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骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达
目的研究骨形成蛋白4(BMP4)基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达. 方法地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术. 结果在E16大鼠,BMP4主要在小脑与嗅球呈强阳性表达.在P1～2大鼠,BMP4 mRNA在延脑的舌下神经核呈强阳性信号,在三叉神经脊束核、脊髓小脑束可见部分BMP4 mRNA阳性细胞.在P1周大鼠,额叶皮层、枕叶皮层与海马的前下托可见较强的阳性信号.生后1个月,海马与皮层BMP4的表达达到生后的峰值.此时BMP4在颞叶皮层与杏仁周皮质呈强阳性表达.生后3个月,BMP4在大鼠CNS有广泛表达,其中在海马、颞叶皮层、杏仁周皮质、丘脑侧核与下丘脑的室旁核均可见强阳性信号,而生后18个月大鼠的皮质、海马、丘脑、下丘脑仍可见一定数目的阳性神经元. 结论提示BMP4对新生期和成年期大鼠CNS的发育起重要作用.
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骨形态发生蛋白4在人胚胎卵黄囊造血过程中的表达
目的 检测骨形态发生蛋白4(BMP-4)在卵黄囊造血期间的表达及其变化,探讨影响造血细胞早期形成、增殖和分化的凋控机制. 方法用药物流产受精3～8周胚胎57例,免疫组织化学SP法检测BMP-4、血管内皮生长因子受体2(KDR)、CD133、CD34在卵黄囊中的表达,RT-PCR分析转录因子Ihh、SCL、GATA-1、GATA-2和PU.1的表达. 结果在16 d的卵黄囊血岛周边间质细胞BMP-4表达阳性,KDR低表达,CD34、CD133未见表达;21d时,BMP-4、CD34和CD133免疫反应产物均增加,染色增强;30d时,BMP-4、CD34、CD133和KDR表达强,CD34阳性细胞沿血岛边缘形成血管样结构.45d时,BMP-4、CD34、CD133和KDR阳性细胞增多,中等程度染色;7周后,BMP-4、CD133、KDR、CD34阳性细胞明显减少,染色变弱.RT-PCR结果显示,不同时间的卵黄囊持续表达Ihh、SCL、GATA-1和GATA-2.而PU.1在16d时未见表达,此后有阳性表达. 结论卵黄囊造血细胞的发育受BMP-4和转录因子的诱导和调节,卵黄囊造血不仅产生成血管血液干细胞,并能形成造血干细胞,说明卵黄囊不仅具有原始造血能力,而且可能具有长期造血能力.
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骨形成蛋白4对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质巨噬细胞聚集及核因子-κB信号通路的影响
目的 探讨骨形成蛋白4(bone morphogenetic proteins,BMP4)对单侧输尿管梗阻(uni-lateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾间质巨噬细胞聚集及核因子-κB信号通路的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为腹腔注射生理盐水假手术组(n=8)、腹腔注射生理盐水UUO组(n=8)、腹腔注射anti-BMP4假手术组(n=8)、腹腔注射anti-BMP4 UUO组(n=8).各组于手术日起每天给予anti-BMP4[200 μl/(g·体重)]或生理盐水腹腔注射.于术后7 d处死取材.免疫组织化学观察肾组织巨噬细胞标记物CD68、p-P65表达;Western印迹检测肾组织p-P65蛋白表达.结果 免疫组织化学显示,anti-BMP4-假手术组和生理盐水假手术组CD68、p-P65表达差异无统计学意义(P均>0.05);与生理盐水UUO组比较,anti-BMP4 UUO组CD68、p-P65表达均明显降低(P均<0.05).同样,Western印迹显示,anti-BMP4-假手术组和生理盐水假手术组p-P65蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与生理盐水UUO组比较,anti-BMP4 UUO组p-P65蛋白明显降低(P<0.05).结论 BMP4参与梗阻性肾病肾间质炎症过程,这一过程可能通过激活核因子-κB信号通路起作用.
