首页 > 文献资料
-
分子营养学(上)
人类对生命现象与本质的认识经历了由整个机体水平向器官、组织、细胞、亚细胞结构及分子水平这样一个逐渐深入的过程.近几十年,随着分子生物学理论与实验技术在生命科学领域各个学科的渗透及应用,产生了许多新兴学科.分子营养学就是营养学与现代分子生物学原理和技术有机结合而产生的一门新兴边缘学科,它在阐述营养素与基因如何相互作用,导致营养相关疾病发生发展方面取得了许多重要进展.
-
锌对染铅大鼠海马神经元亚细胞结构及突触参数的保护作用
目的探讨铅对海马CA1区亚细胞结构的损伤及锌的拮抗作用.方法给Wistar大鼠饮用6.15 mmol/L醋酸铅(染铅组)及含3.10 mmol/L硫酸锌的上述溶液(铅锌组),喂养40 d,采用原子吸收法检测各组动物血铅和海马铅含量;电镜下观察各组动物海马CA1区神经元及其突触的亚细胞结构变化;对照组饮用蒸馏水.每组10只动物.结果与对照组和铅锌组相比,染铅组大鼠血铅和海马铅含量明显升高(P<0.05);染铅大鼠海马CA1区神经元内的含粗面内质网、线粒体减少,有些已发生空泡化;染铅大鼠海马CA1区放射层的含50个以上突触囊泡的突触结构明显减少(P<0.01).而含10个以下囊泡的突触结构则明显增加(P<0.01).突触前后膜面积均明显减小(P<0.01).但铅锌组和对照组之间无明显差别.结论锌对铅引起的大鼠海马CA1区神经元亚细胞结构变化有拮抗作用.
-
基因检测是病理学发展的又一推动力
今年是<中华病理学杂志>创刊后的第50周年.半个世纪来杂志作为时代的脉搏或窗口反映着病理学发展的各阶段进步.20世纪50年代的组织化学,60年代的亚细胞结构,70年代以来的免疫组织化学,以至90年代的基因检测,观察疾病所采用的手段日益丰富,对疾病发生、发展的认识日益深入.今天不仅不会再把B细胞系列浆细胞的内涵物只表述为玻璃样小滴或变性,进而还能把免疫球蛋白分辨出重链或轻链κ或λ及各类型,并联系其相关编码基因的基因型和异常.杂志生存在科学如此快速发展的年代,面对日新月异的学术进展,实感庆幸.<中华病理学杂志>从2005年改成月刊,正是适应当今病理学事业发展的需求.
-
血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点
目的 探讨血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点.方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率.结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT 1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20.HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为(18.22±3.53)%、(10.77±2.06)%、(7.44±1.06)%、(8.56±3.51)%,HaCaT分别为(11.90±1.46)%、(5.02±1.48)%、(3.82±0.54)%、(8.90±2.30)%.结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体.
-
自噬及其在急性胰腺炎中的作用
自噬(autophagy)是一种溶酶体参与的、复杂的分解细胞内蛋白和亚细胞结构的过程.通常,细胞处于"饥饿"或其他应激的情况下,通过降解细胞内蛋白和细胞器为细胞的基本代谢提供能量.基因分析发现,调控自噬过程的基因在进化中高度保守,从酵母、果蝇到脊椎动物和人都可以找到参与自噬的同源基因;并且这些基因在胚胎发育和肿瘤发生中发挥作用.形态上,自噬以细胞内形成空泡样结构为特点,将蛋白、亚细胞结构包裹,或直接与溶酶体结合而降解.近来的研究表明,自噬功能的异常与许多疾病的发生与发展有关.
