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血液净化治疗类风湿关节炎的应用进展
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性多系统损害性的自身免疫疾病,由于自身免疫介导,IL-1,TNF等细胞因子导致滑膜炎,引起软骨破坏,骨质侵蚀.血液净化疗法能安全快速有效地去除患者体内多种自身抗体和致炎细胞因子、炎性介质,对缓解病情进展、提高药物疗效能起到很好的作用.血液净化疗法包括:血浆置换(Plasma exc-hange)、选择性白细胞分离方法(leukoycytaphe-resis)及免疫吸附疗法(Immunoabsorption).
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成年小鼠心房肌细胞分离方法的改进及钾电流记录
目的:建立稳定、重复性好的小鼠心房肌细胞分离技术,观察小鼠心房肌细胞形态以及钾通道电流特性,为进一步研究小鼠心房肌细胞的电生理特性打下基础。
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Lin-CD34-造血干细胞分离方法的建立及其体外培养特性的初步研究
近研究发现在小鼠和人体内存在一类CD34抗原阴性的造血干细胞[1-4],这群细胞以其更广泛的增殖和分化潜能向临床造血干细胞移植提出了新的挑战和选择,也引起了生物学家以及临床医生的广泛关注.但是,由于数量极其稀少并且缺乏特异性标志,因此如何有效地分离纯化这一类细胞显得尤为重要.我们建立了两步法负性筛选Lin-CD34-细胞的方法,并对其体外培养特性进行了初步探讨.
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肿瘤干细胞分离方法的研究进展
干细胞是一类具有无限或者永生的自我更新能力的细胞,多向分化潜能和自我更新是干细胞的两个基本特征[1].干细胞从维持多能性到分化的分子机制的逐渐揭密,当今严重威胁生命的顽疾就会迎刃而解.对肿瘤的研究发现,恶性肿瘤细胞的生长、分化等特性与干细胞特点惊人的相似,进而推测肿瘤的发生起源于干细胞,并提出肿瘤干细胞学说[2].近的科学研究发现[3],肿瘤之所以能具有无限增殖能力,其根本在于肿瘤细胞中占极少数量(0.01%~4%)的肿瘤干细胞,正是这类占极少数量肿瘤干细胞在机体中以极快的速度不断复制出有基因突变的细胞,使肿瘤细胞的数量、瘤体体积急剧扩张并侵入临近组织及迁徙至机体其他组织器官,导致组织器官正常功能的紊乱,并终导致机体死亡.本文对近几年来国内外对肿瘤干细胞的研究现况作一综述.
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豚鼠听毛细胞耳蜗灌注分离法初步探讨
Katsuki和Covell(1953)首次用机械分离法从豚鼠耳蜗中分离出有活性的外毛细胞.Zenner等和Brownell等(1985)完善和发展了毛细胞分离技术,并被广泛采用.Brewnell等先用木瓜蛋白酶加机械分离,后来仅用钝性分离和单纯吹打法.Zenner等用尖端直径为4~40 μm的玻璃毛细管通过显微操纵器,插入Corti隧道直接分离毛细胞.现将我们用的一种新的毛细胞分离方法--耳蜗灌注法,介绍如下.
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心肌细胞分离术
心肌细胞分离方法在不断得到改进.根据实验目的的不同,不断调整分离程序及方法[1~3].但要得到高产量,有持久(>2 h)兴奋性和收缩功能的心肌细胞,仍不是一件容易的事[3],尤其是我们在整体或离体心脏复制各种疾病模型(缺血,心肌肥大等),要在单心肌细胞功能方面研究其病理生理机制时.胶原酶消化分离出的心肌细胞在产量及活力方面受胶原酶, 缓冲液成分,pH,温度,灌流量及消化时间的影响[3,4].
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人卵巢颗粒细胞原代培养方法的比较
目的 对比5种不同方法分离人卵巢颗粒细胞的效果,并选择出高效、稳定的分离纯化、体外培养的有效方法.方法 收集不孕症患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)穿卵时的卵泡液,采用裂解法、裂解+胰酶法、密度梯度离心法(包括Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶)分离颗粒细胞后进行活细胞计数,卵泡生成素免疫组化染色鉴定,MTT法检测细胞增殖能力,检测颗粒细胞体外分泌雌激素含量.结果 在使用不同方法分离颗粒细胞时,Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶3种方法得到细胞数量多于裂解法及裂解+胰酶法(P<0.05).各种分离方法的细胞生长趋势并无明显差异.裂解法、裂解+胰酶法雌激素含量高于Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶(P<0.05).结论 5种方法均成功分离得到颗粒细胞,但每种方法各有优缺点,根据实验目的不同需选择不同的方法.
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猪肝细胞分离方法的改良
目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18~20mi n,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损 ,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.
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豚鼠心肌细胞急性酶分离方法
用于膜片钳实验的细胞必须具备细胞膜完整、表面光洁、活性良好.这类细胞既可以通过原代培养方式获得,也可通过急性酶分离方法获得.细胞情况如何是膜片钳实验是否成功的第一个关键性步骤.本研究总结多年的经验摸索出一套行之有效的豚鼠心肌细胞分离方法,具体步骤如下:
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高原体外肝细胞分离方法的研究
目的:探索高原环境下动物肝细胞的体外分离方法.方法:采用胶原酶体外两步灌流法先进行肝叶灌流,再将所得肝组织悬液分别置37℃温育不同时间,对比观测肝细胞产量、存活率、纯度及细胞接种后生长情况的差异.结果:未经温育组及温育10min、30min、60min组肝组织悬液的肝细胞产量分别为0.85、2.67、3.84和4.29×106/g湿重肝组织;肝细胞存活率分别为97.6%、96.9%、88.3%及71.5%;肝细胞纯度分别为96.2%、95.4%、96.7%及95.8%;前两组细胞贴壁生长和增殖情况较好,后两组则较差.结论:在高原环境下先采用肝叶体外两步灌流后再行胶原酶短时间(10min左右)温育处理是一种既可获得较满意的细胞活性,同时又可显著提高细胞产量的分离肝细胞方法.
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淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨
淋巴细胞培养是实验研究常用的一项技术,对于培养器皿,可以选用培养板,培养瓶,培养皿,三角烧瓶,试管,青、链霉素小瓶等[1,2].目前,关于淋巴细胞分离方法的文献资料较多,论述较详细,而对淋巴细胞培养则论述较少,较简单.细胞培养工作十分繁琐,环节较多,探讨细胞培养的条件,对于成功培养细胞具有十分重要的意义.本文选用1.5ml离心管培养淋巴细胞,观察了淋巴细胞培养前后的变化,探讨了淋巴细胞培养的条件及失败的常见原因.现报道如下.
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高原体外肝细胞分离方法
目的:探索高原环境下动物肝细胞的体外分离方法;方法:采用胶原酶体外两步灌流法先进行肝叶灌流,再将所得肝组织悬液分别置37℃温育不同时间,对比观测肝细胞产量、存活率、纯度及细胞接种后生长情况的差异;结果:未经温育组及温育10min、30min、60min组肝组织悬液的肝细胞产量分别为(0.85、2.67、3.84、4.29)×106/g湿重肝组织;肝细胞存活率分别为97.6%、96.9%、88.3%及71.5%;肝细胞纯度分别为96.2%、95.4%、96.7%及95.8%;前两组细胞贴壁生长和增殖情况均较好,后两组则较差;结论:在高原环境下先采用肝叶体外两步灌流后再行胶原酶短时间(10min左右)温育处理是一种既可获得较满意的细胞活性,同时又可显著提高细胞产量的分离肝细胞方法。