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铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用
目的探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn-3a的表达和致凋亡作用.方法采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型,醋酸铅的染毒浓度分别为0.1、1、10、100、1000μmol/L,对照组给予等量培养液.染毒后24h及48h时MTT法测定各组细胞的存活率;免疫组织化学法测定Brn-3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的低浓度是10μmol/L,醋酸铅浓度越高,细胞存活率越低.1μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性细胞积分光密度显著下降(P<0.05),10μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性面积比的显著下降(P<0.01).1μmol/L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的低浓度,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应.结论铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的,并且铅导致培养海马神经细胞Brn-3a的表达下降很可能是铅诱导神经细胞凋亡的原因之一.
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灌流液镁浓度对测定谷氨酸引起的培养神经细胞内钙浓度的影响
Mg2+对谷氨酸(glu)受体亚型N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体通道的阻断作用,早在80年代就已由电生理实验证实,此后通过荧光测定细胞内游离钙浓度[Ca2+]i 得到进一步证实.令人困惑的是,在研究glu对离体神经细胞作用的文献中, 所用缓冲液的Mg2+浓度却是0、0.6、0.9、1.3、2.4mmol/L不等.因此,我们在研究glu对培养神经细胞[Ca2+]i影响的工作中,首先须了解应如何确定细胞外缓冲液中Mg2+的浓度.
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丁基苯酞对线粒体呼吸链复合酶活性的影响
目的:阐明正丁基苯酞(dl-3-n-butylphthalide, dl-NBP)改善缺血脑能量代谢的机制.方法:用分光光度法测定局灶性脑缺血大鼠脑线粒体呼吸链复合酶I,II,III和IV活性的改变,并观察dl-NBP对这些变化的影响.结果:缺血时复合酶II活性升高,IV的活性显著降低;再灌后, 复合酶I活性升高,II的活性降低.在缺血前10 min给予dl-NBP(5 mg.kg-1或10 mg.kg-1, ip)能逆转缺血-再灌引起的上述复合酶活性改变,尤其是使缺血后急剧降低的复合酶IV活性得到明显提高.同时NBP(d-,l-,dl-)还能逆转低糖低氧造成的原代培养大鼠皮质细胞呼吸链复合酶IV活性降低.结论:NBP能够改善缺血脑内能量状态是直接作用于脑线粒体的结果,而d-NBP起着主要作用.
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番茄红素对原代培养大鼠皮层神经细胞低糖无氧损伤的保护与线粒体作用分析
目的:考查番茄红素(lycopene)对原代培养大鼠皮层神经细胞低糖氧损伤的保护作用,并对其可能的线粒体作用进行分析.方法:原代培养大鼠皮层神经细胞于培养d7分为正常组、低糖无氧损伤组(95%N2/5% CO2饱和的低糖DMEM培养基)、番茄红素低、中、高剂量组(10+7,10-6和10-5 mol·L-1).番茄红素在低糖氧损伤的同时加入培养液.观察细胞坏死与凋亡、ATP水平、线粒体总量、线粒体膜电位及线粒体呼吸功能.结果:番茄红素能明显减少低糖氧损伤导致的神经细胞坏死与凋亡,提高细胞内ATP水平和线粒体总量,提高线粒体膜电位水平,并明显改善线粒体呼吸功能.结论:番茄红素对原代培养大鼠皮层神经细胞低糖氧损伤具有明显保护作用,这一作用与其保护和改善线粒体呼吸功能和能量代谢密切相关.
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天麻素对谷氨酸致培养皮层神经细胞损伤的保护作用
取新生大鼠大脑皮层进行体外神经细胞培养,用谷氨酸建立离体的神经元损害模型,观察天麻素对兴奋性氨基酸神经毒性的影响.结果表明:200μmol/L谷氨酸作用10min能造成培养神经元的大量死亡,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量明显增高;在培养液中加入天麻素或氯胺酮可明显降低神经细胞死亡率,减少乳酸脱氢酶的漏出.提示天麻素可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性.
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观察副肿瘤神经综合征患者抗神经抗体(抗Yo抗体)对培养胎鼠神经细胞的影响
目的 观察副肿瘤神经综合征(paraneoplastic neurological syndrome,PNS)患者血清抗神经抗体(抗Yo抗体)对培养胎鼠神经细胞的影响,探讨其免疫学的发病机制.方法 实验组PNS患者抗Yo抗体阳性血清IgG、对照组血清IgG,添加到由胎儿鼠脑分离出的培养神经细胞,观察细胞形态变化及细胞凋亡的有无.对照组血清IgG为①AB型健康人标准血清;②无神经损害症状的抗Yo抗体阴性癌症患者血清.结果 添加抗Yo抗体阳性IgG的培养神经细胞互相融合,出现粗而长的突起相连的形态变化;未发现凋亡的神经细胞;细胞的边缘被细胞黏附因子N-Cadherin染色.结论 PNS患者血清抗Yo抗体直接作用于胎鼠神经细胞,未发现神经细胞的凋亡,而发现了神经细胞黏附因子的表达,由此推论PNS免疫学发病机制,可能不是抗体与抗原直接作用的结果,而是在血清中存在着抗体以外的某种物质参与了免疫反应.
