04 汉坦病毒对新生小鼠的致病性:基因重排研究证明糖蛋白G1单一氨基酸改变与病毒毒力有关

锰中毒对新生小鼠脑发育的影响

为研究锰中毒对新生小鼠脑发育的影响,经口服和腹腔注射联合途径给新生昆明种小鼠染锰.结果显示:(1)高锰组小鼠体重增长明显滞后,脑重和脑重/体重比值显著降低;(2)在Morris水迷宫的行为检测试验中,高锰组小鼠前5天每天到达潜台的平均时间显著延长;而在第6天的探测试验中,其在原潜台象限的游泳时间则明显缩短;(3)高锰组小鼠的脑组织蛋白质含量明显降低,而乙酰胆碱酯酶活性则升高;(4)染锰组,特别是高染锰组小鼠海马CA3区的胶质细胞纤维酸蛋白免疫反应强度及其阳性产物的平均相对密度均比对照组明显增高.

蛋白激酶A参与诱导新生小鼠海马神经元的长时程增强

人急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠异种移植模型的建立

本研究旨在应用NOD/SCID/Ⅱ2rγnull新生小鼠建立人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的异种移植模型.NOD/SCID/Ⅱ2rγnull新生期(出生48h之内)小鼠经亚致死剂量(100 cGy) 137Cs全身照射后,由面静脉输注FACSAria流式细胞仪分选纯化的B-ALL患者骨髓CD3 - CD- CD8- CD34+CD19+细胞,于移植后8- 12周用流式细胞术检测受鼠外周血、骨髓和脾脏中人源细胞的植入水平及其免疫表型,并通过HE染色评价人源B-ALL细胞在受鼠各组织器官中的迁移浸润能力.结果表明,在接受B-ALL患者CD34+ CD19+细胞移植的受鼠外周血、骨髓和脾脏细胞中,不仅检测到了不同程度的人源B-ALL( huCI45+ CD19+)细胞的植入[(83.36±10.05)％,(93.88±5.05)％,(88.31±5.01)％],而且植入细胞具有与B-ALL患者相似的细胞形态和免疫表型特征.此外,人源B-ALL细胞广泛迁移浸润到受鼠的肝脏、肺脏、肾脏和脑等组织器官中.结论:NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠模型能够支持B-ALL患者CD34+ CD19+细胞的高水平植入,是对人B-ALL进行体内功能性研究的新型异种移植模型.

略谈肾病研究中的基因转移技术

自1991年Koseki等[1]首先以逆转录病毒为载体,将体外转染报告基因-β半乳糖苷酶基因(lac Z基因)的胚肾种植于新生小鼠的肾包膜下,观察其在肾小球和远端肾小管上皮细胞(肾小管上皮细胞)成功表达以来,国内外已有许多作者采取不同的转基因方法和载体注入途径观察了一些报告基因对肾损伤或肾疾病发生发展过程的影响,从而为实施对肾损伤的保护或肾病的基因治疗提供了重要的理论和实验依据.

γ-分泌酶抑制剂DAPT对炎症诱导新生小鼠未成熟脑白质损伤影响

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在新生鼠炎症暴露致未成熟脑白质损伤的影响.方法 取C57BL/10J新生3 d(P3)小鼠60只,随机分为正常对照组(control)、正常对照+DAPT组(control+ DAPT)、炎症暴露组(LPS)、DAPT预处理炎症暴露组 (LPS+ DAPT);LPS组和LPS+ DAPT新生3d小鼠予以LPS(0.25 mg·kg-1)腹腔注射,control+ DAPT组和LPS+DAPT组采用Notch信号特异抑制剂DAPT(10 mg· kg-1)腹腔注射.生后5 d(P5)断头取脑:Real-time PCR检测IL-1β、IL-8、TNF-α、Hes1及NICD表达变化;免疫荧光化学染色检测髓鞘磷脂蛋白(myelin basic protein,MBP)表达;Western blot定量检测MBP和caspase 3蛋白的表达量.结果 与control组比较,LPS组小鼠IL-1β、IL-8、TNF-α、Hes1及NICD mRNA的表达均增高(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+ DAPT组IL-1β、IL-8、TNF-α、Hes1及NICD mRNA表达明显降低(P＜0.05);免疫荧光和Westernblot结果均显示炎症暴露(LPS组)后MBP表达低于control组(P＜0.05);而与LPS组比较,LPS+ DAPT组MBP表达显著增多(P＜0.05);炎症感染后脑内细胞凋亡蛋白caspase 3明显增加,而DAPT预处理后可逆转这种变化.结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT参与了炎症暴露致新生鼠脑白质损伤过程,其机制可能与影响少突胶质细胞的成熟有关.

