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丙烯腈对小鼠生精过程的影响
目的探讨丙烯腈对雄性小鼠生精过程的影响.方法用腹腔注射染毒的方法,对50只雄性未成年小鼠及25只成年小鼠分别给丙烯腈1.25、2.5、5mg/kg,染毒5天,于初次染毒后35天处死动物,应用流式细胞术检测睾丸生精细胞DNA含量及细胞周期的变化.结果(1)染毒组未成年小鼠的单倍体细胞(1C)的百分含量与阴性组比较有减少,但无统计学差异;染毒组成年小鼠的单倍体细胞(1C)百分含量与阴性组比较有减少(P<0.05);成年和未成年小鼠的凋亡细胞的百分含量与阴性组比较有增加(P<0.05).(2)细胞周期分析显示,染毒组未成年小鼠的S期细胞比例增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例减少(P<0.05);染毒组成年小鼠的G2/M期细胞比例增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例减少(P<0.05).结论丙烯腈对雄性小鼠的生精过程有抑制作用.
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成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养
成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].
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心脏干细胞移植与心脏康复
心肌缺血和心肌细胞损害导致心力衰竭是各种晚期心脏病的共性问题[1].从临床与康复的角度,改善心肌缺血和修复心肌是治疗心脏疾病的重要目标.1994年,Soonpaa[2]首次发现将小鼠胚胎干细胞移植到成年小鼠发生梗死的心肌中,能够存活并能限制瘢痕发展,预防梗死后心衰的发生.2001年,德国杜赛尔大学医学院[3]首次对急性心肌梗死患者进行自体骨髓干细胞(bone marrow stem cells,BMSC)移植,10周后心功能得到明显改善.2003年,美国食品和药品管理局批准BMSC实验性治疗急性心肌梗死.国际上干细胞移植已经进入心肌梗死、扩张型心肌病等疾病的临床研究,给心脏疾病的治疗与康复带来了新的希望[4-5].本文综述目前干细胞移植研究的焦点问题.
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心肌干细胞的研究进展
传统观点认为,心肌细胞出生后即向终末分化,不能够复制,并且成年心肌组织中没有储存的心肌祖细胞,因此心肌受损后心肌细胞不能再生,被疤痕组织代替,终导致心脏的收缩功能受损[1].1994年,Soonpaa首次发现将小鼠胚胎干细胞移植到成年小鼠发生梗死的心肌中,能够存活并且能够限制疤痕发展及预防梗塞后心衰的发生[2],提示心肌干细胞治疗可能会从根本上解决心肌损伤后的恢复问题.
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成年小鼠心房肌细胞分离方法的改进及钾电流记录
目的:建立稳定、重复性好的小鼠心房肌细胞分离技术,观察小鼠心房肌细胞形态以及钾通道电流特性,为进一步研究小鼠心房肌细胞的电生理特性打下基础。
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关键词:
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X射线全脑照射对成年小鼠海马DNA损伤的影响
放射性脑损伤是肿瘤放射治疗的严重并发症之一.一般认为其损伤机制与神经元的直接损伤和周围血管的缺血性改变有关.海马属于脑边缘系统中的重要结构,对电离辐射比较敏感,易发生病变,而且与学习、记忆、认知功能有关.电离辐射的生物损伤效应多数都是来自离体研究,对于整体动物水平中枢海马的辐射效应研究较少[1-2].本研究通过构建小鼠全脑X射线照射模型,检测4 Gy照射后不同时间海马组织的DNA损伤及细胞周期进程的改变情况,以探讨电离辐射对海马损伤的机制,为辐射防护提供理论依据.
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骨髓巨噬细胞系QXMSC1诱导成年小鼠同种异基因移植耐受
抗原呈递细胞(antigen presenting cells, APC)不但在免疫应答中起关键作用,同时也是对自身反应淋巴细胞进行阴性选择的重要细胞.专职APC(professional APC)主要是树突状细胞(dendritic cells,DC)和巨噬细胞(macrophage).
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原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响
目的 探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响.方法 采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平.结果 体外培养6d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好.体外培养6d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团.考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130 ~ 170 kD之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40 ~ 130 kD之间的蛋白条带丰度逐渐增加.Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势.RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化.结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响.