-
OPTN基因的低表达对大鼠视网膜神经节细胞存活影响的研究
目的 观察大鼠OPTN基因的低表达对视网膜神经节细胞系(RGC5)亚细胞形态结构及存活的影响.方法 实验研究.设计并合成特异性针对Sprague-Dawley(SD)大鼠OPTN的3对RNA干扰片段(siRNA),体外培养SD大鼠星型胶质细胞,取对数生长期的细胞做实验,分别将3对siRNA(si-OPTN-001、si-OPTN-002、si-OPTN-003)通过脂质体Lipofectemine 2000转染入星型胶质细胞,24 ~ 48 h后采用实时PCR和Western Blot检测siRNA的干扰效果,筛选出抑制效果佳的序列;以筛选出来的siRNA序列构建绿色荧光蛋白EGFP标记的si-OPTN,并通过Lipofectemine 2000包裹转染RGC5,将RGC5分为4组:空白对照组,绿色荧光蛋白真核细胞表达载体(pEGFP)阳性对照组,si-OPTN组,脂质体阴性对照组.转染24~48 h后用细胞器特异荧光染料标记细胞内不同细胞器结构,通过共聚焦荧光显微镜来观察表达的si-OPTN在RGC5内的分布、定位及其对细胞器形态结构的影响;通过形态学观察和Hoechst33342-PI荧光染色观察si-OPTN对RGC5存活的影响.实验中不同组间的总体比较采用单因素方差分析.结果 实时PCR及Western Blot的结果显示:转染si-OPTN-001、si-OPTN-002和si-OPTN-003 24 h后星型胶质细胞内OPTN的mRNA表达下降,分别为阴性对照组的(61.71±0.84)%、(48.13±0.92)%和(46.22±0.73)%,而转染si-OPTN-001、si-OPTN-002和si-OPTN-003 48 h后星型胶质细胞内OPTN的蛋白表达水平下降,分别为阴性对照组的(64.44±2.01)%、(57.78±1.97)%和(37.78±1.84)%,其中si-OPTN-003与阴性对照组相比降低显著;si-OPTN转染RGC5细胞24 h后的转染效率为(17.43±0.94)%;转染48 h后的转染效率为(20.13±1.24)%;表达的si-OPTN在细胞内基本上均匀分布于整个细胞,覆盖胞质和胞核,与阴性对照组细胞器染色情况比较,转染细胞内的肌丝蛋白、线粒体、溶酶体及高尔基体形态结构未见明显损伤性改变;Hochest33342/PI荧光染色结果显示:转染24 h,与空白对照组(0.74±0.34)%和阴性对照组(0.96±0.41)%比较,EGFP阳性对照组及si-OPTN组整组的RGC5细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义(F=5.457,P<0.05),但si-OPTN组转染质粒的细胞凋亡率明显低于阳性对照组,差异有统计学意义(F=6.541,P<0.05).随转染时间延长,在转染48 h时,阳性对照组凋亡率较24 h时下降,si-OPTN组凋亡率稍升高但无统计学意义(F=3.212,P>0.05),且仍低于阳性对照组.结论 相较于另2对si-RNA,si-OPTN-003更能有效地抑制OPTN的表达;si-OPTN转染RGC5后均匀分布于全细胞,对细胞内的亚细胞器结构未见明显损伤性改变;通过转染si-OPTN使OPTN表达降低可能对RGC5的存活有保护作用.
-
流式细胞技术及其临床应用
流式细胞技术(Flow Cytometry Technology,FCT)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术,广泛应用于基础临床研究和临床实践各个方面,本文就其定义、技术流程及应用等方面进行综述.
-
流式细胞术的应用及发展
流式细胞仪(Flow cytometer)是一项集激光技术、电子物理、流体力学、光电测量技术、计算机技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器,被誉为试验室的"CT",是一种可以对细胞(或亚细胞)结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术.简单说流式细胞术(Flow cytometry,FCM)是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或亚细胞结构,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或亚细胞)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行快速定性或定量检测的一种现代细胞分析技术.
-
线粒体及其相关疾病
线粒体是真核生物细胞内普遍存在的一种亚细胞结构,是细胞内主要的能量来源.人体内的绝大多数组织细胞都依赖于线粒体的氧化磷酸化作用获取维持自身代谢所需的能量.