糖皮质激素对新生小鼠始基卵泡池的影响

目的:探讨糖皮质激素对新生小鼠始基卵泡池形成及卵泡发育的影响.方法:实验分为2 个组.A 组(注射组):将正常出生后1d 的雌幼C57/BL 小鼠皮下注射糖皮质激素(35mg/kg),分别用多聚甲醛固定出生后7d 龄雌仔鼠卵巢.B 组(正常对照组):正常新生小鼠,于生后第1 天注射同剂量的生理盐水(35mg/kg),分别固定出生后7d 龄雌仔鼠卵巢.同时所有卵巢经HE 染色,观察小鼠生殖细胞巢破裂情况和不同发育阶段的卵泡数目;结果:注射组(A 组)较对照组(B 组)小鼠生长较迟滞;A 组(注射组)与B 组相比,7d 龄小鼠始基卵泡比例较低,然而7d 龄初级与次级卵泡比例无显著差异;结论:大剂量糖皮质激素能加速新生小鼠卵母细胞巢破裂,增加卵母细胞凋亡,缩小始基卵泡池规模,可能有害于卵巢的生殖寿命.

高氧暴露对新生小鼠肺部炎性反应及纤维化的影响

目的 观察高氧暴露对新生小鼠肺部炎性反应及纤维化的影响.方法 新生2日龄昆明小鼠40只,随机分为空气组(n=20)及高氧组(n=20),分别在空气或(60±5)％氧气中饲养.每天检测小鼠状态,隔天记录小鼠体重情况.在实验第3、7、14、21天,每组各取5只小鼠处死,观察肺组织外观、计算肺组织湿/干重比值;HE染色观察肺组织病理结构;天狼星红染色观察肺组织胶原纤维情况.结果 ①实验过程中两组均未出现小鼠死亡;高氧组小鼠高氧暴露后第7天开始体重明显低于空气组,差异有高度统计学意义(P＜0.01).②高氧暴露后第7天开始,小鼠肺湿重/干重比值均高于空气组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).③高氧组肺部结构随高氧暴露时间的增加逐渐出现典型支气管肺发育不良(BPD)样表现:肺泡呈不规则结构,腔隙较大,部分肺泡融合,整体数量减少,部分区域有炎性不张;高氧暴露后第14、21天,高氧组辐射状肺泡计数(RAC)低于空气组,差异有高度统计学意义(P＜0.01).④高氧暴露后第7、14、21天,高氧组肺部胶原面积较空气组显著增加.结论 持续高氧暴露可成功制作BPD小鼠模型;持续高氧暴露后可导致新生小鼠肺部炎性反应及纤维化增加,可能是BPD发生的重要机制.

新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的:建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定.方法:无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM(含10%胎牛血清)培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定.结果:新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长.免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16.结论:分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白.以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础.

异丙酚麻醉对新生小鼠海马c-fos表达和caspase-3激活的影响

全麻药可影响中枢神经的发育,导致婴幼儿或幼龄动物发育期后认知功能下降[1-7].异丙酚在小儿和产科麻醉中的应用日益广泛.研究表明,异丙酚麻醉可影响发育期啮齿类动物中枢神经发育[8],还可引起患儿共济失调、幻觉等神经系统损害[9].在中枢神经发育高峰期,阻断NMDA受体或过度激活γ-氨基丁酸A型( GABAA)受体诱发的神经细胞凋亡可影响长期学习记忆功能[10-11].异丙酚可通过激动GABAA受体,直接或间接阻断NMDA受体发挥麻醉效应[12-13],异丙酚对发育期中枢神经功能的影响是否与神经细胞凋亡有关尚有待研究.本研究拟探讨异丙酚麻醉对新生小鼠海马细胞凋亡相关蛋白c-fos表达和caspase-3激活的影响.