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炎症在七氟烷引起的成年小鼠术后认知功能障碍中的作用研究
目的:观察麻醉前应用地塞米松对吸入七氟烷引起的成年小鼠术后认知功能障碍(POCD)的影响及可能机制。方法60只成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为吸氧+生理盐水组(O组)、七氟烷麻醉+生理盐水组(S组)、七氟烷+地塞米松组(SD组)及吸氧+地塞米松组(OD组),各15只。观察各组临床效果。结果水迷宫测试中,四组麻醉前潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。麻醉后,与其他三组比较, S组潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),突触结合蛋白-1(Sty-1)含量明显降低(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和S100A8蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论单次吸入较高浓度七氟烷可导致小鼠发生术后认知功能障碍和Sty-1表达减少,地塞米松可提高Sty-1表达水平,改善POCD,其机制可能与抑制海马组织炎症反应有关。
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改良成年小鼠心室肌细胞分离方法
目的 改进小鼠成体心肌细胞的分离方法,以提高小鼠心室肌细胞的成活率和收获量.方法 采用心脏在体主动脉插管,行独创的前加压灌流法冲洗心脏后接入改进的langendorff装置,用胶原酶液Ⅱ灌流、消化心脏后,将心脏剪碎并用吸管吹打,经200目滤网过滤后获得单个小鼠心室肌细胞.检测并对比在体和离体主动脉插管获得的心肌细胞的状态:梯度复钙后,在倒置显微镜下观察细胞的形态和杆状心室肌细胞的数目.结果 研究结果显示,改良的主动脉逆行灌流法在缩短手术时间的同时,提高了小鼠心室肌细胞收获量和存活率.本课题组利用医用三通管,独创倒置灌流排气法,可以迅速排空灌流装置中的气体;利用注射器和灌流针结合,独创前加压灌流法,可以快速彻底地冲洗心脏中的血液;并采用实验室常规眼科镊和血管钳巧妙组合成协助装置,可以单人独立完成插管,不需要助手协助,节约人力,节省经费开支.结论 成年小鼠心室肌细胞分离方法的改进使整个实验流程简化,缩短了实验时间,操作简便易学;同时该分离方法稳定、可靠、有效,可以为同类型实验提供思路和借鉴.
关键词: 成年小鼠 心室肌细胞 分离 Langendorff 胶原酶 -
成年小鼠心脏单个细胞悬液的制备及流式细胞检测
目的:制备成年小鼠心脏单细胞悬液,测定心肌缺血再灌注损伤(reperfusion injury,RI)小鼠心肌中白细胞的分布情况.方法:选取10~12周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠15只,按照随机方法将其分为假手术组5只(模型制备成功5只)和RI 24 h组10只(模型制备成功7只).RI 24 h组小鼠心脏缺血30 min后,于再灌注24 h后摘取小鼠心脏,配置心脏消化液,冲洗剪碎进行消化,经过滤离心收集心脏细胞,行流式细胞检测,以CD45标记白细胞,并进一步行CD11c标记树突状细胞及Ly6C标记单核细胞.比较两组CD45阳性细胞比例及CD11c、Ly6C标记的细胞占CD45阳性细胞比例;比较两组各细胞在总心肌细胞中的比例.结果:每只小鼠心脏制备所得的单个细胞悬液行细胞计数为(1~2)×106个.RI 24 h组CD45阳性细胞占心肌细胞比例高于假手术组(P<0.05);RI 24 h组CD11c+Ly6C+树突状细胞占CD45阳性细胞的比例高于假手术组(P<0.05).RI 24 h组CD11c标记的树突状细胞及Ly6C标记的单核细胞等各亚群细胞在总心肌细胞中的比例均高于假手术组(P<0.05).结论:成年小鼠心脏细胞的单细胞悬液可以通过切碎和消化制备,可用单细胞悬液流式细胞仪检测RI心肌白细胞、树突状细胞和单核细胞的显著变化.本研究为小鼠心脏白细胞的详细分析提供了一种可行的方法.
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神经干细胞延伸于脑肿瘤干细胞的研究
1992年Reynolds首先成功地从成年小鼠纹状体中分离出神经干细胞(neural stem cells,NSCs);1997年Mckay[1]确立了神经干细胞能提供大量脑组织所需要的功能细胞的概念;2001年Reya提出了肿瘤干细胞理论;Singh等[2]在人脑胶质瘤组织中分离出神经干细胞样的肿瘤干细胞,并进一步证明后者可直接生成肿瘤细胞,目前称之为脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cells,BTSCs),由此开创了神经干细胞研究的新领域.其中备受关注的是脑肿瘤干细胞是否来自突变的神经干细胞,以及神经干细胞如何演变为脑肿瘤干细胞等一系列问题,笔者结合当前开展的工作介绍如下.
