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苯并[a]芘、铅单独及联合作用对体外神经元存活率的影响及对DNA的损伤
目的 研究苯并[a]芘、铅单独及其联合作用对体外神经元毒性及胞核DNA的损伤. 方法取8日龄SD大鼠小脑粒细胞培养,按以下分组进行处理: ①空白对照组;②溶剂对照组(等量DMSO+S9-mix平行处理); ③低浓度铅染毒组(PbAc5μmol/L); ④高浓度铅染毒组(PbAc50μmol/L);⑤低浓度BaP染毒组(BaP5μmol/L+S9-mix); ⑥高浓度BaP染毒组(BaP50μmol/L+S9-mix);⑦低浓度铅+低浓度BaP联合染毒组;⑧低浓度铅+高浓度BaP联合染毒组;⑨高浓度铅+低浓度BaP联合染毒组;⑩高浓度铅+高浓度BaP联合染毒组.染毒90分钟,胰酶消化法收集标本,台盼蓝染色法检测存活率;单细胞凝胶电泳法检测胞核DNA的损伤.结果①两种浓度的BaP、铅单独或联合染毒均可降低细胞存活率(P<0.05,P<0.01).②高浓度BaP单独染毒组(第6组)、两种毒物联合染毒且其中1种或2种为高浓度组(第8、9、10组)与对照组相比胞核DNA损伤程度均有显著差异(P<0.01).结论①BaP、铅均有一定的体外神经毒性,二者联合作用可使毒性增强.②胞核DNA损伤可能是BaP引起体外神经毒性的机制之一.
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阿糖胞苷对原代培养的大鼠大脑皮层神经元的影响
阿糖胞苷(1-β-Darabinofuranosylcytosine,Ara-C)是治疗急性白血病常用的药物之一.Ara-C可诱导细胞凋亡[1].体外神经元的原代培养中,常在适当时间加入一定剂量的Ara-C作为细胞分裂抑制剂以抑制非神经元的增殖,从而提高神经元的产率.但Ara-C对正常培养的细胞的活性有一定的毒性,且随时间和剂量呈正相关.本实验进行体外大鼠大脑皮层神经元的原代培养,于培养细胞的不同时间加入Ara-C,并分不同的用药持续时间来测定其培养细胞的活性、存活率和神经元的产率,旨在优选在神经元的原代培养中加入Ara-C的佳时间和适用药持续时间.
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体外神经元培养中Aβ1~40诱导cyclin A的异常表达
阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病,以严重记忆减退和认知障碍为主要临床表现.AD主要病理表现是细胞外的老年斑形成,细胞内的神经纤维缠结的出现,以及神经细胞和突触数量的减少[1,2].近年来在探索AD发病机制和病理改变的过程中,发现AD病人脑内的神经元中出现细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin B1等)的异常表达,且异常表达的细胞周期相关蛋白可能与AD神经元的病理改变有关联[3~5].为此,我们在体外培养神经细胞时,加入Aβ1~40多肽片段,进行细胞周期相关蛋白和神经细胞损伤的分析[6].
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SD大鼠体外神经元培养的探讨
目的 在不同时间加入阿糖胞苷,并分别采用两种不同培养基对神经元进行体外培养,通过观察新生SD大鼠神经元细胞的生长情况和神经元纯度,建立更合理的神经元体外培养方法. 方法 采用出生24h以内的SD大鼠脑组织,采用传统的神经元体外培养方法,于不同时间加入阿糖胞苷,之后每48h半量换培养基一次,于10天后观察神经元细胞的生长情况.结果表明采用neurolbasal培养基,并与接种细胞后24h加入阿糖胞苷,可以获得更高纯度,更高活性的大脑皮质神经元.