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彗星试验琼脂糖凝胶片保存方法研究
单细胞凝胶电泳技术检测环境因素致DNA损伤具有很高的灵敏性,已在国内外广泛用于职业危险因素引起的人群健康效应研究[1].国内多数现场与实验室距离较远,不具备荧光显微镜和图像存储设备,因此极大地限制了该技术的应用和推广.湿片在保存和运输方面困难较大,并且储存时间越长,DNA扩散的可能性就越大,结果越不稳定.找到一种稳定可靠的凝胶片保存方法,是将该方法推广应用于现场工作的迫切需求.国内有文献报道使用冷冻法保存凝胶片,但只能保存2～3天.国外已有研究使用甲醇脱水干燥法和乙醇脱水干燥法保存凝胶片,但尚没有系统的研究这两种脱水干燥法对琼脂糖凝胶片保存的影响[2, 3].本研究比较了乙醇和甲醇两种脱水干燥法对凝胶片保存的影响.
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OLYMPUS荧光显微镜自动摄影装置曝光控制单元的维修
一台 OLYMPUS荧光显微镜自动摄影装置,近日发现其 35mm照相机不能自动卷片,因而无法使用.该机配置为 : BHF型荧光显微镜,PM- 10AD型自动摄影装置机身,PM- CBAD型曝光控制单元,C- 35AD型照相机,其基本工作流程是 : 将样本载玻片放在显微镜载物台上,对好焦距.在自动摄影装置机身上,根据自动色温控制单元所测的色温,调节转轮到佳位置 (三角形箭头指线即能自动控制照相机的曝光时间,曝光后自动卷片.由于这套装置能自动测光,自动测色温,自动控制曝光时间,因此任何人都能拍成一张较理想的彩色显微照片.较好地解决了以往难以解决的彩色照片色温调整问题,使摄影变得简单易行 .
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中耳胆脂瘤CT表现与MMP-2、MMP-9表达的关系
目的 探讨中耳胆脂瘤CT表现与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在组织中表达的关系.方法 采用免疫组化法对50例中耳胆脂瘤标本MMP-2、MMP-9的表达进行检测,分析与其CT表现的关系.结果 中耳胆脂瘤CT显示听小骨不同破坏范围及程度,各组中MMP-2、MMP-9的表达差异有显著性(P＜ 0.001).结论 胆脂瘤中MMP-2、MMP-9的表达与听小骨的破坏程度呈正相关关系,可成为中耳胆脂瘤预后不良的标志.
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多谱线光声断层摄影术的癌症异质性光学成像
目的 考察多谱线光声断层摄影术( MSOT)在展示目标外源物质的不均匀分布状况和活体样本恶性肿瘤中直径在毫米级的血管的特征等方面的能力.材料与方法 实验中涉及的对动物的操作经上巴伐利亚行政区政府批准.研究人员使用一台MSOT装置(产生横断面图像速度为10帧/s,平面内分辨率约为150 μm)对小鼠皮下肿瘤进行成像.为了研究动态对比强化,研究人员系统性地对3只患4T1型肿瘤的小鼠进行注射吲哚菁绿(ICG)操作,并在该操作前、注射时及注射后20 min,4h和24 h对上述小鼠进行成像.荧光显微镜成像结果被用于对比.靶向荧光剂(注射6h后)和血红蛋白氧合物的MSOT同时进行(4T1型肿瘤:n=3).冰冻切片的荧光显微镜成像结果被用于验证上述结果.研究人员利用长循环时间金纳米棒对由于渗透性增加和肿瘤(4T1型肿瘤:n=4,HT29型肿瘤:n=3,A2780型肿瘤:n=2)内的滞留产生的积聚效应进行评估(注射前,注射时,注射后1 h,5h和24h).暗场显微镜检查结果被用于验证上述结果.结果 吲哚菁绿可用于动态对比强化.与荧光显微镜成像对比,MSOT显示了肿瘤内药剂的不均匀分布.靶向荧光剂和脱氧血红蛋白的同时成像让研究人员除目标药物摄取程度外,还可以了解肿瘤内的血管系统.久而久之在MSOT影像中看到的肿瘤中的金纳米棒的积聚过程,也呈异质性吸收.结论 MSOT技术可用于肿瘤的即时高空间分辨率观测,用以展示目标荧光染料、纳米材料以及肿瘤内部血管网的影像资料.
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荧光显微镜的功能配置及应用要点
在荧光显微镜观测时,镜像模糊、荧光暗弱、亮度不均、拍摄记录条件难以控制等是困扰实验者的常见问题.除荧光标本的制备环节外,掌握仪器的基本原理,合理配置、正确使用、必要的实时调试也是非常重要的,本文拟对后者略谈工作体会.
