稳心颗粒对房颤患者心房肌细胞膜钾、钙离子通道改变的影响

心房颤动(AF)是心律失常领域的热点问题.近年来的研究发现,心房电重构(AER)和结构重构(AAR)是AF发生和维持过程中的关键环节.本研究利用膜片钳技术,记录慢性风湿性心脏病伴有AF和不伴有AF患者心房肌细胞的L型钙电流(ICa-L)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(IK1),并记录稳心颗粒干预后其心房肌细胞的上述电流的改变.

血管紧张素Ⅱ及卡托普利对犬心房肌细胞外向钾通道电流的作用

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及卡托普利对犬心房肌细胞外向钾通道电流的作用,揭示其参与房性心律失常的细胞电生理机制.方法 健康成年杂种犬(普通级)10只,体质量(15-20)k,雌椎不拘,天津利群实验动物服务中心提供.急性分离单个犬心房肌细胞,采用伞细胞膜片钳方法 分别记录Ang Ⅱ及卡托普利灌流前后细胞膜快速延迟整流钾电流(Ikr)、缓慢延迟整流钾电流(Ikr)、超快速延迟整流钾电流(Ikr)及短暂外向钾电流(It0).采用pClamp 7.0 for windows及pClampfit7.0软件测量电流;数据用均数±标准差((-x)±s)表爪;应用SPSS 10.0统计软件进行统汁学分析,用药前后的比较采用自身配财t枪验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 0.5t mol/L Ang Ⅱ可增加,Ikr、Iks,抑制Ito[(19.54±2.41)pA/pF VS.(24.83±2.52)pA/pF,P=0.001;(20.69 4±2.29)pA/pF vs.(25.59±3.42)pA/pF,P=0.0003;(6.34±1.93)pA/pF vs.(3.71±1.50)pAZpF,P=0.001)],对Ikur无明显影响[(19.78±1.22)pA/pF vs.(20.39±1.50)pA/pF,P=0.258];5 mol/L卡托普利对,¨Iks Ikur 及均无明显作用[(19.11±4.91)pA/pF vs.(18.99±4.04)pA/pF,P=O.808;(20.76±2.89)pA/pF vs.(20.27±3.46)pA/pF,P=0.305;(18.50±3.78)pA/pF VS.(18.25±4.02)pA/pF,P=0.704;(7.31±1.99)pA/pF vs.(6.89±2.12)pA/pF,P=0.136)].结论 Ang II通过对外向钾电流的影响促进心房颤动时的心房屯重构,卡托普利作为血管紧张素转换酶抑制剂,可能通过抑制肾素.血管紧张素系统呆改善心房颤动时的心房电重构,对心房颤动有防治作用.

犬、猪、羊冠状动脉心房支分布的血管铸型比较

大动物冠状动脉心房支及其分布范围的研究,特别是对比分析犬、猪、羊心脏冠状动脉心房支分布及其几何形态学数据,对于选择合适的大动物模型,确定有效的冠状动脉置管部位,有效灌注并获得理想分离锁定区域的心房肌细胞,具有非常重要的现实意义.

间隙连接蛋白40在新生大鼠心房肌细胞中的表达变化

目的：观察间隙连接蛋白40（ Cx40）在培养新生大鼠心房肌细胞中的表达变化。
　　方法：对6个实验组36个培养皿，在培养第2、7、14、21、28、35天，用免疫细胞化学方法进行Cx40的测定。

成年小鼠心房肌细胞分离方法的改进及钾电流记录

目的：建立稳定、重复性好的小鼠心房肌细胞分离技术，观察小鼠心房肌细胞形态以及钾通道电流特性，为进一步研究小鼠心房肌细胞的电生理特性打下基础。

心房颤动患者右心房肌细胞瞬间外向钾电流电压门控动力学研究

本研究对风湿性心脏病慢性心房颤动(房颤)和窦性心律患者心房肌细胞瞬间外向钾电流(Itol)门控动力学特性对比研究,旨在探讨Itol在心房电重构(AER)中可能的作用.

