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160六价铬诱导P53蛋白活化的机制
本研究探讨了Cr(Ⅵ)诱导P53活化的机制.培养人肺上皮细胞系A549并进行传代.取3×105A549细胞转入一个6孔平皿,于37℃下温孵24h,立即转染1μg报告质粒和1μg β-半乳糖苷酶(β-Gal)质粒,温孵过夜后冲洗,加入含10%FBS的F-12K培养基,再培养24h后加入5、10、20、50和100μmol/L的Cr(Ⅵ)溶液处理(未经处理的为对照),然后加入400μl报道溶解缓冲液,在4℃下抽提细胞2h;取80μl细胞溶解产物测量虫荧光素酶和β-Gal活性,结果以β-Gal标化的相对P53活性(与对照相比)来表示.另取经Cr处理后的A549细胞,抽提细胞经声处理断裂DNA和减少粘度,然后取20μl全细胞溶解产物加热、离心,进行蛋白印迹分析(Westernblot).取细胞溶解产物、20μlRecin/TNT(1:10)和10μg抗体在4℃下温孵过夜并离心,取上清进行Western blot反应.
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诺氟沙星胶囊溶出度检查中溶剂选用的探讨
目的:对诺氟沙星胶囊的溶出度测定方法进行研究.方法:采用与中国药典2000年版不同配制方法的缓冲液,检查溶出度.结果:本法在3~7μg·ml-1测定范围内线性关系良好,平均回收率99.7%,RSD为0.4%.结论:该方法简便、准确.
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活化TSBT对家兔皮肤沾染神经性毒剂VX的消除
目的为了解皮肤沾染神经性素剂VX时,使用活化TSBT是否能达到减少皮肤对毒剂的吸收并减轻中毒程度,我们用活化TSBT对神经性毒剂VX进行了化学吸附率和兔皮肤染毒后的消除实验研究.方法化学吸附实验方法:取试管5只分别加入VX 10 mL(40mg/mL)无水乙醇溶液250mL),石油醚10 mL,活化TSBT lg磁力搅拌1min后,取醚层2mL置入50mL蒸馏水中,磁力搅拌1min,取水层5 mL置入具塞试管中,加入缓冲液5 mL,BTB试剂1 mL,上下颠倒20次,待分层后,弃上层蓝色液,用1 mL杯,420nm波长在721分光光度计比色,计算其吸附百分率.
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1-20 两种带色样品对SOS反应的影响
目的 SOS显色试验是一种通过显色测定大肠杆菌SOS反应强度的遗传毒性试验,遗传毒物可诱导大肠杆菌SOS反应.通过本实验可了解带色样品对SOS反应的影响.方法37℃活化培养大肠杆菌PQ37 8~10 h,转接培养2 h,加样品后培养2 h,加入B缓冲液300 μl,混匀,水浴5 min,加入显色剂一定时间后测定A420(吸光度)值,求出诱导比值,大于2.0时为阳性.结果 (见表1).结论带色样品对SOS显色试验结果影响较大,去除本底色也不能消除带色样品对结果的影响,但可通过离心减少带色样品对结果的影响.表1 带色样品对SOS反应的影响(-x±s)┏━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃┃二羟蒽醌(S9) ┃敌克松┃┃分组┃┃┃┃┣━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━┫┃┃不离心┃离心┃不离心减本底┃不离心┃离心┃不离心减本底┃┣━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 20mg ┃ 3.05±0.07 ┃2.13±0.62 ┃ 0.16±0.01 ┃ 5.37±0.01 ┃ 2.18士0.01 ┃ 0.72±0.01 ┃┃ 4mg ┃ 2.85±0.24 ┃ 2.15±0.01 ┃ 0.55±0.01 ┃ 4.28±0.01 ┃ 2.22±0.01 ┃ 0.70±0.01 ┃┃ 800μg ┃ 2.63±0.02 ┃ 2.44±0.01 ┃ 1.45±0.01 ┃ 2.43±0.0 ┃ 2.33±0.01 ┃ 0.49±0.01 ┃┃ 160 μg ┃ 2.64±0.01 ┃ 2.25±0.0 ┃ 2.22±0.01 ┃ 2.45±0.01 ┃ 3.04±0.01 ┃ 1.55±0.01 ┃┃ 33μg ┃ 2.55±0.07 ┃ 1.42±0.01 ┃ 1.80±0.01 ┃ 1.97±0.01 ┃ 1.77±0.01 ┃ 1.53±0.01 ┃┗━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛
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Abbott architect i2000SR故障检修
本文介绍了Architect i2000SR全自动免疫分析仪3例故障的处理方法及维修总结.