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生物医学荧光成像系统的应用
近年来,随着生命奥秘的逐步揭开,医学研究的技术日趋精密、复杂.荧光探测是一种非常灵敏和有效的技术,它可广泛应用于物质结构探测和表面现象观察.在荧光成像技术中,早的成像系统是荧光显微镜.生物医学荧光成像系统根据其观测对象可以分为平面和活体的;根据探测荧光的特性可以分为激发荧光和化学荧光检测系统.
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硫代黄素T在皮肤淀粉样变染色的初步应用
目的寻找硫代黄素T对皮肤淀粉样物质特殊染色的佳浓度.方法在20例标本中分别用1%、0.5%、0.1%硫代黄素T染色.结果 0.1%硫代黄素T对皮肤淀粉样物质染色效果较好.结论 0.1%硫代黄素T是一种良好显示淀粉样物质的方法.
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利用流式细胞仪计数蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫方法的初探
目的 研究利用流式细胞仪对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)孢囊和微小隐孢子虫(Crypto sporidium parvum)卵囊的高浓度混合样本进行计数,为“两虫”标准品制备提供技术支撑,以期能降低“两虫”检测试剂成本.方法 利用已知浓度的荧光微球对经免疫荧光染色的“两虫”混合样本进行计数,采用非参数检验中两个相关样本检验方法对流式细胞仪和荧光显微镜计数结果进行统计学分析比较.结果 流式细胞仪方法计数蓝氏贾第鞭毛虫孢囊和微小隐孢子虫卵囊的相对标准偏差(RSD)分别为14.7％和15.2％,比荧光显微镜计数结果的RSD(14.1％和15.1％)稍高.利用Wilcoxon检验得出两种方法对孢囊和卵囊的计数结果差异均无统计学意义(Z=-0.91 8,P=0.359和Z=-0.102,P=0.919).结论 利用流式细胞仪计数高浓度“两虫”混合样本的方法能达到生物学实验要求的精确度,并与荧光显微镜计数方法具有等效性,可弥补荧光显微镜无法直接计数高浓度样本的不足,并为“两虫”标准品的筛选与分装奠定基础.
关键词： 蓝氏贾第鞭毛虫 微小隐孢子虫 流式细胞仪 荧光显微镜 Wilcoxon检验 -
宁夏首次从社鼠鼠肺中分离到汉坦病毒
汉坦病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS)的病原体[1].在我国流行的是HFRS,鼠类为其自然宿主和主要传染源.2009年,笔者从1只社鼠鼠肺中分离到汉坦病毒,经鉴定为汉滩型(HTN),现报告如下.一、材料与方法1.标本来源:于2009年在宁夏回族自治区泾源县HFRS监测点,采用夹夜法捕鼠,共捕鼠266只.捕获鼠类经分类鉴定和登记后,无菌解剖采集鼠肺标本,共采集266份鼠肺标本.2.鼠肺组织抗原检测:采用直接免疫荧光法,将采集的鼠肺标本用冷冻切片机制成3～5 μm厚的切片,冷丙酮固定10 min后吹干.玻片上滴加用伊文思兰PBS稀释的抗汉坦病毒单克隆荧光抗体(由国家出血热实验室提供)15 μl/孔,置湿盒内37℃水浴30 min.反应后的玻片用 pH 7.2～7.4,浓度为0.02 mol/L PBS冲洗3次,蒸馏水漂洗1次,吹干,荧光显微镜观察结果.
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利用荧光探针Fluo-4检测胸腺细胞内钙离子浓度变化
利用荧光显微数码成像系统测量荧光探针Fluo-4荧光强度的改变,建立动态检测细胞内钙离子浓度的方法.用荧光探针Fluo-4/AM标记原代培养小鼠胸腺细胞,以KCL刺激胸腺细胞去极化,并打开细胞膜上电压依赖性钙通道,细胞内荧光强度会发生改变.利用荧光显微数码成像系统动态监测Fluo-4荧光强度的改变可分析计算钙离子浓度.本方法灵敏度高,能实时监测细胞内钙离子浓度的变化.
