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CpG寡核苷酸增强UPEC FimH疫苗黏膜免疫的实验研究
尿路致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)是引起尿路感染(UTI)的主要病原菌.FimH蛋白是UPEC I型菌毛的黏附成分,介导UPEC侵入膀胱上皮细胞.本实验用FimH的真核表达质粒和蛋白免疫小鼠可产生较高浓度的IgG抗体.为提高尿路黏膜中保护性ISA的水平.以CpG质粒为佐剂,与FimH的真核表达质粒和原核表达蛋白进行不同组合免疫小鼠,观察不同组的小鼠产生的免疫反应.
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几丁聚糖促进兔膀胱黏膜上皮细胞生长的实验研究
目的 观察几丁聚糖对体外培养膀胱黏膜上皮细胞增殖的影响,并初步研究其机制,从而探讨其治疗间质性膀胱炎的可行性.方法 获取新西兰兔膀胱黏膜,Dispase酶消化法收集上皮细胞,分不同浓度(0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 g/L)几丁聚糖实验组与对照组进行细胞原代培养.培养72h后,光镜下观察细胞生长增殖情况;N-乙酰氨基-β-D-氨基葡萄糖苷酶反应比色法测定几丁聚糖对膀胱上皮细胞增殖的影响;RT-PCR检测表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达.结果与对照组相比,几丁聚糖在浓度＞0.3 g/L时能促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖,促进作用在浓度为1.2g/L时明显(P＜0.01),2.4、4.8 g/L时渐降低,但仍高于对照组(P＜0.01).兔膀胱黏膜上皮细胞中EGFR mRNA的表达亦与几丁聚糖浓度的浓度有关,浓度为1.2 g/L时EGFR mRNA的表达明显(P＜0.01).结论 几丁聚糖体外可促进兔膀胱黏膜上皮细胞增殖,这种促细胞增殖作用可能与促进表皮生长因子与EGFR特异性结合而发挥其生理效应有关.
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3种抗氧化剂对亚砷酸钠染毒人膀胱上皮细胞血管内皮生长因子表达的拮抗作用研究
目的 探讨抗氧化剂褪黑素(melatonin,MEL)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)、维生素C(Vitamin,VC)对砷诱导人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的拮抗作用.方法 将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、0.5、1、2、4、8、10 μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒24 h,或者含终浓度分别为4、10 μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒0(对照)、4、12、24、48、72h;联合暴露组在加入含终浓度分为4 μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基前30 min分别加入1％二甲基亚砜(DMSO)和抗氧化剂MEL、VC、NAC(终浓度分别为0.5、1、1 mmol/L),染毒24 h.分别采用Western blot法和RT-PCR法检测SV-HUC-1细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平.结果 10 μmol/L亚砷酸钠染毒组SV-HUC-1细胞VEGFmRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,SV-HUC-1细胞VEGFmRNA的表达水平呈上升趋势.与对照组比较,4 μmol/L亚砷酸钠染毒12、24、48 h及10 μmol/L亚砷酸钠染毒24和48 h后SV-HUC-1细胞VEGFmRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,各剂量组SV-HUC-1细胞VEGFmRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势.与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组比较,亚砷酸钠+NAC染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义(P＜0.05);而亚砷酸钠与MEL和VC联合染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平无明显改变.结论 砷能诱导人正常膀胱上皮细胞VEGF表达增加,NAC能增加VEGF表达.
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Cdx2反转录病毒载体的构建及转染膀胱上皮细胞的研究
背景：尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。
目的：构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2，观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。
方法：应用基因重组技术将人尾侧型同源转录因子2cDNA 克隆到反转录病毒载体 pLXSN2,酶切鉴定，包装到PA317细胞中。转染人膀胱尿路上皮细胞，应用荧光PCR及Western blot检测尾侧型同源转录因子2以及绒毛蛋白、LI-cadherin的表达情况。
结果与结论：pLNCX2-Cdx2成功构建；细胞转染后尾侧型同源转录因子2的mRNA及蛋白水平表达明显增加；尾侧型同源转录因子2的过表达明显激活了绒毛蛋白与LI-cadherin的表达；转染后细胞可出现肠细胞样特征改变。结果提示体外尾侧型同源转录因子2过表达可使膀胱上皮细胞发生尾侧型同源转录因子2激活并产生肠上皮分化，从而诱导腺性膀胱炎发生。 -
壳聚糖体外促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖
目的:观察壳聚糖对体外培养膀胱黏膜上皮细胞增殖的影响,探讨其治疗间质性膀胱炎的可行性.方法:获取新西兰兔膀胱黏膜,Dispase酶消化法收集上皮细胞,分不同浓度(0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 g/L)壳聚糖实验组与对照组进行细胞原代培养,免疫组织化学鉴定培养细胞.培养72 h后,光镜下观察细胞生长增殖情况,NAG酶反应比色法和细胞计数法测定壳聚糖对膀胱上皮细胞增殖的影响.结果:免疫组化鉴定培养细胞为膀胱黏膜上皮细胞.与对照组相比,壳聚糖在浓度》0.3 g/L时能促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖, 促进作用在浓度为1.2 g/L时明显(P＜0.01),2.4、4.8 g/L时渐降低,但仍高于对照组(P＜0.01).结论:壳聚糖体外可以促进兔膀胱黏膜上皮细胞增殖,值得进一步研究以用于治疗间质性膀胱炎.
