS-1细胞生长及功能改变影响的研究
目的 观察不同浓度棕榈酸培养INS-1细胞时过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)的表达变化及其与细胞增殖、凋亡和胰岛素分泌能力的关系. 方法 INS-1细胞在50、100、400 μmol/L棕榈酸培养4、8、12、24、48 h检测PGC-1α mRNA和蛋白表达、细胞增殖活力、Bcl-2蛋白、基础及葡萄糖刺激的胰岛素分泌. 结果 50 μmol/L棕榈酸培养时,INS-1细胞PGC-1α mRNA48 h有增多趋势,但差异无统计学意义;8、12 h细胞增殖活力降低,24、48 h与对照组比较差异无统计学意义;Bcl-2蛋白表达无变化;48 h基础及葡萄糖刺激胰岛素分泌量增加.100μmol/L棕榈酸培养时,INS-1细胞PGC-1α mRNA 24 h表达增加,48 h蛋白表达增加;8、12、24 h细胞增殖活力降低,48 h与对照组比较差异无统计学意义;Bcl-2蛋白表达无变化;基础及葡萄糖刺激胰岛素分泌量增加.400 μmol/L棕榈酸培养时,INS-1细胞PGC-1α mRNA 12 h表达增加,24 h后PGC-1α蛋白表达进行性增加;8h起细胞增殖活力降低;24 h起Bcl-2蛋白表达减少;48 h基础胰岛素分泌及葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低. 结论 轻、中度高脂培养条件下INS-1细胞PGC-1α表达轻度增加,与细胞增殖活力改变和胰岛素分泌能力增加相关,重度高脂培养条件下INS-1细胞PGC-1α表达增加,与细胞增殖活力减低、抗凋亡减少和胰岛素分泌能力受损相关,提示PGC-1α可能参与棕榈酸对INS-1细胞增殖、凋亡及功能改变的影响.
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氯沙坦抑制高糖及间歇性高糖诱导INS-1细胞内质网应激作用
目的 探讨氯沙坦对高糖及间歇性高糖诱导大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞内质网应激的抑制作用. 方法 各种刺激作用96h后,MTT法检测空白(Con)组、正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、间歇性高糖(MG)组、氯沙坦(LT)组、氯沙坦高糖(LT+ HG)组及氯沙坦间歇性高糖(LT+MG)组的细胞活力；免疫印迹检测内质网标记物糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12及磷酸化C-Jun氨基末端激酶(p-JNK)在INS-1细胞的表达；AnnexinV检测细胞凋亡；细胞活性氧(ROS)含量应用CM2 H2DCFDA试剂盒检测. 结果 与Con组及NG组相比,高糖及间歇性高糖抑制细胞活性、凋亡率升高(P均＜0.01),同时上调GRP78、CHOP、Caspase-12及p-JNK表达(P均＜0.01),ROS含量上升(P均＜0.01).MG组细胞活性低于HG组(P＜0.01),凋亡率、ROS含量以及GRP78、Caspase-12、p-JNK的表达均高于HG组(P＜0.05或P＜0.01).氯沙坦能抑制高糖及间歇性高糖诱导的细胞凋亡及ROS产生(P均＜0.01),同时抑制GRP78、CHOP、Caspase-12及p-JNK的表达上调(P均＜0.01).结论 氯沙坦可通过抑制高糖及间歇性高糖诱导INS-1细胞内质网应激作用从而减少细胞凋亡.
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沉默调节蛋白1抗胰岛INS-1细胞凋亡作用的研究
目的 通过观察游离脂肪酸(FFA)对INS-1细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)、活性氧(ROS)水平和凋亡的影响,探讨FFA损害胰岛β细胞功能及SIRT1保护细胞的机制.方法 将INS-1细胞分为牛血清白蛋白(BSA)对照组和FFA组,作用36h后分别检测SIRT1 mRNA水平、ROS水平和凋亡变化.构建SIRT1过表达质粒,转染INS-1细胞,再在上述两组条件下作用36h后分别检测ROS水平和凋亡变化.结果 与BSA组比较,FFA组SIRT1 mRNA相对表达量下降(0.50±0.12 vs 1.02±0.08,P＜0.01)、ROS水平明显增加(458.15±134.94 vs 132.86±51.80,P＜0.01)、凋亡增加(36.55±8.16vs5.85±1.65,P＜0.01).在FFA作用下,SIRT1过表达质粒转染INS-1细胞后较转染前ROS水平下降(284.80±87.97vs 458.15±134.94,P＜0.01),凋亡减少(18.72±7.13 vs 36.55±8.16,P＜0.01).结论 FFA对INS-1细胞功能的损害与氧化应激有关,而SIRT1过表达可减少ROS产生,减少凋亡,从而保护INS-1细胞功能.