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030 照射早期胎鼠对成年小鼠脑功能的影响:学习与记忆
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神经干细胞治疗中枢神经系统损伤的研究进展
神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是一种存在于中枢神经系统中且能保持长期自我更新、复制能力,并能向多方向进行分化的原始细胞。目前NSCs已经广泛应用于中枢神经系统退行性疾病、肿瘤以及缺血损伤等疾病的治疗。本文对神经干细胞特性、移植方式、治疗中枢系统疾病进行了阐述与总结,并对未来神经干细胞的发展前景提出了展望。中枢神经系统(central nervous system,CNS)损伤包括颅脑和脊髓损伤(spinal cord injury,SCI),此类疾病发病快、病情重,致残率和病死率高,继发性与原发性损伤导致神经元功能缺失。一般观念认为成熟的神经元数量是恒定的,不能在损伤后进行分裂、增殖和修复,损伤是永久性的,从而导致CNS损伤后功能不能恢复。1992年Reynolds等[1]人从成年小鼠纹状体和海马中分离出能体外不断分裂增殖,并具有多种分化潜能的细胞群,打破了神经细胞不能再生的传统观点,给治疗人类CNS损伤带来了希望。
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神经干细胞的局部毒性实验研究
自20世纪90年代Reynolds和Weiss成功在成年小鼠的脑组织中分离出了具有分化增殖和分裂潜能的神经干细胞,并很快在人胚胎脑和成人脑组织中得到了证实[1].神经干细胞的发现打破了神经元不会再生的传统观念,目前神经干细胞已经在临床上用于脑瘫、脑中风(脑梗死、脑出血)后遗症、脊髓损伤、运动神经元病、小脑萎缩、共济失调、帕金森病、视神经萎缩、进行性肌营养不良、老年痴呆及脑肿瘤的治疗等[2,3].本实验通过对神经干细胞开展局部毒性实验研究,以保证其临床使用的安全性,现报告如下.
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长期口服卡托普利对正常成年小鼠学习记忆功能的影响
目的:探讨长期口服卡托普利对正常成年小鼠学习记忆功能的影响,为卡托普利的临床应用提供实验依据.方法:选用成年小鼠,分为正常对照组及卡托普利组,卡托普利11.08~14.92 mg·kg-1·d-1 连续给药12周,通过Morris水迷宫、避暗、跳台行为学及脑胆碱系统测定,观察卡托普利对正常成年小鼠学习记忆的影响.结果:与正常对照组比较,卡托普利组小鼠第1~4天到达平台的潜伏期、游程、朝向角及游泳速度无明显改变,第5天小鼠在2 min内穿越平台的次数、在平台区的逗留时间、在平台区象限的逗留时间及平台区象限内的游程占总游程的百分比、平均速度、朝向角也无明显变化(P>0.05);与正常对照组比较,卡托普利组小鼠第2天避暗的错误次数及错误潜伏期无明显变化(P>0.05);与正常对照组比较,卡托普利组小鼠第1和2天跳台的错误次数及第2天的错误潜伏期无明显改变(P>0.05);与正常对照组比较,卡托普利组小鼠脑组织乙酰胆碱(Ach)含量明显增高(P<0.01)、乙酰胆碱酯酶(AchE)含量明显升高(P<0.05).结论:卡托普利长期应用可能提高正常成年小鼠学习记忆功能.
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活骨注射液抗炎镇痛作用的实验研究
1 实验材料健康成年小鼠20只,体重18~20g,雌雄各半;出生后9周的健康大鼠共20只,雌雄各半,体重150g左右.均由黑龙江中医药大学实验动物中心提供.
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自然杀伤细胞和T细胞产生的γ干扰素能减弱呼吸道合胞病毒感染新生儿的抗体反应
呼吸道合胞病毒(RSV )能在儿童出生后1年内感染大多数儿童,是婴幼儿住院的一个主要原因。目前尚无有效的疫苗,新生儿初级感染产生的抗体亦不能有效地保护再次感染,甚至是抗原同源病毒株的感染。该研究通过观察新生小鼠中的免疫学相关实验,发现与成年小鼠较强的CD4依赖性抗体反应相比,新生小鼠的抗体反应较低且不受 CD4敲除影响。自然杀伤细胞敲除或 CD4+和CD8+ T细胞共敲除在新生儿RSV感染中可引起抗RSV抗体效价显著增加。这些细胞是γ干扰素(IFN-γ)的主要来源,阻断IFN-γ后也能增强新生儿的RSV特异性抗体应答。此外,用重组 RSV产生高 IFN-γ亦能降低抗体效价。结果显示,IFN-γ在抑制新生儿感染抗体反应中起着举足轻重的作用。结果提示,在生命早期强烈诱导的细胞免疫反应可能会限制抗体反应,诱导IFN-γ分泌细胞的疫苗在某些情况下可能比那些不诱导的疫苗具有更小的保护力。
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Nestin/SOX2及SOX2/BrdU在成年小鼠室周器官细胞的表达
目的:原位检测神经干细胞/祖细胞在成年小鼠室周器官分布.方法:成年BALB/c雄性小鼠,7~8周龄,连续腹腔注射BrdU(50 mg/kg)3 d,4d后取脑组织,连续冷冻切片,用免疫荧光显色检测Nestin/SOX2及SOX2/BrdU在成年小鼠室周器官细胞的双表达.结果:在成年小鼠正中隆起(ME)、穹隆下器(SFO)及后区(AP)均可见大量SOX2、中量巢蛋白及少量BrdU阳性细胞,并可见一些Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞.成年小鼠室周器官Nestin/SOX2及SOX2/BrdU与脑室下区Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞比较具有差异.结论:成年小鼠室周器官存在有一定数量的Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞,这表明成年小鼠室周器官可能存在具有增殖和分化潜能的神经干细胞/祖细胞.