关键词: 雅培 I2000SR Reader shutter 缓冲液 温度传感器 -
Compact3血气分析仪故障处理
了解血气分析的工作原理,有助于帮助解决在应用上出现的一些简单的故障.熟习一些日常容易出现的故障,可以保证临床的使用效率.
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Array Protein蛋白测定系统故障分析两例
仪器原理:Array Protein系统是美国Beckman公司生产的速率散射法免疫测定系统,用于检测悬浮于缓冲液中的抗原、抗体免疫复合物颗粒,该机的试剂、样品的稀释、移液及分配均由计算机控制,并对测量结果处理后打印出来.
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巧用一次性注射器溶解利福平滴眼液
利福平滴眼液是一种眼科常用药品,用于治疗沙眼、结膜炎、角膜炎等.利福平滴眼液的规格由滴丸每丸含利福平10 mg,缓冲液10 mL组成.缓冲液包装于低密度聚乙烯药用滴眼剂瓶中,用时将滴丸放入缓冲液中,振摇,使完全溶解后,滴眼.
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离子强度缓冲液对氟化物测定的影响
应用氟电极、使用离子强度缓冲液测定氟化物,是水质分析中常用的方法,在日常检测中发现,离子强度缓冲液对氟化物的测定结果有直接影响.为此我们针对使用标准加入法测定氟化物离子强度缓冲液造成的影响进行了探讨.
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葵瓜子仁蛋白实验室提取条件探讨
目的:探讨葵瓜子仁蛋白的实验室提取条件.方法:选取8种不同条件(P1,P2,P3,P4,P5,P6,P7,P8)提取葵瓜子仁蛋白,采用Bradford法测定蛋白质纯度,应用双向电泳对提取条件进行分析,通过二维电泳图谱确定佳提取条件.结果:8种条件下提取的葵瓜子仁蛋白干粉质量57.43 ~63.59 mg,差异无统计学意义,但P3,P4,P7,P8提取的蛋白质纯度显著高于其他4种条件,双向电泳结果显示P4,P8条件下蛋白点多,分别为(196±11),(194 ±20)个,但P4条件下得到的蛋白点更清晰.佳提取条件为提取温度50℃,提取溶剂为去离子水,超声提取时间20 min.结论:P4条件下得到的蛋白质总量和种类多,为植物蛋白的蛋白组学研究提供参考.
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血清FT3固相放免法的建立
用葡萄球菌蛋白A(SPA)预先包被聚苯乙烯塑料试管,利用其结合IgG Fc段特性制备固相抗体作为分离剂,建立了血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)固相放免法,使分析过程更加简便、稳定。材料与方法 1 材料 1.1 SPA Sigma公司产品。 1.2 125I-FT3 中国原子能同位素公司产品,其试剂盒作为对照试剂盒。 1.3 FT3抗体、FT3标准品 潍坊3V诊断技术公司产品。 1.4 其它试剂 SPA包被液:50mmol/L、pH9.6碳酸盐缓冲液;抗体包被液:10mmol/L、pH8.4 PBS,含明胶0.5g/L,NaN3 0.5g/L; 温育液:50mmol/L、pH7.4 PB,含明胶0.5g/L,NaN3 0.5g/L。 1.5 聚苯乙烯试管 浙江黄岩五洲塑料制品厂产品。
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灌流液镁浓度对测定谷氨酸引起的培养神经细胞内钙浓度的影响
Mg2+对谷氨酸(glu)受体亚型N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体通道的阻断作用,早在80年代就已由电生理实验证实,此后通过荧光测定细胞内游离钙浓度[Ca2+]i 得到进一步证实.令人困惑的是,在研究glu对离体神经细胞作用的文献中, 所用缓冲液的Mg2+浓度却是0、0.6、0.9、1.3、2.4mmol/L不等.因此,我们在研究glu对培养神经细胞[Ca2+]i影响的工作中,首先须了解应如何确定细胞外缓冲液中Mg2+的浓度.
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EDTA缓冲液在原位杂交中的应用
蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
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初论免疫组化标准化(二)
2.2.2抗原修复液的选择加热抗原修复缓冲液有多种,如柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)、Tris(pH7~8)、EDTA(pH8.0)等,目前首选柠檬酸盐缓冲液(pH6.0),优点是染色背景清晰,适合于大多数抗体.Tris和EDTA两种修复液对部分抗原修复效果较强,但其染色背景同时加深,如使用不当易造成假阳性结果.