乳鼠窦房结细胞与心房肌细胞缝隙连接蛋白的表达研究

目的 探讨原代培养乳鼠窦房结细胞与心房肌细胞中缝隙连接蛋白(connexin,Cx)的表达及差异.方法 取培养48h的乳鼠窦房结细胞,随机分为Cx45组、Cx43组、Cx40组;取培养48 h的乳鼠心房肌细胞,随机分为Cx45组、Cx43组、Cx40为对照组,通过激光共聚焦显微镜检测荧光分布及强度变化.结果 乳鼠窦房结细胞中Cx45表达明显,Cx43表达次之,而Cx40表达较弱;乳鼠心房肌细胞中Cx40表达明显,Cx45及Cx43表达较弱,乳鼠窦房结细胞Cx45免疫信号比心房肌细胞中高7.8倍(P＜0.01),而Cx40的免疫信号则较心房肌细胞低4.0倍(P＜0.01).结论 原代培养乳鼠窦房结细胞以Cx45表达为主,而心房肌细胞主要是Cx40表达.

大蒜素对兔心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

目的 研究大蒜素对兔单个心房肌细胞超速激活的延迟整流钾电流(IKUr)的作用,探讨其抗房性心律失常的机制.方法 采用双酶法分离兔单个心房肌细胞,应用细胞外局部灌流法给药,采用全细胞膜片钳技术记录电流,以观察大蒜素对IKUr的作用.结果 大蒜素200μmol/L对正常兔心房肌细胞IKUr有显著的抑制效应,使IKUr峰值由(14.5±3.2)pA/pF降至(7.9±1.2)pA/pF (P<0.01,n＝15).大蒜素可使IKUr的电流-电压曲线降低,且随着除极化电位的增加,作用更加明显,提示其作用具有电压依赖性.同时,发现大蒜素对IKUr的抑制效应存在浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为149.6μmol/L.门控动力学机制研究发现,大蒜素可以使通道激活曲线右移,延迟激活;使通道稳态失活左移,加速失活;使通道失活后恢复时间延长,减缓通道失活后的再次激活.从不同环节减少IKUr通道的开放,降低电流密度.结论 大蒜素抑制心房肌细胞膜上IKUr,这可能是其治疗房性心律失常的细胞电生理基础.

心房颤动患者心房组织肌球蛋白重链基因表达的变化

心房颤动(房颤)是临床上常见的心律失常之一.房颤的收缩重构(contractile remodeling),即房颤诱发的心房收缩功能障碍,包括心房整体收缩功能的减弱和心房肌细胞的收缩特性的改变,是房颤时心房重构的重要组成部分.目前关于房颤时心房组织收缩蛋白构成变化及其在房颤发病机制中的意义的研究较少,本文比较伴有或不伴有房颤的风湿性心脏瓣膜病患者心房组织肌球蛋白重链不同亚基αMHC、βMHC mRNA表达差异,并探讨其在房颤收缩重构中的可能意义.

心房颤动24 h和48 h对犬心房肌有效不应期及L型钙电流的影响

目的 研究犬心房颤动(房颤)持续24h和48 h,心房肌有效不应期和L型钙电流变化的一致性及其机制.方法 健康成年杂种犬18只,分为对照组、24 h房颤组、48 h房颤组,每组6只.600次/min起搏高右心房建立犬房颤模型,应用程序刺激的方法测定右心房有效不应期(ERP),通过Langendorff左回旋支灌流分离心房肌细胞,并通过全细胞膜片钳技术记录L型钙电流(ICa-L)变化.应用免疫组织化学方法检测各组心房组织L型电压依赖性钙通道(LVDCC)α1c蛋白表达.用图像分析系统对组织化学抗原表达进行半定量分析.结果 所有实验动物均可诱发出房颤.心房ERP的变化在初6h较对照组明显缩短,后直至48 h呈进行性缩短.快速起搏6h后ERP(129.50±8.64)ms较对照组(141.00±15.23)ms缩短(12.13±2.24)ms(P＜0.01),24 h后心房ERP(123.00± 13.37) ms缩短(19.23±2.14)ms(P＜0.01),48 h缩短(28.15±4.26)ms(P＜0.01).同时在房颤持续过程中24h房颤可引起ICa-L电流密度(-4.83±0.30)pA/pF较对照组(-6.69±0.08)pA/pF减小,48 h(-3.70±0.50)pA/pF减少的程度更重.24 h房颤及48 h房颤犬的左、右心房组织LVDCC α1c蛋白表达均较对照组明显减少(P＜0.05),48 h房颤组减少程度更重(P＜0.01).结论 房颤持续24 h,心房肌ERP显著缩短、ICa-L密度降低.房颤持续48 h仍然维持L型钙通道改变特征.提示:钙通道阻断剂可用于持续24 h房颤,预防房颤复发.

