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尾侧型同源转录因子2慢病毒载体的构建及其转染骨髓间充质干细胞的实验研究
目的 构建携带尾侧型同源转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2,CDX2)的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),为大鼠溃疡性结肠炎模型的基因治疗提供工具.方法 根据GenBank信息,设计CDX2引物,采用PCR扩增CDX2基因片段;通过In-Fusion技术将目的基因片段连接到线性质粒载体中,然后转化感受态细胞,进行阳性克隆筛选及基因测序.将重组载体转染293T细胞,进行慢病毒包装、浓缩及滴度测定.体外分离并培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测细胞免疫表型.将携带CDX2基因的慢病毒载体转染至大鼠骨髓间充质干细胞,利用RT-PCR及Western blot等技术检测CDX2基因及蛋白的表达水平.结果 PCR、DNA测序及Western blot检测成功构建重组Ubi-CDX2-MCS-3FLAG-CMV-EGFP GV365慢病毒载体,测定滴度为2×108 TU/ml;成功完成大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养,FACS结果 显示,大鼠BMSCs表达CD29、CD73、CD90和CD105,而不表达CD34和CD45,符合骨髓间充质干细胞的表型.成功构建携带CDX2基因的BMSCs,RT-PCR及Western blot结果 显示CDX2基因转染至大鼠BMSCs并能稳定表达.结论 本研究成功构建了携带CDX2基因的大鼠BMSCs并稳定表达CDX2,为溃疡性结肠炎基因治疗的实验性研究提供了一种新的工具.
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CDX2和MUC2在胃癌癌变多阶段组织中的表达及意义的研究近况
近年来不少学者单独或联合研究了尾侧型同源转录因子2(CDX2)和黏蛋白2(MUC2)在胃癌癌变多阶段组织中的表达,认为CDX2在正常胃黏膜中无表达,在绝大多数胃黏膜肠化生中呈阳性表达,在胃癌中呈弱表达;MUC2在正常胃黏膜中无表达,在绝大多数胃黏膜肠化生和胃癌中呈阳性表达.两者具有一定的相关性,特别是在肠型胃癌的发生中起着重要的作用.在此就CDX2和MUC2的生物学特性、异常表达等方面的研究进展进行综述.
关键词： 尾侧型同源转录因子2 黏蛋白2 胃肿瘤 肠化生 -
Cdx2反转录病毒载体的构建及转染膀胱上皮细胞的研究
背景：尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。
目的：构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2，观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。
方法：应用基因重组技术将人尾侧型同源转录因子2cDNA 克隆到反转录病毒载体 pLXSN2,酶切鉴定，包装到PA317细胞中。转染人膀胱尿路上皮细胞，应用荧光PCR及Western blot检测尾侧型同源转录因子2以及绒毛蛋白、LI-cadherin的表达情况。
结果与结论：pLNCX2-Cdx2成功构建；细胞转染后尾侧型同源转录因子2的mRNA及蛋白水平表达明显增加；尾侧型同源转录因子2的过表达明显激活了绒毛蛋白与LI-cadherin的表达；转染后细胞可出现肠细胞样特征改变。结果提示体外尾侧型同源转录因子2过表达可使膀胱上皮细胞发生尾侧型同源转录因子2激活并产生肠上皮分化，从而诱导腺性膀胱炎发生。 -
骨形成蛋白4介导的酸和甘氨胆酸诱导Barrett食管的作用研究
目的 探讨骨形成蛋白4(BMP4)在Barrett食管发生过程中的作用机制.方法 培养人食管上皮细胞(HEEC)和人成纤维细胞MRC-5.采用实时荧光定量PCR法检测不同浓度BMP4,以及不同pH值的盐酸和甘氨胆酸对HEEC中尾侧型同源转录因子2(CDX2)表达的影响,不同pH值的盐酸和甘氨胆酸对MRC-5中BMP4表达的影响.统计学分析采用t检验.结果 HEEC在0.1、1.0、10.0和100.0 ng/mL的BMP4作用下,CDX2的相对表达量分别为1.617±0.246、2.489±0.455、5.629±0.449和13.670±1.689,分别高于对照组的1.000±0.043、1.029±0.094、1.001±0.002和1.049±0.051,差异均有统计学意义(t=2.47、3.14、10.31、7.47,P均<0.05).MRC-5在pH值为4和5的酸,pH值为4和5的甘氨胆酸的作用下,BMP4相对表达量分别为2.430±0.105、2.394±0.145、125.900±12.620、2.128±0.215,分别高于对照组的1.025±0.095、0.999±0.007、1.060±0.138、0.893±0.110,差异均有统计学意义(t=9.94、9.59、9.89、5.11,P均<0.01).结论 BMP4能上调HEEC中CDX2的表达,从而促进Barrett食管的发生.