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骨形成蛋白4对人牙髓细胞去分化基因表达的调控作用
目的 研究外源性骨形成蛋白4(BMP-4)对体外连续传代培养人牙髓细胞(DPCs)生长和去分化基因表达的影响.探讨BMP-4对DPCs体外传代培养过程中细胞未分化性能的调控作用.方法 重组人骨形成蛋白(rhBMP-4)诱导组和对照组体外培养4周的人牙髓组织中的细胞进行细胞计数:取P2和P7代rhBMP-4诱导组和对照组DPCs,免疫荧光染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测Oct4、Sox-2、c-Myc表达情况,统计学分析.结果 体外培养4周的人牙髓组织经rhBMP-4诱导后,DPCs数量显著高于对照组(P<0.05).免疫荧光示Oct-4、Sox-2、c-Myc在P2代rhBMP-4诱导组和对照组DPCs均为细胞核表达,在P7代诱导组DPCs保持细胞核表达,而在P7代对照组DPCs表现为细胞浆表达.实时荧光定量聚合酶链反应显示Oct-4、Sox-2、c-Myc在P2代诱导组和对照组DPCs表达差异无统计学意义(P>0.05),而在P7代诱导组DPCs表达显著高于对照组(P<0.05).结论 BMP-4可促进DPCs生长,维持传代后期去分化基因Dct-4、Sox-2、c-Myc的表达.
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BMP4／SDF－1壳聚糖缓释体联合BMSCs修复骨缺损的可行性分析
目的：探讨骨形成蛋白4／基质细胞衍生因子1（ BMP－4／SDF－1）释体联合骨髓间充质干细胞（ BMSCs）修复骨缺损的可行性。方法冷冻干燥和乳化交联法制备BMP－4／SDF－1壳聚糖缓释体，通过电镜扫描观察缓释体形态，酶联免疫吸附测定法检测 BMP－4和SDF－1的缓释作用；体外分离培养兔BMSCs，Transwell检测缓释体对BMSCs的趋化作用，单核细胞直接细胞毒性实验检测细胞因子缓释体对兔BMSCs的增殖作用，定量聚合酶链反应检测成骨相关指标[碱性磷酸酶（ ALP）／骨钙素（ OCN）]茜素红染色观察带有细胞因子的缓释体对 BMSCs 矿化结节形成能力。结果空白组、BMP－4组、SDF－1组、BMP－4／SDF－1组的兔BMSCs增殖随着时间的增长而逐渐升高，且BMP－4／SDF－1组的兔BMSCs增殖率显著高于其他各组，差异有统计学意义（ P＜0．05）。将共培养的兔 BMSCs 小室进行结晶紫染色发现，BMP－4／SDF－1组细胞穿膜数目相对空白组、BMP－4组、SDF－1组显著增多（P＜0．05）。复合缓释体与兔 BMSCs共培养7 d后BMP－4／SDF－1组ALP和OCN表达均明显高于其他组，差异有统计学意义（ P＜0．05）。 BMP－4／SDF－1矿化结节较空白组、BMP－4组和SDF－1组明显增多。结论制备兔骨缺损模型，将SDF－1／BMP－2壳聚糖换实体与兔骨髓间充质干细胞联合植入兔局部骨缺损处，促进黏附增殖，诱导成骨分化填补骨缺损，BMP－4／SDF－1壳聚糖缓释体支架可以作为理想的骨缺损修复材料。
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先天性肛门直肠畸形胎鼠肠管BMP4表达及意义
目的 研究先天性肛门直肠畸形(ARMs)胎鼠小肠、结肠和直肠骨形成蛋白4(BMP4)的表达情况,并探讨其在自身肠神经系统(ENS)发育过程中的作用.方法 利用全反式维甲酸(ARTA)诱导大鼠产生肛门直肠畸形胚胎,孕20d剖宫取胎,选取对照组正常胎鼠12只,实验组ARMs胎鼠24只,在大体显微镜下解剖整个肠管,选取距盲肠10cm处小肠,距盲肠3cm处结肠,距肛门0.Scm处直肠各一段,应用SP免疫组化方法检测对照组和实验组小肠、结肠和直肠BMP4的表达情况.结果 对照组肠壁肌间及粘膜下神经丛可见BMP4抗体染色阳性细胞,实验组胎鼠小肠阳性细胞的MOD值与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；而实验组胎鼠直肠、结肠的阳性细胞的MOD值与对照组相比明显减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ARMs胎鼠结肠、直肠BMP4表达水平减低,可能与其远端肠管ENS发育不良有关.
