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固醇调节元件结合蛋白-1在小鼠肾脏的表达定位
胆固醇和脂肪酸是细胞膜重要组成成分,也是众多信号分子的前体,广泛参与了机体的生理及病生理调节.固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1)是调节脂肪酸和胆固醇代谢的关键转录因子[1].大量研究表明,肾脏脂质代谢异常,特别是脂质过度聚集相关的脂毒性会导致肾脏功能损伤[2].因此,探讨SREBP-1在肾脏的表达定位将为揭示其在脂质代谢紊乱相关肾脏疾病,特别是糖尿病肾病中的作用提供重要实验基础.
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ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达
ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.
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微波快速原位杂交技术检测基因表达
核酸原位杂交技术目前已广泛应用于组织及细胞的基因表达定位和定量分析以及病毒基因组及表达的检测。常规的原位杂交技术主要强调组织细胞切片的前处理以提高其渗透性。常用的方法为蛋白酶酶解处理,但其作用的浓度和时间具有很大的范围,常难以准确把握。另外,杂交常需要16~24 h,检测周期长。近来,为了以稳定的、易控制的方法取代蛋白酶处理和缩短杂交的时间,我们应用微波处理技术,对以上两个步骤进行改良取得了很好的效果。
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大肠癌组织中Survivin和Cox-2表达的相关性
目的:检测大肠癌组织Survivin和环氧化酶(Cox-2)的表达情况,并探讨二者之间的相关性.方法:应用免疫组织化学(S-P)方法分别检测Survivin和Cox-2在40例大肠癌及34例正常大肠黏膜中的表达情况.结果:Survivin的阳性表达定位于细胞质,在大肠癌组织中其阳性率为67.5%,正常大肠黏膜组织中阳性率为0,二者差异十分显著(P<0.01);Cox-2的阳性表达定位于细胞质,在大肠癌组织中其阳性率为90%,正常大肠黏膜组织中阳性率为11.8%,二者差异十分显著(P<0.01).Survivin和Cox-2的表达具有一定的相关性(r=0.39,P<0.05).结论:大肠癌组织中Survivin过表达可能是终导致大肠癌发生的突破点,Survivin和Cox-2的协同表达表明大肠癌中的抑制凋亡是通过多种通路实现的.
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毛囊不同发育阶段表皮干细胞NK-1受体表达特征的实验研究
目的:通过观察不同阶段表皮干细胞表面感觉神经肽SP的受体NK1的表达特征与鼠毛囊发育间的相关性,研究表皮干细胞分化发育为毛囊时感觉神经肽的作用,为研究通过神经调控诱导表皮干细胞向毛囊分化奠定基础.方法:实验取胎龄12.5~13.5d胎鼠、1~2d新生鼠、成鼠三组皮肤标本,以β1整合素及K19双标阳性表达定位表皮干细胞,免疫组化方法定性、半定量分析NK1受体表达.结果:不同发育阶段鼠表皮干细胞表面均有NK1受体表达,其阳性表达率与ESC双标阳性表达率无明显差异;胎鼠及新生鼠NK1受体表达率同成鼠之间存在明显差异,提示鼠毛囊发生期前ESC的NK1受体表达明显高于毛囊静止期.结论:感觉神经肽在由ESC分化发育为毛囊过程中具有重要启动及调控作用.
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遗传性远端肾小管性酸中毒合并耳聋相关基因Atp6v0a4在小鼠内耳发育过程中的表达
目的常染色体隐性遗传远端肾小管酸中毒是一种严重的酸碱平衡紊乱性疾病,常常合并有感音神经性聋,ATP6V0A4被证实是其致病的相关基因,目前仍不明确致病机制.我们拟通过研究Atp6v0a4在不同发育阶段小鼠的内耳表达来探究ATP6V0A4在听觉系统形成中的作用.方法选择不同发育时期健康的昆明小鼠(E18,P1,P7,P14,P21),应用免疫荧光标记技术结合激光共聚焦显微镜观察Atp6v0a4蛋白在内耳的定位与表达.West?ern-blot定性定量研究该蛋白在不同时期小鼠内耳蛋白表达变化.结果Atp6v0a4蛋白主要表达部位为耳蜗内毛细胞、外毛细胞、血管纹、内淋巴囊以及螺旋神经节,且在不同发育阶段表达位置稳定.Western-blot结果提示Atp6v0a4在小鼠内耳广泛表达,在不同发育阶段,Atp6v0a4在Corti's器及螺旋神经节及血管纹中表达相对稳定,而在前庭组织中表达下降.结论通过对不同发育阶段的小鼠耳蜗切片进行Atp6v0a4蛋白表达分析研究,明确了Atp6v0a4在小鼠内耳的表达,为深入研究Atp6v0a4在内耳发育过程中的作用和致聋机制奠定了基础.