新生小鼠肝细胞原代培养方法的改良

一种理想的肝细胞培养方法可以获取产率高、活性好、功能强的肝细胞.原位两步灌流法是分离肝细胞的经典方法,但具有操作复杂、费用高、易污染等缺点,不适合较小动物也不易在一般实验室开展.本研究采用非灌流胰蛋白酶消化法分离培养新生小鼠肝细胞获得满意结果.现报告如下:

盐酸金刚烷胺对兔急性高眼压视网膜神经节细胞损伤的保护作用

随着对青光跟发病机制的深入研究,谷氨酸对视网膜神经细胞(RGC)的毒性作用已逐步被认识.Onley[1]证实了谷氨酸对新生小鼠RGC毒性作用并称之为"兴奋性毒性".体外实验也证实了谷氨酸对RGC的毒性作用[2].在青光眼发病过程中,高眼压和缺血会使眼内谷氨酸的浓度增加,并且和眼压呈正相关[3].

稳恒磁场对新生小鼠肾上皮细胞影响

目的 研究稳恒磁场(SMF)对新生小鼠肾上皮细胞增殖分化的影响.方法 利用大鼠新生小鼠肾上皮细胞进行原代培养,观察不同磁感应强度的稳恒磁场(5,10,20,30,40,50,60 mT)作用下,其细胞形态学变化,从细胞计数角度观察细胞生长与分化过程,同时测定蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并与对照组进行比较.结果 经稳恒磁场作用的新生小鼠肾上皮细胞集落形成率明显减少,细胞体积小;磁感应强度为40,50,60 mT各组与对照组比较,其相对蛋白质含量明显降低(P<0.05),MDA的含量明显增高(P<0.01),SOD的活性明显降低(P<0.05),并呈强度-效应关系.结论 稳恒磁场能抑制新生小鼠肾上皮细胞增殖和分化,可能与其能抑制蛋白质合成,导致脂质过氧化有关.

宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层神经细胞凋亡相关基因表达的影响.方法建立妊娠期官内暴露尼古丁小鼠动物模型,免疫组织化学方法和Western blot方法检测宫内暴露尼古丁模型大脑皮层Bcl-2和Bax的表达.结果免疫组织化学法检测到大脑皮层的Bcl-2表达的平均光密度值和Western blot检测的平均灰度比值(Bcl-2/GAPDH)在正常对照组高于尼古丁组(P＜0.05),而Bax表达的平均光密度值和平均灰度比值(Bax/GAPDH)在尼古丁组高于对照组(P＜0.05).结论孕期宫内暴露尼古丁激活小鼠大脑皮层促凋亡基因Bax表达,参与大脑皮层神经细胞凋亡.

Th17相关性细胞因子在新生小鼠MCMV肝炎中的表达及意义

目的:探讨新生小鼠MCMV肝炎治疗前后外周血及肝脏中Th17相关性细胞因子白细胞介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)的表达变化及其意义.方法:腹腔接种MCMV建立MCMV肝炎模型(MCMV组),对照组腹腔注射等量的无菌生理盐水,更昔洛韦治疗组在接种病毒后当日每天腹腔注射更昔洛韦60 mg/(kg.d),连用2周.分别用全自动生化分析仪、ELISA方法和RT-PCR检测血清谷丙转氨酶(ALT)、外周血中IL-17、IL-23水平和肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达,同时分析它们与ALT的相关性.结果:病毒组小鼠血清IL-17、IL-23在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜O.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天IL-17、IL-23的水平均明显低于病毒组相应时点(P＜0.01)的水平；肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜0.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天肝组织IL-17mRNA、IL-23 mRNA的表达均明显低于病毒组相应时点的水平.IL-17、IL-23与AL水平呈正相关(r值为0.691～0.803,P＜0.05).结论:MCMV肝炎新生小鼠IL-17、IL-23呈现高表达,提示IL-17、IL-23可能参与了新生小鼠MCMV肝炎的发病.