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磺脲类药物对胰岛β细胞凋亡的影响
目的 观察第二代和第三代磺脲类药物对胰岛β细胞INs-1凋亡的影响.方法 采用大鼠胰岛素瘤细胞INS-1作为胰岛β细胞模型,药物干预后观察细胞形态学变化,用MTT和TUNEL法检测细胞增殖、凋亡情况,并测定基础和高糖刺激后胰岛素(Ins)分泌量.结果 与阴性对照组相比,药物干预细胞4h,低浓度格列美脲对细胞凋亡无影响(P＞0.05),其他药物组细胞凋亡率明显增加(P＜0.05);药物干预1d及4d,各药物组细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).结论 磺脲类药物可以促进胰岛β细胞的凋亡,且呈时间-剂量依赖性增加,提示对2型糖尿病(T2DM)患者临床治疗时要合理用药.
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胰淀素对格列苯脲刺激INS-1细胞胰岛素分泌作用的影响及其机制
目的 研究胰淀素短时间条件下对格列苯脲刺激INS-1细胞胰岛素分泌的影响及机制.方法 分别采用全细胞膜片钳技术、激光共聚焦显微镜技术及ELISA分析不同浓度胰淀素短时间孵育前后格列苯脲刺激下INS-1细胞ATP敏感性钾通道(KATP通道)电生理学特性、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及胰岛素含量变化.结果 (1) ELISA结果显示:与1μmol/L格列苯脲刺激下胰岛素释放量(11.43 ±1.22) μg/L比较,0.1μmol/L胰淀素预处理组[(11.45 ±1.20) μg/L]无明显差异,而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均显著下降,分别为(9.40±0.87)μg/L和(7.11±0.85) μg/L,且呈剂量相关性(P＜0.05);(2)激光共聚焦显微镜测钙结果显示:1μmol/L格列苯脲刺激后[Ca2+]i荧光强度变化的AUC为427.78±2.32,0.1μmol/L胰淀素预处理组(424.09 ±2.21)与之差异无统计学意义;而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均可使其AUC显著降低(分别为380.59 ±1.49和246.53±8.41),并呈剂量相关性(P＜0.05);(3)全细胞膜片钳结果显示:在1μmol/L、10 μmol/L胰淀素预处理组中,1μmol/L格列苯脲刺激下KATP通道半数激活电压(V0.5)分别为(28.75 ±0.77)mV和(46.95 ±1.81)mV,均显著高于单纯格列苯脲组(14.59±0.69)mV,并呈剂量相关性(P＜0.05).结论 高浓度胰淀素短时间作用可抑制格列苯脲对KATP通道的关闭,进而抑制[Ca2+]i增加,推测这种作用是INS-1细胞胰岛素分泌减少的机制之一.
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胰淀素抑制高糖刺激INS-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制
目的 分析阐明胰淀素短时间作用于INS-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)升高的机制.方法 采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察INS-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下[Ca2+]i荧光强度变化.结果 (1)单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积(AUC)为990±16;0.5μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降(AUC为831±10),1.0、5.0、10.0μmoL/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低(AUC分别为555±9、535±6、531±5),与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势.(2)10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比(AUC:168 ±5比311 ±11)差异有统计学意义.(3) 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义.结论 高浓度胰淀素的短时间作用对INS-I细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体(ryanodine receptor,RyR)、三磷酸肌醇(IP3)钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低.推测胰淀素短时间作用使[Ca2+]i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性.
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骨髓间充质干细胞对糖脂毒性诱导的大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用
目的：探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖脂毒性诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS?1)损伤的保护作用及其机制。方法 INS?1细胞分为正常对照组、高糖高脂组和高糖高脂+BMSCs组。高糖高脂+BMSCs组的INS?1细胞使用高糖高脂（16.7 mmol/L葡萄糖、0.4 mmol/L棕榈酸)培养基处理48 h后，与BMSCs共培养24 h，进行检测：(1)CCK8法检测INS?1细胞存活率；(2)Western blotting检测细胞内裂解的半胱氨酸?天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase?3)的表达；(3)膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡率；(4)放免法检测胰岛素分泌功能；(5) JC?1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)；(6)二氯荧光素双醋酸盐(DCFH?DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成量。两组间比较采用t检验进行统计学分析。结果与正常对照组比较，高糖高脂组INS?1细胞存活率明显下降[(100.0%±0.8%)比(71.9%±3.2%), t=8.46, P<0.01]，Cleaved Caspase?3表达量增加(0.248±0.033比1.01±0.066,t=10.28,P<0.01)，凋亡细胞比例增加[(6.9%±0.4%)比(16.4%±1.2%), t=17.38, P<0.01]，基础胰岛素分泌量(BIS)与葡萄糖刺激的胰岛素分泌量（GSIS）均减少（t=5.745、13.559，均P<0.05）。