心房颤动患者右心房肌细胞瞬间外向钾电流的变化

目的比较心房颤动(AF)和正常窦性心律(NSR)患者右心房肌细胞瞬间外向钾电流(Itol)的变化.方法用膜片钳全细胞记录法研究了风湿性心脏病AF心律(AF组)和NSR心律(NSR组)患者右心房肌细胞Itol的变化.两步酶解法得到单个心肌细胞,分别对比了两组细胞的电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线、失活后再激活的恢复过程及电流失活速度.结果AF患者右心房肌细胞Itol密度比NSR患者的Itol密度明显降低,除极化至+60mV时分别为(4.25±0.86)pA/pF(n=20个细胞)和(8.53±0.68)pA/pF(n=11细胞),P<0.001.两组Itol失活速度均无电压依赖性,两组细胞Itol电流的失活速度、激活与失活特征及失活后再恢复常数差异均无显著性.结论AF和NSR患者右心房肌细胞的Itol除电流密度明显降低外,激活曲线参数、失活曲线参数、失活后再激活的恢复时间常数及电流失活速度差异均无显著性,这是AF患者离子通道重构机制之一.

花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流的抑制作用

目的探讨花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流的作用.方法膜片钳全细胞记录技术记录应用花生四烯酸前后人心房肌细胞钠电流.结果花生四烯酸对人心房肌钠电流的抑制作用表现为电压依赖性和浓度依赖性,IC50为10.3 μM.用药前后,钠电流的激活曲线几乎重叠,50%的通道激活点分别为(-40.8±2.7)mV和(-42.5±3.2)mV(n=10,P＞0.05);钠电流失活曲线左移,50%的通道失活点分别为(-94.5±3.4)mV和(-116.6±4.1)mV,即左移(21.2±3.2)mV(n=11,P＜0.01);钠通道失活后恢复时间显著延长,50%钠通道复活时间分别为(5.9±0.4)ms和(27.3±1.7)ms(n=8,P＜0.01).结论花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流具有抑制和延长复活时间作用.

风湿性心脏病慢性心房颤动患者的心房肌钙离子通道组成蛋白α1c的变化

心房颤动(房颤)是临床上常见的心律失常之一,房颤的确切发病机制尚不完全清楚,治疗的总体效果较差.房颤的电生理特征是心房肌有效不应期明显缩短,目前普遍认为L型钙通道电流(ICa-L)密度的下降是心房肌动作电位时限和有效不应期缩短的主要原因,但是导致房颤时心房肌细胞ICa-L密度下降的具体机制仍不十分清楚.本研究的目的在于明确ICa-L密度下降是否缘于钙离子通道形成亚单位α1c蛋白含量和mRNA表达的变化,同时进一步探讨房颤时左、右心房之间的电生理差异是否缘于α1c表达的不同.

慢性心房颤动患者心房肌细胞超快速激活钾电流的研究

目的研究风湿性心脏病(RHD)慢性心房颤动(房颤)使心房肌细胞膜超快速激活钾电流(IKur)的变化,探讨离子通道改变在房颤时心房电重构(AER)中的作用.方法采集23例RHD患者(房颤组12例,窦性心律组11例)心房肌标本,采用急性酶解法,将组织块分解以获得游离的心房肌细胞;应用膜片钳全细胞技术,记录两组患者心房肌细胞膜IKur电流,并对比分析两组的电流-电压曲线以及稳态激活和失活的动力学特性.结果在钳制电位+10 mV～+50 mV时,房颤组IKur密度明显低于窦性心律组(P＜0.05);其中,除极化至+50 mV时,密度分别为(4.92±1.48) pA/pF(n=19个细胞)和(9.31±1.44)pA/pF(n=21个细胞,P＜0.01).房颤组右心房细胞IKur的激活大电导较窦性心律组明显降低,分别为(2.75±0.55)nS(n=21个细胞)和(4.74±0.63)nS(n=21个细胞,P＜0.01).房颤组在+50 mV时的失活率为56%,低于窦性心律组(P＜0.05),而两组的稳态激活和失活特征的差异无显著性.结论现有数据显示,IKur密度的改变可能是慢性房颤时AER中多种离子通道重构的重要机制之一,可能与房颤时心肌细胞的传导性、不应期等改变有关,与房颤发生和持续的关系和潜在的治疗性意义尚需进一步研究阐明.