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尾侧型同源转录因子-2、肝素结合性表皮生长因子样生长因子和骨形态发生蛋白-4在Barrett食管中的表达及相互关系
目的 探讨食管间质组织中肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)和骨形态发生蛋白-4 (BMP-4)在Barrett食管发病中的意义.方法 116例患者根据胃镜下表现和送检标本HE染色结果进行分组.分为对照组(29例)、反流性食管炎(RE)组(32例)、Barrett食管组(35例)、RE治疗组(10例)和Barrett食管治疗组(10例).采用免疫组织化学法对各组食管黏膜病变组织中尾侧型同源转录因子2(CDX-2)、HB-EGF和BMP-4的表达情况进行检测.应用方差分析比较各组间CDX-2、HB-EGF和BMP-4阳性表达水平的变化,卡方检验分析此三者表达的关系.结果 对照组、RE组和Barrett食管组的CDX 2阳性表达细胞数[(0.0±0.0)/高倍视野(HPF)、(43.1±10.6)/HPF、(67.8±11.3)/HPF]依次升高,三组间差异有统计学意义(F=67.664,P＜0.01);此三组的HB-EGF阳性细胞数[(6.4±1.4)/HPF、(39.4±13.5)/HPF、(55.8±13.9)/HPF]和BMP-4阳性细胞数[(0.0±0.0)/HPF、(22.6±6.4)/HPF、(25.1±10.3)/HPF]也呈现相同趋势,三组间差异均有统计学意义(FHB-EGF=22.925;FBMP-4=10.463,P均＜0.01),且除RE组与Barrett食管组的BMP-4表达外,其他各组间两两比较,差异均有统计学意义(LSD检验,P均＜0.05).CDX-2、HB-EGF和BMP-4在RE治疗组的表达[(21.7±1.7)/HPF、(16.6±5.0)/HPF、(9.2±1.0)/HPF]以及在Barrett食管治疗组的表达[(51.4±8.7)/HPF、(31.0±10.4)/HPF、(12.7±3.9)/HPF]分别低于其在RE组和BE组的表达,差异均有统计学意义(LSD检验,P均＜0.05).在RE组中,CDX-2的阳性率[31.2％(10/32)]明显低于HB-EGF和BMP-4的阳性率[62.5％(20/32),56.2％(18/32)],差异有统计学意义(x2=6.275、4.063,P均＜0.05).但在Barrett食管组中,CDX-2的阳性率[85.7％(30/35)]与HB-EGF、BMP-4的阳性率[88.6％(31/35),74.3％(26/35)]差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 CDX-2、HB-EGF和BMP-4可能在RE和Barrett食管病程的中发挥重要作用.HE-EGF和BMP-4可能是Barrett食管发生中的早期事件,二者对CDX-2的表达可能具有某种促进作用.HB-EGF和BMP-4有可能成为Barrett食管研究和治疗的新靶点.
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CDX2蛋白在肠上皮化生、胃癌组织中的表达及其意义
目的探讨尾侧型同源转录因子2(caudal type homeobox transcriptionfactor 2,CDX2)在胃黏膜肠上皮化生、胃癌组织中的表达及其意义.方法采用CDX2单克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测CDX2在肠化生、胃癌组织中的表达,同时检测Ki-67在胃癌组织中的表达,以确定癌细胞扩增率.结果CDX2在正常胃黏膜组织中无表达,在肠化生组织中阳性表达率为90.0%(18/20),在胃癌组织中阳性表达率为59.1%(29/49),两者有显著性差异(P=0.013).按Laurén分型,肠型胃癌中CDX2蛋白阳性表达率高于弥漫型胃癌,并有非常显著性差异(73.5%:26.7%,P=0.002).CDX2蛋白标记指数与Ki-67标记指数呈高度负相关(γs=-0.448,P=0.001),提示高CDX2标记指数胃癌细胞扩增率较低.此外,CDX2标记指数与肿瘤的TNM分期呈高度正相关(γs=-0.482,P＜0.001)、与淋巴结转移呈负相关(γs=-0.382,P=0.012);与细胞分化程度呈高度正相关(γs=0.591,P＜0.001).肠型胃癌组织中CDX2表达亦呈现类似结果.结论CDX2的异常表达在胃黏膜肠上皮化生和胃癌,特别是肠型胃癌的发生中起着重要作用;高CDX2标记指数胃癌其侵袭性低,细胞分化程度高,淋巴结转移数量少,因而检测其表达强度有助于判断胃癌恶性程度及胃癌患者的预后.
关键词： 尾侧型同源转录因子2 胃癌 肠上皮化生 免疫组织化学
