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尼莫地平对大鼠牙髓干细胞分化后DMP-1表达的影响
目的 观察尼莫地平对牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞分化前后基因表达的影响.方法 通过特殊培养液诱导大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化,实验组分为正常诱导组和加入尼莫地平干扰组,在诱导后的不同时间点,1、3、5、7、10和14天,分别提取细胞的总RNA,通过Real-time PCR观察大鼠牙髓干细胞分化前后牙本质基质蛋白-1基因表达的变化,数据采用独立样本t检验.结果 大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后,1、3天的牙本质基质蛋白-1表达没有明显变化(P＞0.05);5天变化较明显,差异有统计学意义(P＜0.05);5、7、10和14天随着时间增加牙本质基质蛋白-1基因表达明显增高.加入尼莫地平干扰的诱导分化组和正常诱导组比较,同一时间点,牙本质基质蛋白-1的表达量减少(P＜0.05).结论 尼莫地平可减少牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后的表达,推测L型钙离子通道可能在牙髓干细胞的分化中起重要的作用.
关键词： 牙髓干细胞 L型钙离子通道 成牙本质细胞方向分化 牙本质基质蛋白-1 -
牙本质基质蛋白-1及其相关蛋白矿化作用的研究进展
牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein 1,DMP-1)是一种高度磷酸化的偏酸性非胶原蛋白,属于小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族,在牙本质、骨形成中发挥重要作用.本文就近几年对DMP-1基因结构、相关因子、DMP-1表达的调控及DMP-1在牙本质和骨组织中的作用机制的研究进展作一综述.
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牙本质基质蛋白-1的研究近况
牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)是牙釉质、牙本质、牙骨质、骨和软骨组织矿化中一种重要的酸性非胶原性基质蛋白,其组成介于牙本质磷蛋白和骨酸性蛋白之间,广泛分布于多种组织中,对硬组织的矿化具有重要意义.现就近些年对牙本质基质蛋白-1基因结构与调控、蛋白结构与代谢以及在细胞、牙本质、骨组织中的分布、表达及生物矿化的研究现状作一综述.
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bFGF/BMP-2转染大鼠骨髓干细胞体内成牙的研究
目的:牙胚细胞和成纤维生长因子(Fibroblast growth factor bFGF)/骨形成蛋白2(bone morphogeneticprotein 2 BMP-2)联合转染的骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)混合培养,复合明胶海绵支架构建牙组织工程植入大鼠体内,探究其成牙能力.方法:取健康SD大鼠128只,随机分为4组:细胞团块组;明胶海绵组;细胞团块十明胶海绵组;空白对照组,不做任何干预,均在全麻下植入大鼠肾被膜下.术后按4个时间点(5、10、14、28 d各8只)分期取材,进行大体组织观察,Masson染色和免疫组化染色.结果:大体组织和Masson染色:术后5、10、14、28 d形态学观察显示细胞团块十明胶海绵组形成牙样组织.免疫组化:析因分析显示细胞团块十明胶海绵组在5、10、14 d DMP-1、BMP-4、DSP表达量高且均高于其余各组,随着时间推移表达量逐渐有减小趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:牙胚细胞和基因转染BMSCs混合培养,复合明胶海绵构建牙组织工程的体内实验结果形成牙样组织,为组织工程牙的成功构建奠定了一定的基础.
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逆转录病毒转染后骨髓间充质干细胞中人Dmp-1表达的变化
目的 探讨构建的pLNCX2-Dmp-1逆转录病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后,外源性基因牙本质基质蛋白-1 (Dmp-1)表达的变化.方法 含人Dmp-1基因的逆转录病毒液pLNCX2-Dmp-1转染原代培养后扩增的第5代BMSCs,用免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测Dmp-1的表达.结果 用逆转录病毒液pLNCX2-Dmp-1转染BMSCs后,免疫荧光检测发现,在大多数细胞内Dmp-1都有明显的表达,而没有用pLNCX2-Dmp-1病毒液处理的BMSCs则无明显表达,RT-PCR和Westem blotting的检测也支持免疫细胞化学的结果.结论 构建含人Dmp-1基因的逆转录病毒载体pLNCX2-Dmp-1转染BMSCs后可上调目的 基因的表达.
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瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响
目的 探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础.方法 采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达.实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达.结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因.与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P<0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P<0.05).3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),于14 d达到峰值.结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达.
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牙本质基质蛋白-1的研究进展
牙本质基质蛋白-1是牙发育过程中一种非常重要的非胶原性基质蛋白,对牙本质的形成和矿化起着重要的作用,但其具体的作用机制有待于进一步的研究.下面就牙本质基质蛋白-1的表达定位、基因结构、生物学功能以及表达调控因素作一综述.
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牙本质基质蛋白-1与生物矿化
牙本质基质蛋白(DMP)-1是骨、软骨、釉质、牙骨质和牙本质生物矿化所必需的一种酸性非胶原蛋白.蛋白质化学研究显示,DMP-1全基因序列是生物矿化的启动因子,由C末端和N末端组成.体内实验证实DMP-1具有多方面功能,不仅是生物矿化的信号分子,同时也是调节因子,对成骨细胞和成牙本质细胞的成熟至关重要.本文就DMP-1在基因调节、组织细胞中的表达以及成骨、成牙本质中的生物矿化作用作一.
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牙本质基质蛋白-1与骨的形成及发育
牙本质基质蛋白-1作为牙特异性细胞外基质蛋白,其在骨形成及发育的作用与功能得到了广泛的关注与研究.研究表明,牙本质基质蛋白-1在骨组织中高度表达,牙本质基质蛋白-1在骨形成及发育中起重要作用,本文拟就牙本质基质蛋白-1在骨发育中的作用与机理研究进展作一综述.
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牙本质基质蛋白-1仿生多肽的设计与评价
目的 设计一种牙本质基质蛋白-1 (DMP-1)的仿生多肽,仿生DMP-1与胶原纤维结合,并启动矿化功能.方法 依据DMP-1与胶原纤维结合的功能序列以及釉原蛋白介导羟磷灰石成核的功能序列,采用固相合成法合成DMP-1仿生多肽,其氨基酸序列为DSESSEEDRTKREEVD.利用免疫荧光法评价该多肽与胶原蛋白的结合能力；将其依次浸入氯化钙溶液和磷酸氢二钠溶液中,采用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)以及选区电子衍射环(SAD)分析其诱导羟磷灰石晶体成核生长的矿化能力.结果 免疫荧光结果表明:本研究设计的DMP-1仿生多肽可以与牙本质胶原纤维结合；SEM、TEM观察结果显示:该多肽可以从溶液中摄取钙磷离子,诱导羟磷灰石晶体成核矿化.结论 多肽DSESSEEDRTKREEVD可以模拟DMP-1与胶原蛋白结合及启动矿化的能力,可以作为研究牙本质仿生矿化的一种分子工具.