慢性风湿性心脏病心房颤动对心房肌细胞Cx40、Cx43表达的影响

慢性心房颤动对人心房组织及心房肌细胞的影响

人心房肌细胞的培养与鉴定

目的探索人心房肌细胞的原代及传代培养方法.方法取心外科手术患者(1.5～6.0岁,平均2.5岁)常规切除的右心耳,利用组织贴块法原代培养心房肌细胞并进行传代培养,对培养细胞(取第3代)进行光镜、透射电镜形态学观察和免疫细胞化学鉴定,并绘制生长曲线.结果原代培养10 d左右时细胞数目可达106～107/ml;此后每4～5 d可传代一次,大多可传至第8代.透射电镜观察到典型心肌细胞的超微结构,免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈α-肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ抗体染色阳性.细胞生长曲线显示第3代细胞在密度为1×106～8×106/ml呈对数生长,倍增时间约24 h.结论利用组织贴块法成功培养出人心房肌细胞,所得心房肌细胞纯度高并能传代培养,为深入研究人心房肌细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础.

心房肌连接蛋白40表达和左房扩大在冠心病患者心房颤动发生中的作用

目前有关心房颤动(房颤)与心房肌连接蛋白(Cx)40、Cx43表达的研究大多数是对风湿性心脏病(简称风心病)房颤患者左、右心房肌Cx40、Cx43的表达的研究[1].未见对冠心病房颤患者左、右心房肌Cx40的表达及对比研究的报道.本研究通过对冠心病伴与不伴房颤及左房扩大患者的左、右心房肌细胞Cx40的表达进行对比研究,探讨左房扩大和Cx40表达对房颤的影响,从而揭示冠心病患者房颤发生与维持的可能机制.

心肌梗死对心房肌细胞离子通道的影响

目的 研究心肌梗死对心房肌细胞动作电位及离子通道电流的影响.方法 新西兰白兔20只随机分为2组:对照组10只(其中假手术5只),心肌梗死组10只.心肌梗死组结扎冠状动脉左前降支,假手术兔只穿线不结扎.8周后,酶解法制备心房肌单个细胞,用全细胞膜片钳技术记录心房肌细胞动作电位以及离子通道电流的变化.结果 心肌梗死后心房肌细胞的动作电位时程无显著变化,与对照组相比,心肌梗死组的L型钙电流(-8.68±1.43)pA/pF vs(-5.85±1.17)pA/pF,P＜0.05),钠电流(-52.99±5.31)pA/pF vs-36.75±3.81) pA/pF,P＜0.05)以及瞬时外向钾电流(13.87±1.26 pA/pF vs 7.67±0.93 pA/pF,P＜0.05)显著减小,延迟钾电流无明显变化.结论 兔心肌梗死后心房肌细胞的动作电位无显著变化,L型钙电流,钠电流以及瞬时外向钾电流显著减小,可能是心肌梗死后心房颤动发生的离子基础.

坎地沙坦对豚鼠心房肌细胞钾通道电流的影响

目的 研究坎地沙坦对正常豚鼠心房肌细胞内向整流钾电流(Ik1)和延迟整流钾电流(Ik)的影响,旨在为临床上应用坎地沙坦预防房颤发作和复发提供理论依据.方法 酶解法分离豚鼠单个心房肌细胞,应用全细胞膜片嵌技术,在不同嵌制条件下,记录并分析坎地沙坦对豚鼠单个心房肌细胞Ik1及Ik的影响.结果 坎地沙坦对IK1无影响,但可明显抑制Ik.结论 坎地沙坦抑制Ik,使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长,改善房颤电重构及它的现在已明确的抑制结构重构的作用共同参与房颤发作和复发预防的机制.