-
Dex疫苗的研究现状及其在自身免疫性疾病的应用
外泌体是由活细胞分泌的直径为60~90 nm的囊状小体,在电镜下为脂质双层膜包围的扁平球体,呈特征性的杯状外型,存在于血清、尿液、唾液、乳汁等体液中~([1]_.作为一种亚细胞结构,它能代表其来源细胞行使一系列生物学功能,如肿瘤细胞来源的外泌体能介导免疫逃逸,肠上皮细胞来源的外泌体参与了口服耐受作用的发挥,胎盘绒毛膜上皮细胞来源的外泌体能介导母胎耐受等等.
-
细胞微粒在自身免疫性疾病发病中的作用:一种新的潜在治疗靶标
细胞微粒( Microparticles,MPs)是一类在某些生理或病理状况下,从血管内皮细胞或循环血细胞出芽脱落的富含磷脂的直径约为0.1~1.0μm的颗粒,具有生物活性可参与多种免疫性疾病(Immune diseases)的发病[1]。微粒被认为是多功能的亚细胞结构,通过释放生物活性分子和表面抗原与靶细胞的受体相互作用,介导细胞内信号转导,传递分子物质和诱导细胞内信号[2,3]。因此,细胞微粒可能作为自身免疫性疾病新的潜在治疗靶标。
-
创伤性失血性休克的复苏进展
1休克复苏的目标创伤性失血性休克的病理生理学变化首先是创伤和失血所致全身应激反应、循环血容量不足、组织灌注不良和缺氧,从而引起神经、内分泌和免疫系统改变、细胞因子和炎性介质释放和自由基大量产生,进而引起微循环障碍或衰竭、细胞代谢障碍、能量衰竭和酸中毒,终导致细胞及亚细胞结构的功能和结构改变、细胞死亡、多个器官的急性能量危机和功能障碍.
-
流式细胞术
流式细胞术发展简史流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术.其特点是:①测量速度快,快可在1s内计测数万个细胞;②可进行多参数测量,对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量,并具有明显的统计学意义;③是一门综合性的高科技方法,它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等众多领域的知识和成果;④既是细胞分析技术,又是精确的分选技术.
-
用图像分析减少整体原位杂交技术中的假阳性结果
整体原位杂交技术(Whole-mount in situ hybridization)已被应用于对生物基因表达的研究上[1~5],它可以比较直观全面地看到基因的表达部位,为研究该基因的功能提供线索,而不用象切片杂交需将结果迭加分析进行三维重建.此外,该技术还可以在单个细胞水平定位表达,甚至可观察到亚细胞结构的分布[6,7].因此该技术已成为研究新基因表达的有力手段.在整体原位杂交技术中,图像判读是结果的关键部分,如何减少结果中的假阳性和假阴性已成为一个重要问题.在此,我们通过UTHSCSA ImageTool v3.0软件对图像进行处理,可有效减少结果中的假阳性.
-
刺五加皂甙对胃癌细胞膜电位和亚细胞结构的影响
刺五加皂碱(acanthophopanax senticosus,ASS)为五加科植物,具有益气健脾、补肾安神和增强抗肿瘤免疫活性等作用[1].我们曾用流式细胞仪观察到ASS作用于Hep G2肝癌细胞的S期,抑制肝癌细胞DNA合成[2].我们用细胞膜片钳(patch clamp)技术及透射电镜观察ASS对胃癌细胞的离子通道和超微结构的影响,从分子水平探讨ASS对胃癌细胞的作用机制,以寻找治疗胃癌的新途径.