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BMP4对人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响
目的 观察体外培养的人牙周膜细胞转染骨形成蛋白4基因(bone morphogenetic protein, Bmp4)后,骨钙素(osteocalcin, OCN)的分泌变化,为深入探讨BMP4在牙周再生中的调控作用奠定基础.方法 Bmp4基因转染体外培养的第四代人牙周膜细胞,经原位杂交检测确定Bmp4成功转染细胞后,计数并统计转染组和未转染组人牙周膜细胞中骨钙素的表达变化.结果 Bmp4基因转染后的人牙周膜细胞上清液中骨钙素的含量明显高于未转染组细胞.结论 Bmp4基因能够促进人牙周膜细胞分泌非胶原蛋白,因此,对牙周组织的再生具有一定的调控作用.
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转化生长因子β3基因与骨形成蛋白4基因交互作用与唇腭裂的关联性
背景:课题组的前期研究发现中国汉族人群唇腭裂的发病与转化生长因子β3基因多态性无关联,但与骨形成蛋白4基因多态性有关.目的:探讨骨形成蛋白4T538C,转化生长因子β3C641A和G15572-之间的交互作用与唇腭裂发生的关联性.方法:纳入2007-03/2008-08在贵阳医学院附属医院口腔颌面外科以及百色市人民医院口腔科就诊的200例唇腭裂患者作为病例组,同时选取同时期的外伤和骨折患者200例作为对照.利用PCR-RFLP进行骨形成蛋白4T538C,转化生长因子β3C641A和G15572-的基因型检测,利用多因子降维法对基因分型结果进行交互作用分析.结果与结论:骨形成蛋白4T538C基因型和等位基因的分布在唇腭裂组和对照组之间均存在显著性差异(P < 0.05).转化生长因子β3C641A和G15572-两基因位点在两组之间差异无显著性意义(P > 0.05).交互作用分析显示,所有因子的交互作用模型均无显著性意义(P > 0.05).说明骨形成蛋白4T538C,转化生长因子β3C641A和G15572-在唇腭裂发病中不存在交互作用.
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帕金森大鼠黑质和纹状体BMP4及其mRNA表达的时程变化
目的:探讨帕金森(PD)大鼠模型体内脑黑质和纹状体内骨形成蛋白4(BMP4)及其mRNA表达的变化规律.方法:用六羟基多巴胺(6-OHDA)建立PD模型后,第2、4、6、8和10周时处死大鼠,取左侧黑质、纹状体,用免疫组化、酶联免疫、荧光定量PCR技术从蛋白水平和基因水平检测BMP4及其mRNA表达.结果:BMP4及其mRNA表达基本一致,其BMP4及mRNA表达均呈双峰,其蛋白表达在纹状体内第2周和6周时达高峰、在黑质内第2周和8周时达高峰,其mRNA表达在纹状体内第2周和8周时达高峰、在黑质内第4周和8周达高峰,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:PD大鼠模型体内,BMP4及其mRNA不呈现稳定的低表达,而是有波动性,明确BMP4及其mRNA处于稳定低表达的时间后,为下一步的治疗实验时间点的选择上奠定了基础.
