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携抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡黏附效能的体内外评价
目的 构建小鼠携抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡(MBIL-2Rα)及体内外评价其靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥连法构建携带荧光FITC的MBIL-2Rα和普通超声微泡(MB).首先利用平行板流动腔体外评价在不同时间点、不同浓度小鼠IL-2Rα包被下MBIL-2Rα结合数目.然后,分别随机经静脉将MBIL-2Rα和MB弹丸式注入对照组(10只)和TNF-α处理组(10只)的小鼠提睾肌炎症模型.同时,200倍荧光显微镜直视下观察并记录5 min内两组中不同微泡在提睾肌微血管中的黏附数量和黏附情况.结果 体外结果显示,MBIL-2Rα结合数量随着IL-2Rα包被浓度的增高而增加(P<0.05),并与结合时间呈明显相关(P<0.05);体内荧光显微镜下TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量[(4.6±1.1)个/200倍视野)]明显高于MB黏附数量[(3.0±0.7)个/200倍视野](P<0.05);且TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量分别为对照组MBIL-2Rα和MB黏附数量的(2.8±0.8)和(3.7±1.4)倍(P<0.01).结论 MBIL-2Rα可与IL-2Rα特异、有效地结合,其高效黏附性能将有助于进一步对移植排斥反应的靶向超声分子显影.
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在生理血流条件下靶向超声微泡对P-选择素的靶向黏附效能
目的 平行板流动腔评价在生理血流条件下携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡(MBp)的靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建MBp;在3种浓度(10、100和1000 ng/ml)小鼠P-选择素Fc段(PSFc)包被的平行板流动腔和固定剪切应力下,以及大包被浓度和不同剪切应力(0.2～1.7 dyn/cm2)下分别检测MBp的每分钟结合数量(结合率),以抗小鼠P-选择素单抗封闭组和空白组为对照.在3种包被浓度下检测MBp达半数解离的剪切应力.所有分组样本数均为3.结果 两对照组均未见有明显的MBp结合.实验组MBp结合率随包被浓度的增高而增加(P<0.05),然而与剪切应力呈现双向性(P<0.05).MBp达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大(P<0.05).结论 MBp在生理条件下可与PSFc特异有效地结合,体外对靶向超声微泡的靶向黏附效能评价将有助于判定超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境条件.
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靶向超声造影微泡的制备及体外靶向性研究
目的 制备一种靶向超声造影微泡,并进行体外靶向黏附效能评价.方法 以磷脂为球壁材料,全氟丙烷为被包裹气体,采用高速剪切工艺制备氟碳脂质微泡,再应用生物素-亲和素桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向氟碳脂质微泡,并应用P-选择素Fc段包被的平行板流动腔评价其体外靶向黏附效能.结果 制备的靶向微泡呈圆整球形,粒度分布均匀,体外靶向黏附作用明显.结论 本试验工艺可成功制备靶向氟碳脂质超声造影微泡,平行板流动腔法有助于评价靶向微泡的靶向黏附效能.
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携Sialyl LewisX与携抗P-选择素单抗靶向超声微泡粘附性的对比研究
目的 对比评价携Sialyl LewisX与携抗P-选择素单抗靶向超声微泡粘附特性.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建携Sialyl LewisX(MB-S)、携抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-P)及携同型抗体微泡(MB-C).MB-S、MB-P及MB-C以相同流速通过相应小鼠P-选择素Fc段包被培养皿时,利用平行板流动腔在不同时间点测定相应的MB-S、MB-P及MB-C(对照组)的结合数目、滚动数目以及解离时达到半数解离的剪切应力.结果 MB-S结合数量前3 min快速增加,其后随时间增加无明显变化,而MB-P结合数量与时间呈正相关(P<0.05),且MB-S结合数目是MB-P的2～4倍;对照组MB-C未见明显结合(P<0.05).MB-S滚动数目大于MB-P(P<0.05);MB-S半数解离时剪切力小于MB-P(P<0.05).结论 靶向超声微泡MB-S表现为早期、快速、不稳定的结合及滚动,MB-P表现为缓慢牢固结合.
关键词： 超声检查 微气泡 靶向 平行板流动腔 P-选择素单克隆抗体 sialyl lewisx -
平行板流动腔法评价生物素化脂质微泡制备效果
目的 制备生物素化脂质微泡,并应用平行板流动腔检测流体切应力对生物素化脂质微泡与链亲和素结合稳定性的影响,为进一步开展超声分子成像研究奠定基础.方法 采用声振法制备出表面携有生物素分子的脂质微泡,与普通脂质微泡对照,应用平行板流动腔模型,设置不同流体剪切应力,观察与链亲和素靶向结合的生物素化微泡的黏附效果.结果 在不同浓度链亲和素包被的平行板流动腔中均见生物素化微泡结合;随着链亲和素包被浓度的提高,靶向结合的生物素化脂质微泡抗流体剪切应力能力明显提高.结论 应用平行板流动腔模型能成功检测生物素化微泡的靶向黏附效果,该模型可推广应用于其他靶向微泡制备成功后靶向黏附能力的体外检测.