与高糖高脂组相比，高糖高脂+BMSCs组INS?1细胞的存活率上升，Cleaved Caspase?3表达量和凋亡细胞比例均减少（t=3.98、5.16、13.08，均P<0.05），BIS及GSIS均显著增加（t=5.674、10.148，均P<0.05）。高糖高脂损伤INS?1细胞内线粒体功能，表现为线粒体膜电位去极化(96±8比46±4, t=5.239, P<0.05)、ROS生成量较对照组明显增加[(13.3%±0.9%)比(34.2%±0.8%), t=17.38, P<0.01]，而与高糖高脂组相比，BMSCs共培养有效促进线粒体膜电位恢复，并减少细胞内ROS含量[分别为46±4比87±14，(34.2%±0.8%)比(22.5%±0.4%)，t=2.822、13.080，均P<0.05]，改善了高糖高脂损伤的INS?1细胞的线粒体功能。结论 BMSCs可有效保护糖脂毒性损伤的INS?1细胞，其作用机制可能与BMSCs改善线粒体功能有关。
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艾塞那肽对间歇性高糖环境下胰岛INS-1细胞的保护作用
目的 评价间歇性高糖对胰岛β细胞的损害及艾塞那肽( Exenatide)的保护作用.方法 取大鼠胰岛INS-1细胞分为5组;正常糖(5.5mmol/L)对照组、恒定性高糖(30mmol/L)组和恒定性高糖+Exenatide(100nmol/L)组按分组所述对细胞进行培养,间歇性高糖组和间歇性高糖+Exenatide组采用高糖与正常糖交替(每24h更替1次)培养细胞.培养7d后检测各组细胞内活性氧自由基(ROS)和黄嘌呤氧化酶(XOD)水平,同时检测细胞增殖和凋亡情况.结果 与正常糖对照组比较,恒定性高糖组及间歇性高糖组细胞内ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显增加(P<0.04),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),尤以间歇性高糖组更为明显.恒定性高糖+Exenatide组的ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显低于恒定性高糖组(P<0.05),而间歇性高糖+Exenatide组明显低于间歇性高糖组(P<0.01);恒定性高糖+Exenatide组和间歇性高糖+Exenatide组的细胞增殖活性与正常糖对照组无统计学差异.结论 间歇性高糖和恒定性高糖均能增加大鼠INS-1细胞内氧化应激水平,从而促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,尤以间歇性高糖更为明显;Ex-enatide可显著减轻高糖对细胞的损害.
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骨髓间充质干细胞条件培养基对INS-1细胞凋亡的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSC-CM)对促炎因子诱导大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)凋亡的影响及其作用机制.方法 培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)至第3代,收集、浓缩其上清液,获得富含BMSCs分泌因子的条件培养基.用含促炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的培养基处理INS-1细胞48h,造成炎症损伤β细胞模型,加入不同浓度的BMSC-CM继续培养12h,所获细胞分为以下5组:正常对照组,促炎因子组,1×BMSC-CM组,2×BMSC-CM组,4× BMSC-CM组.采用CCK-8法检测INS-1细胞存活率,膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成量.结果 与正常对照组相比,促炎因子组INS-1细胞存活率下降至正常对照组的75.84％±1.53％,细胞凋亡率增加(17.23％±1.77％),细胞内ROS水平明显升高(34.3％±0.80％),差异均具有统计学意义(P＜0.01).而BMSC-CM有效对抗了促炎因子导致的INS-1细胞损伤,其作用呈剂量依赖性,4×BMSC-CM组效果佳,该组INS-1细胞存活率较促炎因子组升高了11.86％,达到87.7％±2.08％,细胞凋亡率下降至8.67％±1.59％,ROS生成量减少至17.1％±2.14％,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 BMSC-CM可抑制促炎因子诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSC-CM降低细胞内ROS水平有关.
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牡荆素对脂多糖诱导胰岛INS-1细胞损伤的保护作用
目的 探讨牡荆素对脂多糖诱导胰岛 INS -1 细胞损伤的保护作用.方法 以脂多糖诱导INS-1细胞损伤,细胞分为对照组、模型组和牡荆素组(50μmol· L-1 ). MTT法测定细胞存活率;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-PCR法和Western blot法检测相关细胞凋亡因子Caspase-3、Bcl-2 mRNA和蛋白水平的表达.结果 5mg·L-1脂多糖可以诱导INS-1细胞凋亡,同时Bcl-2的表达明显减少,而Caspase-3的表达增加. 经50 μmol · L-1牡荆素处理后,脂多糖诱导的INS-1细胞凋亡明显减少, Bcl-2 的表达明显增加而Caspase -3的表达明显降低. 结论 牡荆素可抑制脂多糖诱导的INS-1细胞损伤及凋亡,其作用可能与调节Caspase-3、Bcl-2的表达有关.
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BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达
目的 观察BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达.方法 利用构建好的BTBD10多克隆抗体,采用多重免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察BTBD10在3月龄Fischer344大鼠的胰腺组织和大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞中的表达.结果 BTBD 10蛋白定位在大鼠胰腺组织的胰岛β细胞中,与胰岛素的定位重叠,而在胰腺的外分泌腺和胰岛α细胞中无表达,同时显示BTBD10定位在大鼠胰岛β株INS-1细胞的细胞浆中,表达高.结论 BTBD10特异性表达于大鼠胰岛β细胞中,提示BTBD10可能与胰岛β细胞功能和胰岛素分泌有关.