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左乙拉西坦对致痫大鼠海马组织中BMP4表达的影响
目的:建立氧化锂-匹罗卡品幼年大鼠癫痫模型,观察左乙拉西坦对癫痫海马组织中骨形成蛋白(BMP4)表达的影响,以探讨左乙拉西坦的抗癫痫作用机制.方法:将116只21d龄Wistar雄性大鼠随机分为4组,其中空白对照组(NS组)24只、左乙拉西坦对照组(LEV对照组)24只、氯化锂-匹罗卡品模型组(PILO组)34只、氯化锂-匹罗卡品模型+左乙拉西坦治疗组(LEV治疗组)34只.PILO组和LEV治疗组大鼠首先给予腹腔注射氯化锂(125mg/kg)进行诱导,16h后腹腔注射硫酸阿托品(1mg/kg),30min后再以匹罗卡品(60mg/kg)腹腔注射,如果没有癫痫发作,可在半小时后,再次腹腔注射匹罗卡品15mg/kg,直至充分点燃建立癫痫模型.其中,LEV治疗组,每日给予左乙拉西坦200mg/kg,连续3周进行灌胃治疗,并分别于1周,2周,3周,处死各组大鼠,并通RT-PCR的方法分别检测及观察海马组织中BMP4表达的变化.结果:PILO组与NS对照组相比,BMP4的表达增加,第1周达高峰(P＜0.01),第2周、第3周BMP4表达逐渐下降,但较NS对照组仍高表达(P＜0.05),LEV治疗组与PILO对照组相比,BMP4表达逐渐降低(P＜0.05),LEV对照组与NS对照组无统计学意义(P＞0.05).结论:癫痫发作后BMP4表达增加,提示BMP4与癫痫形成密切相关,左乙拉西坦可能通过抑制海马组织中BMP4表达而发挥抗癫痫发作.
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骨形成蛋白4介导的酸和甘氨胆酸诱导Barrett食管的作用研究
目的 探讨骨形成蛋白4(BMP4)在Barrett食管发生过程中的作用机制.方法 培养人食管上皮细胞(HEEC)和人成纤维细胞MRC-5.采用实时荧光定量PCR法检测不同浓度BMP4,以及不同pH值的盐酸和甘氨胆酸对HEEC中尾侧型同源转录因子2(CDX2)表达的影响,不同pH值的盐酸和甘氨胆酸对MRC-5中BMP4表达的影响.统计学分析采用t检验.结果 HEEC在0.1、1.0、10.0和100.0 ng/mL的BMP4作用下,CDX2的相对表达量分别为1.617±0.246、2.489±0.455、5.629±0.449和13.670±1.689,分别高于对照组的1.000±0.043、1.029±0.094、1.001±0.002和1.049±0.051,差异均有统计学意义(t=2.47、3.14、10.31、7.47,P均<0.05).MRC-5在pH值为4和5的酸,pH值为4和5的甘氨胆酸的作用下,BMP4相对表达量分别为2.430±0.105、2.394±0.145、125.900±12.620、2.128±0.215,分别高于对照组的1.025±0.095、0.999±0.007、1.060±0.138、0.893±0.110,差异均有统计学意义(t=9.94、9.59、9.89、5.11,P均<0.01).结论 BMP4能上调HEEC中CDX2的表达,从而促进Barrett食管的发生.