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AQP在人胃肠道不同部位表达与功能的研究进展
胃肠道水通道蛋白(AQP)是一类特异性转运水分子的蛋白质家族,通过其特殊性的漏斗形三级蛋白结构,可以帮助水分子快速的通过胃肠道细胞膜,从而参与胃肠道水分的分泌、吸收及细胞内外水平衡的调节.研究AQP的异常表达对研究胃肠道水分泌吸收异常相关疾病有重大的意义.AQP在胃、小肠、大肠中的种类及表达量不同,研究AQP时所用的分子生物学方法也不同.因此,探索消化道不同部位AQP的生理、病理特点,可以为消化道水分泌相关疾病开辟新途径.
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MIC3-EGFP融合蛋白真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建以绿色荧光蛋白(greenfluoreseeneeprotein,GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-C2-MIC3并检测MIC3-EGFP融合蛋白其在COS-7细胞中的表达及定位.方法:通过基因重组的方法构建pEGFP-C2-MIC3重组真核表达质粒,并通过酶切和基因测序鉴定.脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,转染后24h在活细胞状态下用倒置荧光显微镜直接观察MIC3-EGFP融合蛋白在COS-7细胞中的分布.结果:PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因MIC3正确连接到pEGFP-C2的多克隆位点.pEGFP-C2-MIC3重组体转染COS-7后,在细胞质表达.结论:成功地构建了pEGFP-C2-MIC3融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达.
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Survivin在正常睾丸中的表达和定位
Survivin是1997年由耶鲁大学的Ambrosini等[1]利用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor-1,EPR-1)的cDNA在人类基因组库中筛选克隆的一种凋亡抑制基因.Survivin蛋白属于凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员,在大多数肿瘤中高表达,在成体已分化的正常组织细胞中几乎检测不到.然而,Survivin不仅仅是一个肿瘤特异性蛋白,有实验证明在鼠胚胎处于分化状态的组织中可以检测到Survivin的表达[2],而且在成体造血系统中也可表达Survivin[3].本研究采用免疫组织化学显色方法检测了不同年龄段人的正常睾丸组织中Survivin蛋白的表达定位,以探讨其在正常生精过程中的作用.
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家族遗传性息肉病恶变过程中凋亡相关基因的变化
为研究家族遗传性大肠息肉病(FPC)的恶变过程,采用免疫组化(LAB)染色对29例FPC、24例大肠癌和28例腺瘤性息肉病的手术切除标本蜡块进行p53、bcl-2和c-myc基因蛋白表达定位,并进行比较观察.
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骨膜蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的:探索骨膜蛋白(periostin,POSTN)在乳腺癌组织、癌旁组织、乳腺正常组织中的表达情况及其临床意义.方法:选取昆明医科大学第三附属医院乳腺科2012年5月至2016年12月手术切除的45例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织及正常乳腺组织,另取15例患者手术切除的无菌癌组织及正常组织进行原代成纤维细胞培养,H-E及免疫组化染色鉴定原代培养的成纤维细胞.采用实时定量PCR(qPCR)分别分析乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织以及癌相关成纤维细胞和正常成纤维细胞中POSTN mRNA的表达情况,并用相关性分析乳腺癌组织中POSTN表达水平和乳腺癌患者临床病理特征的关系.乳腺癌组织芯片H-E及免疫组化染色检测POSTN蛋白在乳腺癌组织中的表达定位.结果:乳腺癌组织POSTN mRNA表达水平显著高于癌旁组织和正常乳腺组织(P<0.05);癌相关成纤维细胞POSTN mRNA表达与正常成纤维细胞无明显差异(P>0.05).POSTN蛋白主要在乳腺癌实质组织中表达,间质中表达较少.乳腺癌组织中POSTN mRNA表达水平与乳腺癌患者雌激素受体呈负相关(P<0.05).结论:POSTN主要在乳腺癌组织实质中表达,其在乳腺癌组织中高表达可能与乳腺癌的发生发展相关.
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不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达
目的探讨不同预后尖锐湿疣(CA)患者皮损局部Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体9(TLR9)表达定位及TLR3 mRNA、TLR9 mRNA的表达情况.方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况.结果 TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主;在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主.无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高(P<0.01、P<0.05),TLR9mRNA较对照组明显升高(P<0.05),较复发组差异无统计学意义.结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关,TLR3的影响可能更大.
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Stra 6基因克隆及其在U251细胞中的表达定位
目的:从人胎盘cDNA文库中获得Stra 6基因的全长阅读框架,通过融合GFP蛋白的表达观察其在人脑胶质母细胞瘤细胞株U251中的表达定位及形态学影响.方法:应用高保真PCR技术从人胎盘cDNA文库中扩增出特异片段,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-Stra6,转染U251细胞,荧光倒置显微镜观察蛋白表达定位及对形态学影响.结果:获得含人Stra 6基因全长阅读框架的重组质粒pEGFP-Stra 6,融合GFP的Stra 6蛋白大多表达于细胞质和细胞膜.可观察到转染后的细胞呈现分化状态.结论:Stra 6基因过表达使U251细胞形态改变,可能在细胞分化中起作用.