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免疫组化技术(八)
8 关于使用市售修复液产品的建议若使用便宜的"配制"液,那么可行的操作是在热循环的后阶段用冷流水冲洗热缓冲液;若使用昂贵的商品化液体,可借助手套将热的容器转移到一个有冷流水的槽中,并让溶液和玻片冷却10~15min后,将玻片迅速放入冷流水中,使贵重的修复液可以保留并可再次重复使用.
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cyclin D1单克隆抗体的抗原修复体会
cyclin D1是细胞周期关键因子,在多种人类肿瘤中过表达.有50%~70%的套细胞淋巴瘤表达该因子,是目前套细胞淋巴瘤的诊断和细胞周期研究中常用的抗体.由于该抗体敏感性较差,如何制出满足诊断需要的高质量切片,是免疫组化中的难题.我科进行cyclin D1的免疫组化发现:常规修复条件下的阳性率很低,并常出现胞质表达或核、浆共表达,给结果判定带来困难.为此我们尝试应用多种抗原暴露方法,均不理想.直到使用了EDTA-Tris混合并碱化至pH9.0的缓冲液高压锅修复方法后,才得到较为理想的阳性结果.现特将操作过程总结如下.
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免疫组化技术(七)
大多数家用微波炉就适用于抗原修复,调节到2.45 GHz,相当于在真空中的12.2 cm波长.一些研究人员使用微波炉后也有报道,出现了不均匀加热和"热斑"产物.然而,我们发现在一个合适型号耐微波的塑料容器中使用400~600 ml的缓冲液,可以将不均匀加热的问题降到小,同一批次的25张片在一个塑料染色架上能同时准确地被辐射,并且完成抗原修复.
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人巨细胞病毒与大肠癌相关关系的研究
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)与宫颈癌关系十分密切,但与大肠癌关系的报道较少。本文就HCMV感染及大肠癌p53基因与HCMV感染的相关性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集1994年~1996年白求恩医科大学中日联谊医院外科切除大肠癌组织共60例,存放于-80℃。均经病理证实,并结合临床进行了Dukes分期和组织分化程度分型。患者年龄在38~72岁之间,男42例,女18例。 1.2 DNA模板制备取-80C冻存组织约1 g,经组织研磨器研磨,加入1mlDNA裂解缓冲液置55℃ 1 h,95C 15mmin,经13 000 r/m min离心10 min,上清即为DNA模板。再0.8%~1%低电渗琼脂糖凝胶电泳,以排除降解的模板。
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超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究
按质粒所携带编码基因同源性的不同,将超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum β-lactamases,ESBLs)分为4类,即TEM型、SHV型、TEM/SHV混合型和非TEM/非SHV型(包括PER、TOHO、CTX-M、OXA型等)。本文报告绍兴地区产ESBLs细菌基因分型的初步结果。 临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ESBLs的细菌42株(其中大肠埃希菌26株,肺炎克雷伯菌16株)。用PCR进行酶基因分型。PCR扩增引物,根据TEM-1和SHV-1编码基因序列设计,TEM引物序列分别为:5′-TCGGGGAAATGTGCG-3′和5′-TGCTTAATCAGTGAGGCACC-3′;SHV引物为5′-TCGGCCTTCACTCAAGGATG-3′和5′-TCCCGCAGATAAATCACCA-3′。待测菌株用碱裂解法提取质粒DNA。PCR反应体积为100μl,含1×PCR反应缓冲液,3.5mmol/L Mg2+,200μmol/L dNTPs,500μmol/L引物,1.6U Taq酶(Promega),10~100ng质粒DNA模板。
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3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立
采用HSV1、HSV2和HCMV 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液,用冻融法、煮沸法、蛋白酶K法、NP40(乙基苯基聚乙二醇)法、综合法及改良通用法提取病毒DNA.综合法是将3种病毒细胞培养混合物各2ml,2500r/min离心10min,用2ml冷PBS缓冲液溶解沉淀,1200r/min离心5min,用1ml胰酶(0.25%)溶解沉淀,50℃保温18h,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25241),3000r/min离心10min,取水相加入1/2体积7.5mol/L的NH4(AC),2倍无水乙醇,-20℃放置30min,10000r/min离心10min,沉淀用70%乙醇洗涤,干燥,溶于50μl TE缓冲液.改良的通用法是在综合法基础上于提取前将病毒细胞液反复冻融3次,3000r/min离心40min纯化病毒;采用蛋白酶K(100μg/ml)38℃消化30min;4℃沉淀DNA时,18000r/ml离心20min;其余步骤同综合法.