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细胞自噬在骨形成蛋白4促大鼠 H9 C2心肌细胞肥大中的作用及机制
目的：骨形成蛋白4（ bone morphogenetic protein 4， BMP4）可诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大，为进一步寻求其调控机制，文中探讨细胞自噬在心肌肥大中的作用及其与细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulating kinase ， ERK1／2）的相互关系。方法将H9C2心肌细胞随机分为4组：对照组、BMP4组、BMP4＋ERK1／2信号通路抑制剂（ PD98059）组、BMP4＋自噬抑制剂（3MA）组，PD98059与3MA终浓度分别为50μmol／L与5 mmol／L，阻断30 min后加入浓度为50μg／L的BMP4。各组继续培养30 min后提取总蛋白分别检测微管相关蛋白1轻链3（ tiny tubes related proteins 1 light chain 3，LC3）与p-ERK1／2的表达；48h后观察细胞表面积、平均蛋白含量、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的蛋白表达水平。在倒置显微镜下观察细胞的形态，用Image J软件测量细胞表面积，BCA法测细胞总蛋白含量、Western blot检测LC3、ERK1／2、p-ERK1／2及α-SMA的蛋白表达。结果30 min后，与对照组相比，BMP4组LC3、p-ERK1／2蛋白表达均显著增强[（1．54±0．05） vs （1．95±0．11），（0．94±0．04） vs （1．33±0．06），P＜0．01]，BMP4＋3MA组及BMP4＋PD98059组均无明显变化（P＞0．05）；与 BMP4组相比，BMP4＋PD98059组、BMP4＋3MA 组 LC3表达与p-ERK1／2均显著降低（P＜0．01）；而 BMP4＋PD98059组与BMP4＋3MA组比较表达均无明显变化（P＞0．05）。48 h后，与对照组相比，BMP4组细胞表面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著增加[（644．1±15．01）μm2 vs （745．6±14．43）μm2，（240．0±7．26）pg／cell vs （347．1±5．4） pg／cell，（1．22±0．06 vs 1．99±0．03），P＜0．01]；与BMP4组相比，BMP4＋PD98059组、BMP4＋3MA组细胞面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著减少（P＜0．01），而BMP4＋PD98059组与BMP4＋3MA组比较差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论细胞自噬可能通过ERK1／2信号通路参与了BMP4促大鼠H9C2心肌细胞肥大，阻断细胞自噬或ERK1／2信号通路的激活，可能对心肌肥大有治疗作用。
关键词： 细胞自噬 细胞外信号调节激酶信号通路 骨形成蛋白4 心肌细胞 肥大 -
骨形成蛋白4通过激活 ERK1／2信号通路诱导大鼠H9 C2心肌细胞肥大的机制
目的：心肌肥大的刺激因素及发生机制尚不完全明确，文中旨在探讨骨形成蛋白4（ bone morphogenetic protein 4，BMP4）通过激活细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulating kinase，ERK1／2）诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大的机制。方法培养大鼠H9C2心肌细胞。首先建立BMP4诱导的大鼠H9C2心肌细胞肥大模型，随机将细胞分为对照A组、BMP4 A组、血管紧张素Ⅱ（ angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）组，培养48 h；其次，观察以50μg／L的BMP4作用不同时间（0、10、30、60、120 min）及以不同浓度（0、10、50、100μg／L）的BMP4作用30 min后大鼠H9C2心肌细胞ERK1／2蛋白磷酸化（p-ERK1／2）表达的变化，分别记为0、10、30、60、120 min组及0、10、50、100μg／L组；后，深入观察阻断ERKl／2信号通路后H9C2心肌细胞的变化，随机将细胞分为对照B组、BMP4 B组、BMP4＋PD98059组、PD98059组，PD98059终浓度50×10－6 mol／L阻断30 min后加入BMP4（50μg／L）继续培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态大小，Image J软件测量细胞面积，BCA法测细胞总蛋白含量， Western blot检测p-ERK1／2及心肌细胞肥大标志物脑钠尿肽（ brain natriuretic factor or peptide，BNP）的表达。