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神经生长因子抗体对哮喘模型大鼠肺中趋化素样因子1表达的影响
目的 观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化.方法 采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng·kg-1)及NGF抗体(0.1 mg·L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达变化.结果 CKLF1在OVA诱导的哮喘模型大鼠肺组织中的蛋白表达升高(P<0.05);NGF抗体能够降低CKLF1的表达;CKLF1在哮喘大鼠BALF中的含量升高(P<0.05),NGF抗体能够降低BALF中CKLF1的含量(P<0.05);NGF对肺组织及BALF中CKLF1的表达没有明显的影响.结论 NGF抗体能够抑制哮喘模型大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中CKLF1的表达和释放,改善哮喘症状.
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pEGFP-HPV16 E6重组质粒的构建及其在Hela细胞中的表达定位
目的 构建以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-HPV16 E6.方法 利用脂质体转染体外培养的Hela细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pEGFP~HPV16 E6融合蛋白在细胞中的分布和定位,用Western blot方法验证其蛋白的表达.结果 在空载体pEGFP-C2转染组中,Hela细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pEGFP-HPV16 E6转染组中,绿色荧光集中在细胞核中.结论 pEGFP-HPV16 E6融合基因真核表达载体在真核细胞Hela中获得了表达,细胞所表达的融合蛋白具有HPV16 E6和EGFP的双重活性,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,为HPV16 E6的功能研究提供了线索.
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SLC14 a1基因缺失对高盐饮食小鼠脑脊液钠离子浓度的影响
目的:检测SLC14a1基因在小鼠脑组织的表达定位;探讨SLC14a1基因缺失小鼠给予高盐饮食后脑脊液钠离子浓度的变化。方法:(1)以野生型小鼠为研究对象,检测SLC14a1 mRNA和蛋白在小鼠脑组织中表达及定位。(2)以SLC14a1基因缺失小鼠为研究对象,以野生型小鼠为对照,分别给予普通饮食(0.4%NaCl)和高盐饮食(8% NaCl)2周;观察各组动物血压的变化;(3)对比观察2组动物脑脊液钠离子浓度。结果:(1)RT-PCR方法显示SLC14a1 mRNA在小鼠脑组织;免疫组织化学染色方法及Western blot方法检测SLC14a1蛋白表达于小鼠脑组织脉络丛;(2)给予高盐饮食2周后,SLC14a1基因缺失小鼠组小鼠血压显著增高(P<0.05 vs普通饮食);(3)给予高盐饮食后,SLC14a1基因缺失小鼠脑脊液钠离子浓度显著高于野生型小鼠(P<0.05)。结论:SLC14a1基因表达于小鼠脑组织脉络丛,SLC14a1基因的缺失能增加高盐饮食小鼠脑脊液钠离子浓度。
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人类抗凋亡基因Survivin的克隆及其在胃癌细胞中的表达定位
目的从人胃癌细胞中克隆Survivin(SVV)基因,研究其在胃癌细胞中的表达定位.方法RT-PCR技术自人胃癌细胞SGC7901中克隆Survivin基因.建立真核表达载体pEGFP-N1-SVV.将含SVV序列的阳性重组子克隆瞬时转染人胃癌细胞SGC7901.激光共聚焦技术检测SVV基因转染胃癌细胞后的细胞内定位.结果获得人SVV基因的全长cDNA片段,经序列测定、核苷酸序列比对,证实所获片段与SVV基因已知序列完全一致.含SVV基因序列的阳性重组子瞬时转染人胃癌细胞SGC7901后,激光共聚焦显示,SVV基因转染成功,并且表明,SVV基因在胃癌细胞的细胞浆中表达.结论SVV基因在胃癌细胞的细胞浆中表达.
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P33ING1与消化道肿瘤的关系
抑制肿瘤过度增殖及促进其凋亡是人类控制肿瘤发生、发展的重要途径,而抑癌基因的失活有着极其重要的作用.INGl(Inhibitor of grouth-1)是Garkavtsev等[1]发现的一个肿瘤抑制基因, INGl基因定位于染色体13q33~34[2,3],由3个外显子(1a,1b和2)和2个内含子组成,有4种mRNA变异体:P47ING1、P32ING1、P24ING1、P33ING1,其中以P33ING1为重要,其表达定位于细胞核,偶见细胞浆,ING1基因的低表达与肿瘤的淋巴结转移、远处转移和分化程度相关,其异常表现有基因突变、重排、缺失和表达水平降低等多种形式[4,5].现就P33ING1与消化道肿瘤关系的研究进展作一概述.
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牙本质基质蛋白-1的研究进展
牙本质基质蛋白-1是牙发育过程中一种非常重要的非胶原性基质蛋白,对牙本质的形成和矿化起着重要的作用,但其具体的作用机制有待于进一步的研究.下面就牙本质基质蛋白-1的表达定位、基因结构、生物学功能以及表达调控因素作一综述.