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乌药提取物对膀胱过度活动症模型膀胱上皮细胞Ca2+浓度和UPⅡ表达的影响
目的:观察乌药提取物对膀胱过度活动症(OAB)模型大鼠膀胱上皮细胞生长、Ca2+浓度和UPⅡ表达的影响.方法:膀胱出口梗阻手术复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和乌药提取物组,给药4周后,无菌条件下分离、培养膀胱上皮细胞,观察细胞形态、生长及增殖过程,并进行HE染色、Ca2+浓度测定和UPⅡ免疫荧光染色.结果:与对照组相比,模型组上皮细胞数量少,细胞生长缓慢,Ca2+浓度增加(P＜0.01),UPⅡ表达减少;与模型组相比,乌药提取物组膀胱上皮细胞数量增加,形态正常,Ca2+浓度明显减少(P＜0.05),Uroplakin Ⅱ(UPⅡ)表达增加.结论:乌药提取物对OAB模型大鼠膀胱上皮细胞生长有改善作用,减少细胞内Ca2+浓度,提高UPⅡ表达.
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新生小鼠膀胱上皮细胞凋亡
目的 检测哺乳动物膀胱移行上皮细胞在个体发育时期脱落的机制.方法 获取新生2 d的小鼠膀胱上皮,做石蜡切片,进行Mallory's染色,普通光学显微镜观察;做冷冻切片,进行DAPI染色和TUNEL处理,荧光显微镜观察;取新生小鼠尿液,离心得细胞,做细胞涂片,TUNEL处理.结果 石蜡切片上看到膀胱上皮有脱落的细胞;冷冻切片上看到膀胱上皮细胞发生了凋亡;尿液细胞涂片上有凋亡的细胞.结论 出生2d的小鼠膀胱移行上皮细胞脱落是细胞的程序性死亡,脱落的细胞表现出典型的凋亡特征.
关键词： 新生小鼠 膀胱上皮细胞 脱落 细胞凋亡 DNA断裂原位末端标记 -
TNF-α增强膀胱上皮细胞清除细胞内肺炎克雷伯杆菌
目的:研究TNF-α对膀胱上皮细胞内肺炎克雷伯杆菌生存的影响.方法:以肺炎克雷伯杆菌侵入体外培养的人膀胱上皮细胞(T24细胞)为模型,观察在TNF-α等细胞因子处理条件下,不同时间点细胞内细菌数量变化.结果:单独使用TNF-α使T24细胞内的肺炎克雷伯杆菌K5株细菌数量明显减少,联合使用TNF-α与IFN-γ使胞内活菌数量更显著的减少.而IL-1β对细胞内活菌数量无明显影响.过氧化氢酶可以有效抑制TNF-α与IFN-γ刺激的T24细胞抗菌作用,而一氧化氮合酶抑制剂L-NAME无抑制作用.结论:TNF-α能够增强膀胱上皮细胞对抗细胞内肺炎克雷伯杆菌,抗菌机制与细胞产生活性氧(ROS)有关.
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RT-PCR检测人膀胱上皮细胞双功能氧化酶表达
目的:检测人膀胱上皮细胞(T24细胞)是否表达双功能氧化酶(Duox-1、Duox-2),并观察炎症细胞因子及佛波酯(PMA)对基因表达水平的影响.方法:体外培养人膀胱上皮(T24)细胞,经佛波酯(PMA)、炎症细胞因子(TNF-α及IFN-γ)刺激后提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR方法观察细胞Duox-1,Duox-2 mRNA表达水平.结果:Duox-1,Duox-2 mRNA在T24细胞中组成性表达,在佛波酯(PMA)、TNF-α及IFN-γ作用下,Duox-2基因表达水平明显增加,而Duox-1基因表达水平无明显变化.结论:双功能氧化酶Duox-1和Duox-2基因在膀胱上皮细胞表达,并受炎症刺激的影响,其在膀胱上皮细胞中的生理功能值得深入研究.
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膀胱上皮细胞对大肠杆菌抗菌作用观察
目的:了解膀胱上皮细胞和大肠杆菌的相互作用,观察其对大肠杆菌杀菌作用的动态变化.方法:采用人膀胱上皮细胞株T24和大肠杆菌标准株K12共同孵育,分别与作用后的15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟,用Triton X-100释放粘附在细胞上及细胞内的活菌,用平板菌落计数法计数活菌数.结果:T24对大肠杆菌K12有杀菌作用,在相互作用15分钟时即表现出来,且在30分钟时杀菌作用强,与对照组相比细菌减少53%.结论:膀胱上皮细胞对大肠杆菌有杀菌作用,这可能是泌尿道抵抗外来细菌感染的一种天然防御机制.