结果对照A组、BMP4 A组、AngⅡ组心肌细胞面积[（649．74±2．03）、（744．85±1．31）、（748．39±1．54）μm2]，蛋白含量[（243．18±3．69）、（340．09±2．14）、（347．43±3．30） pg／cell]、BNP 蛋白表达水平[（0．72±0．44）、（0．96±0．55）、（1．07±0．55）／GAPDH]逐渐升高，两两比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）。 BMP4干预心肌细胞后p-ERK1／2表达随时间出现先升高后下降的变化，30 min时达到高峰。30 min p-ERK1／2蛋白磷酸化表达明显高于0、60、120 min组（P＜0．01），亦高于10 min组（P＜0．05）；BMP4不同浓度干预心肌细胞，p-ERK1／2蛋白磷酸化表达随BMP4干预浓度增加而增大，50μg／L组p-ERK1／2蛋白磷酸化表达明显高于0、10μg／L组，并低于100μg／L组（P＜0．01）。 BMP4＋PD98059组H9C2心肌细胞面积、蛋白含量、灰度值显著低于BMP4 B组[（650．49±1．28）μm2 vs（746．04±1．45）μm2，（244．06±3．48） pg／cell vs（343．57±4．11） pg／cell，（0．55±0．15）／GAPDH vs（0．79±0．55）／GAPDH， P＜0．01]。结论 BMP4可能通过激活ERK1／2信号通路诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大；早期阻断ERK1／2的激活，可能对治疗心肌肥大有临床裨益。
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骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响
目的观察骨形成蛋白4(BMP4)对体外培养的大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响,为探讨BMP4在牙胚发生发育中的调控作用奠定基础.方法体外培养胚胎13d的大鼠牙乳头细胞,利用MTT法和测定细胞内碱性磷酸酶含量检测BMP4对大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响.结果 BMP4能抑制牙乳头细胞的增殖,并能促进细胞分泌碱性磷酸酶(P<0.01).结论 BMP4具有抑制大鼠牙乳头细胞增殖,并促进牙乳头细胞成熟分化的调控作用.
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骨形成蛋白4基因多态性与先天性心脏病易感性相关性研究
目的 探讨中国汉族人群中骨形成蛋白4 (bone morphogenetic proteins 4,BMP4) rs17563 T＞C和BMP4 rs4444235 T＞＞C基因多态性与先天性心脏病(先心病)发生危险因素的关系.方法 120例法洛四联征患者(TOF组),124例大动脉转位患者(TGA组)和136例非先天性疾病者(对照组),3组采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分析BMP4 rs17563 T＞C和BMP4 rs4444235 T＞C基因多态性,计算各种基因型先心病发生风险.结果 TOF组BMP4 rs17563 T＞C基因多态3种基因型TT、TC、CC频率分别为51.3％0、40.0％、8.7％；TGA组分别为52.8％、39.8％、7.3％,对照组分别为49.6％、42.9％、7.5％,差异均无统计学意义(P＞0.05)；logistic回归分析显示,与携带BMP4 rs17563 TT基因型比较,携带BMP4 rs17563 TC或CC等位基因型与法洛四联症和大动脉转位的发病风险无相关性(P＞0.05),BMP4 rs4444235 T＞C各基因型与法洛四联征及大动脉转位的发病风险无相关性(P＞0.05).结论 BMP4 rs17563 T＞C和BMP4 rs4444235 T＞C基因多态性可能不是先心病发生的危险因素.