关键词： 荧光探针Fluo-4 荧光显微镜 钙离子 -
探索双重荧光染色并利用两种不同显微镜在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值
目的 探索荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜以及双重荧光染色法在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值.方法 选取临床上抗核抗体呈阳性的血清样本结合到抗原片上,先后用异硫氰酸荧光素(FITC)和4 ',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)两种荧光染料孵育,之后在两种不同的显微镜下观察.结果 FITC荧光出现的部位是抗原抗体结合处,DAPI荧光出现的部位为细胞核,当通过DAPI荧光对细胞核定位后,可使得FITC的荧光模式更易于观察.本实验通过利用两种荧光标记的方法在两种显微镜上分别观察了斑点型、均质型、着丝点型、核点型、核膜型、胞浆颗粒型——抗高尔基体抗体.结论 综合各种因素,利用双荧光染色法染色,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察,对于在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式具临床价值.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 荧光显微镜 抗核抗体 -
细胞膜电位的动态监测及其在银杏内酯研究中的应用
建立了一种简便、快速的膜电位的测量方法.采用亲脂性阴离子荧光探针DiBAC4(3)标记大鼠脑神经元细胞,以倒置荧光显微镜观察并记录细胞膜电位的变化.用所建方法研究了银杏总内酯,及银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对大鼠脑神经元细胞膜电位的影响.结果显示,加入银杏总内酯及各种银杏内酯后细胞出现去极化,膜电位迅速改变,随后回复至正常水平,银杏总内酯对细胞膜电位的影响大于各单体,其中以银杏内酯B的作用为主.
关键词： 膜电位 荧光显微镜 荧光探针DiBAC4(3) -
皮下组织膜状脂肪坏死误诊3例并文献复习
目的对膜状脂肪坏死的病理特征、诊断要点及其鉴别进行探讨.方法观察3例皮下组织膜状脂肪坏死的病理形态学改变,经多种免疫组化标记、特染并文献复习.结果3例的病理学变化为:皮下脂肪组织陈旧性坏死,吞噬细胞吞噬坏死物,成为泡沫细胞,进一步形成早、中、晚期膜状脂肪坏死的囊膜状结构及周围炎症性反应性增生.膜状物免疫组化CD68(+),Vim、S-100、HMB45、CD1a、EMA和CK(-).特染PAS(+),Masson染色呈红色至金黄色、网状纤维延伸到囊膜腔面以及富于嗜银颗粒.膜状物及泡沫细胞呈自发黄绿色荧光.结论膜状脂肪坏死是一种特殊类型的陈旧性脂肪坏死性炎症.可能因坏死脂肪被吞噬而发生化学变化,形成特殊的膜状结构.诊断依靠其独特的病理形态学改变,并结合免疫组化及特染检测.
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用改良地高辛标记原位杂交方法检测Ly49CmRNA表达
由Ly49C在细胞免疫调节中传导抑制性信号,推测该分子与移植免疫耐受有关.国内外大多数的研究是用单克隆抗体方法检测该分子的膜表达,但是试剂价格昂贵,且需要特殊实验设备(如免疫荧光显微镜、流式细胞仪等),不利于推广应用.我们根据核酸杂交原理,从减少组织细胞的破坏、降低成本两方面,对地高辛标记原位杂交方法进行了改良,并应用改良后的原位杂交方法在培养细胞的甩片上检测Ly49CmRNA的表达,具有特异、清晰、低成本、简单等特点[1].介绍如下.
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绿色荧光蛋白放射免疫分析试剂盒的研制
绿色荧光蛋白（GFP）于1962年在一种学名为 Aequorea Victoria的水母中发现，包含238个氨基酸残基[1-2]。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会吸收蓝光的部分能量，发出绿色荧光。GFP 常用于标记某些特定的 RNA、内源性代谢产物以及靶蛋白[3]，可通过荧光显微镜实时观察，也可通过荧光激活细胞，分选分离细胞[4]。这一活体生物标记[5]特性，使得 GFP成为实时观察细胞、组织、器官不可或缺的工具[6]，在转基因动物生产中也得到了广泛的应用[7-12]。
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双歧杆菌LTA、EPS 对小鼠巨噬细胞活力的影响
脂磷壁酸(LTA)和胞外多糖(EPS)是双歧杆菌的细胞壁表面物质,在抗肿瘤和提高免疫力方面已成为研究热点.据此,本研究采用MTT法、荧光显微镜形态观察及激光扫描共聚焦分子生物学观察法检测LTA和EPS对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫激活能力,并通过脂多糖(LPS)作用组做对照,进一步探讨LTA和EPS提高免疫活性机理及影响程度.