-
我国血管外科基础研究现状及其发展趋势
随着细胞生物学、分子生物学和基因工程技术的迅速发展,血管外科基础研究的深度和广度,都已进入一个崭新时代,研究内容亦从组织器官深入到亚细胞结构,从单个基因、单个生长因子的分析,扩展到复杂信号传导、细胞周期变化、细胞凋亡状态以及多基因参与的细胞生命活动.研究方法由简单的聚合酶链反应技术和单参数流式细胞仪分析,走向现代生物学技术的结合、乃至基因转染、基因敲除等.现就近年血管外科领域的基础研究现状、存在问题及其发展方向概述如下.动脉疾患的基础研究
-
单克隆抗体N-35对肺癌相关抗原的识别
目的:研究和确定肺癌相关抗原的有关特征及其意义.方法:利用抗人肺癌单克隆抗体N-35作为免疫探针,经免疫沉淀和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系GLC-82、宫颈癌细胞系HeLa、肝癌细胞系HepG-2、乳腺癌细胞系PMC、正常人心脏及肺组织的存在及分布情况;用N-聚糖酶酶解方法确定肿瘤相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系;用差速离心技术分离肺腺癌细胞系GLC-82亚细胞结构中的胞膜,胞核及线粒体成分,分别取样经免疫印迹法测定肿瘤相关抗原N35在亚细胞结构中的分布状况;用免疫荧光技术探测肺腺癌相关抗原N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的染色体结构定位;用2种免疫亲和层析技术尝试获得大量纯化肿瘤相关蛋白N35的有效方法.结果:肺腺癌相关抗原N35是一种糖蛋白分子,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中,而以不同Mr形式分布于GLC-82,Hela,HepG-2和PMC细胞蛋白中;在亚细胞结构中主要分布于胞核,线粒体次之,胞膜上分布少,主要不以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在;在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2期时明确地定位于中心粒(centriole)结构上.结论:肿瘤相关蛋白N35可能是一种只存在于肿瘤细胞并与其增殖活动密切相关的重要的肿瘤细胞生长调节蛋白,其功能可能与肿瘤细胞无限制增殖活动有关.
-
光学相干断层扫描在消化系统中的应用进展
光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)为近年来发展较快的一种新型、高清晰的光学成像技术,成像原理与超声相似,不同之处在于将声波转换为光波,采用波长为750~1300 nm的低能量红外光,通过测量经各组织层折射后的反射光性质和回波延迟时间形成图像[1-2]。OCT具有高分辨率、横断面及层析成像特点,轴 向 分辨率 为10μm,为超声内镜的10~25倍,扫描深度2~3 mm,虽不及超声内镜,但成像范围亦可覆盖黏膜层及黏膜下层[3]。2011年,Liu 等[4]报道了微辨率 OCT(micro-optical coherence tomo-graphy,μOCT)在冠状动脉疾病中的应用,μOCT 分辨率为2μm ×2μm ×1μm(x 轴×y 轴×z 轴),可于冠脉内清晰显示细胞及亚细胞结构,为目前分辨率高的 OCT。此外, OCT 成像还具有非侵入、免标记、即时成像以及能够活体组织和器官检测的特点[5]。1997年,OCT 技术首次应用于消化道疾病的诊断[6-7],目前该技术在消化系统中的研究进展较快,主要包括食管、胃肠道及胰胆管检查,为早期癌变及其他相关疾病的诊断提供证据。
-
激光扫描共聚焦显微镜在生命科学研究中的应用
随着免疫荧光技术在生物学研究领域的广泛应用,研究人员注意到,荧光显微照片的分辨率较低.传统的荧光显微镜使用场光源,因标本邻近结构(细胞或亚细胞结构)产生的衍射光和散射光的干扰,使标本中细微结构的成像不够清晰.在科学研究工作对更高图像分辨率的追求的前提下,激光扫描共聚焦显微镜应运而生.1957年,Marvin Minsky申请了激光共聚焦扫描显微镜的发明专利,但直到1987年该仪器才开始真正商业化生产.与传统光学显微镜相比,它解决了生物样品结构相互重叠影响观察的问题,并可形成清晰的三维图象.所以它自从问世以来,在生物学的研究领域中得到了广泛应用.
-
大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定的初步研究/β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠坐骨神经髓鞘中的表达/β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究/β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对雪旺氏细胞增殖的影响