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脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠星形胶质细胞增生的影响及其与骨形成蛋白4的相关性研究
目的 探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠星形胶质细胞增生的影响及其与骨形成蛋白(BMP)4的相关性.方法 40只7日龄健康SD新生大鼠采用随机数字表法分为正常对照(CON)组、缺氧缺血(HI)组、正常+UCBMC(N+UCBMC)组、HI+ UCBMC组,每组10只.采用经典的Rice法制成HIBD模型,HI+ UCBMC组与N+UCBMC组于缺氧结束后24h于损伤侧侧脑室注入3×106个UCBMC,移植后7d,采用尼氏染色法观察损伤侧神经元形态及数目的变化,Western blot法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平,采用增殖细胞核抗原(PCNA)/GFAP及BMP4/GFAP免疫荧光双标法观察HIBD大鼠星形胶质细胞增生情况.结果 尼氏染色显示HI组大脑皮质及海马处神经元均排列不规则,数量较少,显著少于CON组(t皮质=26.54、t海马=32.26,P＜0.05);HI+ UCBMC组神经元排列较规则,数量较多,显著高于HI组(t皮质=10.18、t海马=12.56,P＜0.05);Western blot示HI组GFAP表达量明显高于CON组(t=5.50,P＜0.05);HI+ UCBMC组GFAP表达量明显低于HI组(=3.04,P＜0.05);免疫荧光示HI组PCNA+ GFAP+细胞,显著高于CON组(t=10.39,P＜0.05);HI+ UCBMC组PCNA+GFAP+细胞显著少于HI组(=3.72,P＜0.05);HI组BMP4+细胞显著高于CON组(t=5.52,P＜0.05);HI+UCBMC组BMP4+细胞显著少于HI组(=2.33,P＜0.05),GFAP与BMP4荧光强度分析显示二者呈正相关(r=0.84,P＜0.05).结论 UCBMC侧脑室移植可减少HI大鼠星形胶质细胞的增生,促进脑损伤的修复,具有神经保护作用,其机制与BMP4表达降低有关.
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先天性肠闭锁近端肠壁组织中成纤维细胞生长因子10和骨形成蛋白4的表达
目的:检测先天性肠闭锁近端肠壁组织中成纤维细胞生长因子10(FGF10)和骨形成蛋白4(BMP4)的表达并探讨其临床意义.方法:选择20例先天性肠闭锁组织标本,分别于闭锁处、闭锁近端5和10 cm处取材,另取10例正常肠管组织标本作对照,分别采用免疫组织化学方法检测FGF10和BMP4蛋白的表达情况.结果:正常肠管组织和肠闭锁处组织FGF10蛋白表达量分别为(148.32±1.90)和(123.41±2.59),差异有统计学意义(t=37.198,P=0.011);BMP4蛋白表达量分别为(206.40±3.22)和(138.57±2.81),差异有统计学意义(t=50.167,P<0.001).肠闭锁处组织FGF10蛋白表达量与闭锁近端5和10 cm处组织的表达量(139.98±2.74)和(157.51±2.76)比较,差异有统计学意义(F=404.880,P<0.001);肠闭锁处组织BMP4蛋白表达量与闭锁近端5和10 cm处组织的表达量(171.01±2.84)和(204.48±2.18)比较,差异有统计学意义(F=1597.122,P<0.001).结论:FGF10和BMP4表达减少可能是先天性肠闭锁形成的因为之一,外科手术尽量切除10 cm以上的闭锁近端肠管.
关键词： 先天性肠闭锁 成纤维细胞生长因子10 骨形成蛋白4 -
骨形成蛋白4诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制
目的 探讨骨形成蛋白4(BMP4)诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制.方法 培养大鼠心肌细胞株H9c2,使细胞同步化.实验分2部分,第1部分取同步化的心肌细胞,加50μg·L-1 BMP460μL进行干预,分别在干预后0、1、4、8、12、24 h检测磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白的表达;第2部分将同步化的心肌细胞随机分为对照组、BMP4组、BMP4+LY294002组及BMP4+3MA组.对照组细胞应用体积分数1％胎牛血清培养基培养;BMP4组细胞应用含50μg·L-1 BMP4的体积分数1％胎牛血清培养基培养;BMP4+LY294002组细胞先应用25μmol·L-1的LY294002预处理120 min,再以含50μg·L-1 BMP4的体积分数1％胎牛血清培养基培养;BMP4+3MA组细胞先应用10 mmol·L-1的自噬抑制剂3MA预处理120 min,再以含50μg·L-1 BMP4的体积分数1％胎牛血清培养基培养.各组细胞给予BMP448 h后采用Image J软件测量细胞表面积.二喹啉甲酸法检测各组心肌细胞内蛋白含量.