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携抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡黏附效能的体内外评价
目的 构建小鼠携抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡(MBIL-2Rα)及体内外评价其靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥连法构建携带荧光FITC的MBIL-2Rα和普通超声微泡(MB).首先利用平行板流动腔体外评价在不同时间点、不同浓度小鼠IL-2Rα包被下MBIL-2Rα结合数目.然后,分别随机经静脉将MBIL-2Rα和MB弹丸式注入对照组(10只)和TNF-α处理组(10只)的小鼠提睾肌炎症模型.同时,200倍荧光显微镜直视下观察并记录5 min内两组中不同微泡在提睾肌微血管中的黏附数量和黏附情况.结果 体外结果显示,MBIL-2Rα结合数量随着IL-2Rα包被浓度的增高而增加(P<0.05),并与结合时间呈明显相关(P<0.05);体内荧光显微镜下TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量[(4.6±1.1)个/200倍视野)]明显高于MB黏附数量[(3.0±0.7)个/200倍视野](P<0.05);且TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量分别为对照组MBIL-2Rα和MB黏附数量的(2.8±0.8)和(3.7±1.4)倍(P<0.01).结论 MBIL-2Rα可与IL-2Rα特异、有效地结合,其高效黏附性能将有助于进一步对移植排斥反应的靶向超声分子显影.
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荧光显微数字成像系统对神经元内游离钙的动态测量
目的研究神经元内Ca2+浓度的动力学变化,建立动态检测细胞内Ca2+浓度的方法.方法原代培养大鼠大脑神经元,以N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)刺激神经元,用荧光显微数字成像系统测定Ca2+浓度的变化.结果荧光显微数字成像系统测量的细胞荧光图像分析显示,神经元Ca2+在NMDA的刺激下迅速发生改变,并被全程记录.结论以荧光显微数字成像系统实时监测细胞内Ca2+的动力学变化,不失为一种代替激光共聚焦显微镜测量细胞内游离钙的有效方法.
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应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究
目的应用荧光显微镜及新型荧光探针 H2DCF-DA检测在光源照射过程中人脐静脉血管内皮细胞(ECV 304)内活性氧的产生情况.方法将 ECV 304细胞接种于 35 mm培养皿中,24 h后加入 H2DCF-DA,使其终浓度为 10μmol/L,孵育 30 min.利用荧光显微镜的激发光源作为照射光源,在采集荧光图像的同时完成光源照射,光源输出波长范围为 460～490 nm,功率密度约为 100 mW/cm2.连续采集 DCF的荧光图,观察细胞内 DCF荧光的变化情况,采用计算机图像处理和分析技术,求得细胞内不同照射时间点 DCF平均荧光强度,进而得到平均荧光强度-时间曲线.另外,使用线粒体特异标记探针 MitoFluor Red 589与 H2DCF-DA共同孵育细胞,分别采集同一细胞的 DCF的荧光图和 MitoFluor Red 589的荧光图,并利用像素-荧光强度分析方法来确定 DCF荧光在细胞内的分布位置.结果在光源照射的开始阶段,ECV 304细胞内的 DCF荧光强度迅速增加,在第 10s时便上升至第 2s时的 2.2倍,但是随着照射时间逐渐延长,荧光强度增幅逐渐变小,到第 60s时上升至第 2s时的4.7倍.观察时间进一步延长,DCF的荧光强度的变化似乎进入平台期,继而开始出现下降.考察 DCF荧光在 ECV 304细胞内的分布位置主要通过比较细胞内不同区域的 I1/I2值,通过图像分析与计算得到线粒体区、细胞核区以及细胞质非线粒体区内 I1/I2值分别为 1.9490±0.2209、1.1128±0.2256、0.9413±0.0853.结论荧光探针技术和图像分析技术应用于细胞内活性氧的检测,方法简便、结果可靠.光照可致 ECV 304细胞内活性氧产生,且主要位于线粒体内,这可能与线粒体内内源性光敏物质丰富有关,但尚不能完全排除该荧光探针自身性质致使上述现象出现的可能.
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高分辨率荧光显微成像技术在光敏剂亚细胞定位研究中的应用
目的探讨应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统研究血卟啉单甲醚(hematoporphrin monornethyl ether HMME)亚细胞分布的可行性.方法传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞,与HMME共同孵育24 h,选择4种特异性细胞器荧光探针Rhodamine-123、Lucifer yellow、DiOC6(3)和BODIPY分别标记细胞内线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体,应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统,分别采集细胞内HMME与细胞器探针的荧光图像.通过计算机图像处理,设计采用细胞器-细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位.结果在参数m的不同取值点,HMME在4种细胞器区域与细胞平均荧光光强比值(J1/J2)的差异有显著性,且各细胞器区域J1/J2大小排列顺序都为:高尔基体＞线粒体＞内质网＞溶酶体;随参数m的增高,HMME在4种细胞器区域平均光强比值呈下降趋势;细胞核区荧光微弱.结论高分辨率荧光显微成像系统能对HMME及4种细胞器探针进行荧光成像;应用此系统结合荧光定量分析法能对荧光效率极低的光敏剂进行较精确的亚细胞定位研究.