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氧化应激诱发大脑皮质神经元凋亡的体外实验研究
既往研究表明,神经细胞死亡容易坏死而较少发生凋亡,1994年,Ratan等培养神经细胞发现有大量神经元发生凋亡,但其凋亡机制尚不清楚.本实验采用氧化应激方法作用于原代培养的新生大鼠大脑皮质神经元,并进行凋亡指标的检测,以对其凋亡机制进行探讨.
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一氧化氮合酶抑制剂对体外培养神经细胞损伤作用的研究
一氧化氮(NO)作为一种新型信使,在正常生理条件下发挥有利作用,但是内源性或外源性NO的产生和过量释放则会直接导致神经毒性.研究表明,NO参与了缺血性脑血管疾病发生发展的诸多环节,但其详细机制并不明确.本实验在体外培养大鼠原代神经细胞的基础上,制成NO毒性模型和神经细胞缺血损伤模型,观察选择性诱导型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂氨基胍(AG)和非选择性NOS抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对体外培养神经细胞损伤作用,为治疗脑缺血疾病提供依据.
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链脲佐菌素诱导培养皮层神经细胞损伤作用的观察
目的 研究链脲佐茵素(STZ)对原代培养大鼠皮层神经元是否具有损伤作用.方法 常规原代神经细胞培养的方法,培养新生1 d~3 d的wistar大鼠皮层神经元,通过检测CCK-8,乳酸脱氢酶(LDH)释放检测和calccin-AM染色,观察加入不同浓度STZ(1 μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L、1 000μmol/L)36 h后对细胞损伤的作用.结果 STZ处理后对原代培养大鼠皮层神经细胞产生明显的损伤作用,包括细胞活力的下降,活细胞数目的 减少,LDH释放的增加并呈现剂量依赖性.结论 STZ对离体培养的神经细胞具有类似脑室注射同样的神经损伤作用.
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体外神经元培养中Aβ1~40诱导cyclin A的异常表达
阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病,以严重记忆减退和认知障碍为主要临床表现.AD主要病理表现是细胞外的老年斑形成,细胞内的神经纤维缠结的出现,以及神经细胞和突触数量的减少[1,2].近年来在探索AD发病机制和病理改变的过程中,发现AD病人脑内的神经元中出现细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin B1等)的异常表达,且异常表达的细胞周期相关蛋白可能与AD神经元的病理改变有关联[3~5].为此,我们在体外培养神经细胞时,加入Aβ1~40多肽片段,进行细胞周期相关蛋白和神经细胞损伤的分析[6].
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人胃神经细胞体外培养
体外培养神经细胞是研究神经电生理、药理、再生及移植等的重要手段,对相关领域科研发展起了重要促进作用,但目前体外培养神经细胞来源几乎全集中于脑、脊髓神经系统,取材种属也多为鼠类或鸡胚,来源于其他种属组织的鲜有报道.
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多肽PrP106-126对培养神经细胞朊蛋白基因表达的影响
神经细胞是传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies, TSEs)的重要靶细胞,PrP106-126是研究TSEs致病机理的理想工具,对PrP106-126作用的培养神经细胞模型进行研究,有利于了解朊蛋白的功能和探讨TSEs的分子致病机制.本研究利用PrP106-126构建了大脑皮质和小脑颗粒神经元作用模型,对神经细胞的存活和朊蛋白基因的表达进行了研究.结果表明:PrP106-126作用于培养神经细胞导致其存活率的显著下降;大脑皮质神经元经PrP 106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达的量明显下降,处理后的小脑颗粒神经元也有类似的情况出现,两者之间下降的幅度和时间不同.我们的研究结果为研究朊蛋白在TSEs发生中的作用和深入了解TSE的分子致病机制提供了基础数据.
关键词: PrP106-126 培养神经细胞 朊蛋白 基因表达 -
阿魏酸钠对培养神经细胞谷氨酸损伤的保护作用
目的研究当归有效成分阿魏酸钠对谷氨酸引起的离体培养神经细胞损伤的保护作用.方法运用体外原代胚胎大鼠皮层神经细胞培养技术建立神经细胞损伤的模型,采用台盼兰法测定细胞死亡率,细胞内LDH漏出率评价细胞损伤程度.观察阿魏酸钠对神经细胞死亡率和细胞内LDH漏出率的影响.结果阿魏酸钠可拮抗谷氨酸介导的神经细胞损伤,神经细胞死亡率明显降低,LDH漏出率减小.结论阿魏酸钠具有明显的抗缺血性脑损伤的作用.
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副肿瘤综合征抗Hu抗体对培养神经细胞的直接影响
目的研究副肿瘤综合征(PNS)自身抗体(抗Hu抗体)对培养神经细胞的直接影响.方法抗Hu抗体阳性PNS患者血清IgG、对照组血清IgG添加到由胎鼠脑分离出的培养神经细胞,观察有无细胞的凋亡.对照组血清IgG为:(1)AB型健康人标准血清;(2)无神经损害症状的抗Hu抗体阴性癌患者血清;(3)重组Hu蛋白吸附后的抗Hu抗体阳性患者血清.结果添加抗Hu抗体阳性PNS患者血清IgG的培养神经细胞互相融合,由粗而长的突起相互连接,而对照组未看到上述变化.各组均未发现凋亡的神经细胞.结论抗Hu抗体未能引起神经细胞的凋亡或死亡,推测是诱导了接触因子的表达促进了细胞的分化.