采用Western blot检测各组细胞给予BMP41 h后磷酸化磷脂酰肌醇3(P-PI3K)、P-Akt及自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达,给予BMP448 h后检测脑钠肽(BNP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 BMP4作用心肌细胞0、1、4、8、12、24 h后P-Akt蛋白相对表达量分别为0.56±0.02、0.92±0.12、0.42±0.10、0.63±0.11、0.64±0.23、0.29±0.08,BMP4作用大鼠心肌细胞1 h后P-Akt蛋白相对表达量均高于其他时间点(P<0.05).BMP4组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量高于对照组(P<0.01);BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积大于对照组(P<0.01),BMP4+3MA组与对照组大鼠心肌细胞总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+LY294002、BMP4+3MA组H9c2大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量均低于BMP4组(P<0.05);BMP4+LY294002组与BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05).BMP4组、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平高于对照组,BMP4+LY294002组心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平低于对照组(P<0.01);BMP4、BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平呈逐渐降低趋势,3组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.05).BMP4、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平高于对照组(P<0.01),BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平低于BMP4组(P<0.05);BMP4+3MA组与BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).BMP4组大鼠心肌细胞内 α-SMA蛋白表达水平高于对照组(P<0.01),BMP4+3MA、BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内 α-SMA蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内 α-SMA蛋白表达水平低于BMP4组(P<0.05);BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内 α-SMA蛋白表达水平高于BMP4+LY294002组(P<0.05).BMP4、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平高于对照组(P<0.01);BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平低于BMP4组(P>0.05).结论 BMP4可能通过激活PI3K-Akt通路增加自噬活性,从而诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大.
关键词： 骨形成蛋白4 心肌肥大 磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路 自噬 -
BMP4在先天性肾积水肾盂输尿管连接部梗阻组织中的表达
目的 检测骨形成蛋白4 (bone morphogenetie protein 4,BMP4)在先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)所致肾积水肾盂输尿管连接部组织中的表达,探讨其在该病发生中的作用及机制.方法 收集先天性UPJO患儿手术中切除的肾盂输尿管连接部组织30例作为病例组,同期收集肾母细胞瘤未受肿瘤侵犯的正常肾盂输尿管连接部组织18例作为对照组,应用反转录-实时荧光定量PCR(RT qPCR)、免疫组化S-P法及Western blot检测BMP4的表达.结果 BMP4主要表达于输尿管的黏膜及肌肉层,在病例组中的表达明显低于对照组(病例组mRNA,黏膜层、肌层蛋白质相对表达量分别为:0.53±0.27、0.16±0.05、0.14±0.03;对照组的分别为:1.23±0.46、0.26±0.03、0.18±0.04),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP4参与了肾脏输尿管的发育,其表达降低可能与UPJO的发生相关.
关键词： 肾盂输尿管连接部梗阻 肾盂积水 骨形成蛋白4 -
bFGF/BMP-2转染大鼠骨髓干细胞体内成牙的研究
目的:牙胚细胞和成纤维生长因子(Fibroblast growth factor bFGF)/骨形成蛋白2(bone morphogeneticprotein 2 BMP-2)联合转染的骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)混合培养,复合明胶海绵支架构建牙组织工程植入大鼠体内,探究其成牙能力.方法:取健康SD大鼠128只,随机分为4组:细胞团块组;明胶海绵组;细胞团块十明胶海绵组;空白对照组,不做任何干预,均在全麻下植入大鼠肾被膜下.术后按4个时间点(5、10、14、28 d各8只)分期取材,进行大体组织观察,Masson染色和免疫组化染色.结果:大体组织和Masson染色:术后5、10、14、28 d形态学观察显示细胞团块十明胶海绵组形成牙样组织.免疫组化:析因分析显示细胞团块十明胶海绵组在5、10、14 d DMP-1、BMP-4、DSP表达量高且均高于其余各组,随着时间推移表达量逐渐有减小趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:牙胚细胞和基因转染BMSCs混合培养,复合明胶海绵构建牙组织工程的体内实验结果形成牙样组织,为组织工程牙的成功构建奠定了一定的基础.