生长因子对新生小鼠肌源性干细胞增殖的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)单独及联合作用对骨骼肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSCs)生长的影响.方法 采用连续预贴壁法从新生小鼠后肢肌分离培养MDSCs,免疫细胞化学染色法检测干细胞标志Sca-1和CD34的表达,HE染色观察细胞肌管形成,MTT比色法检测bFGF和EGF对MDSCs增殖的影响,并分析bFGF和EGF效应与培养时间以及与bFGF、EGF浓度之间的关系.结果 从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,Sca-1阳性占细胞总数90%以上,HE染色未见明显肌管形成.bFGF、EGF对MDSCs的促增殖作用随浓度的增加而增加,并逐渐趋于饱和.与阴性对照组比较,bFGF于3天、EGF于4天表现出明显促增殖效应(P<0.01),而二者联合作用于1天即表现出明显促增殖效应(P<0.01).结论 bFGF和EGF都具有促MDSCs增殖的作用,两者联合作用促增殖效果更快、更强.

新生小鼠肌源性干细胞的生物学特性及表型研究

目的 通过体外新生小鼠肌源性干细胞(MDSCs)的培养,观察鼠肌源干细胞的生物学特性及表型.方法 采用胶原酶Ⅺ和胰蛋白酶分步消化肌肉, 后采用差速贴壁分离技术纯化获得MDSCs.用倒置显微镜观察细胞形态,测定生长曲线,分析MDSCs的增殖能力,采用Sca-1、CD34 和Desmin免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定,初步确定细胞表型.结果 经过两步消化和差速贴壁后,成功培养出高纯度的肌源性干细胞,该细胞呈Sca-1、CD34和Desmin阳性.结论 可通过体外原代培养获得高纯度的肌源性干细胞,细胞具有良好的增殖能力,是适用于组织工程和基因治疗研究的一种新型种子细胞.

血管紧张素Ⅱ1型受体--一种预防大肠埃希菌K1所致新生小鼠脑膜炎的新靶标

大肠埃希菌K1所致脑膜炎的发病率越来越高。随着抗生素耐药不断升级，治疗此致命疾病需替代方案。该研究筛选了美国国立卫生研究院（N I H ）收集的小分子库，鉴定替米沙坦为一种血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）阻断剂，可作为大肠埃希菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞（HBMEC）的强效抑制剂。免疫沉淀研究表明，AT1R与内皮细胞gp96相互作用，HBMEC中的AT1R是大肠埃希菌外膜蛋白A。将HBMEC用替米沙坦预处理或转染AT1R小干扰 RNA后，能降低蛋白激酶Cα的磷酸化，从而抵抗大肠埃希菌入侵。用替米沙坦可溶性衍生物处理已感染大肠埃希菌的新生小鼠，能预防脑膜炎发生，在大脑中抑制中性粒细胞浸润和神经胶质细胞迁移。因此，替米沙坦有潜力成为防止大肠埃希菌所致脑膜炎的替代治疗药物。

自然杀伤细胞和T细胞产生的γ干扰素能减弱呼吸道合胞病毒感染新生儿的抗体反应

呼吸道合胞病毒（RSV ）能在儿童出生后1年内感染大多数儿童，是婴幼儿住院的一个主要原因。目前尚无有效的疫苗，新生儿初级感染产生的抗体亦不能有效地保护再次感染，甚至是抗原同源病毒株的感染。该研究通过观察新生小鼠中的免疫学相关实验，发现与成年小鼠较强的CD4依赖性抗体反应相比，新生小鼠的抗体反应较低且不受 CD4敲除影响。自然杀伤细胞敲除或 CD4＋和CD8＋ T细胞共敲除在新生儿RSV感染中可引起抗RSV抗体效价显著增加。这些细胞是γ干扰素（IFN-γ）的主要来源，阻断IFN-γ后也能增强新生儿的RSV特异性抗体应答。此外，用重组 RSV产生高 IFN-γ亦能降低抗体效价。结果显示，IFN-γ在抑制新生儿感染抗体反应中起着举足轻重的作用。结果提示，在生命早期强烈诱导的细胞免疫反应可能会限制抗体反应，诱导IFN-γ分泌细胞的疫苗在某些情况下可能比那些不诱导的疫苗具有更小的保护力。

无细胞或全细胞百日咳疫苗接种新生小鼠的黏膜免疫研究

据世界卫生组织预计,每年有4000万儿童感染百日咳,导致约36万儿童死亡.百日咳杆菌通过黏附于呼吸道上皮细胞而建立感染,因此鼻腔接种疫苗可刺激局部IgA产生,并诱导局部细胞免疫应答.