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抗原修复液的种类、温度及作用时间对抗原修复的影响
抗原修复是免疫组化染色中的常用手段,但使用哪种修复液却有不同看法[1~4].为此本实验对抗原修复液中的离子种类、离子浓度、pH值、温度及作用时间分别做了实验,旨在探讨这些因素对抗原修复的影响.
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甲状腺转录因子TTF-1抗原修复方法的探讨
甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor-1,TTF-1)是NKX2转录因子家族成员之一,主要分布于甲状腺、间脑和呼吸道上皮,在胎盘形成过程中起提高转录活性的作用.TTF-1在正常和良性甲状腺组织中表达较多,而在甲状腺乳头状癌等恶性肿瘤中表达相对较少,在未分化癌中不表达,因此推测TTF-1可作甲状腺肿瘤分型和预后判断的一个指标.
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初论免疫组化标准化(二)
2.2.2抗原修复液的选择加热抗原修复缓冲液有多种,如柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)、Tris(pH7~8)、EDTA(pH8.0)等,目前首选柠檬酸盐缓冲液(pH6.0),优点是染色背景清晰,适合于大多数抗体.Tris和EDTA两种修复液对部分抗原修复效果较强,但其染色背景同时加深,如使用不当易造成假阳性结果.
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不同抗原修复液对乳腺癌冷冻组织Ki-67、ER免疫组化染色结果的影响
在临床工作中,由于病理诊断的需要,我们经常需要对冷冻组织进行固定并做免疫组化染色.然而由于多种因素的影响,冷冻组织的免疫组化结果相比常规固定组织往往不够理想,一定程度上影响了病理诊断的准确性.常规的免疫组化组织由于中性甲醛固定造成蛋白质交联,使得部分或大部分抗原决定簇被封闭,一般需要通过抗原修复才能使抗原表位重新暴露并与抗体有效结合,因此抗原修复成为免疫组化染色成功与否的重要环节[1].为此,本实验选用不同的抗原修复液,检测Ki-67、ER蛋白的表达情况,寻找适合的实验条件以改进冷冻组织的免疫组化染色效果以便更好的应用于临床病理诊断.
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脑星形细胞肿瘤中PTEN、血管内皮细胞生长因子表达与微血管密度
一、材料和方法1.材料:人星形细胞肿瘤标本43例(患者中男28,女15)取自南通医学院附属医院病理科1987~2000年存档的手术标本.患者年龄14~69岁,平均年龄40.4岁,按WHO胶质瘤分级标准,Ⅰ级3例(均为毛细胞型),Ⅱ级18例(原浆型14例,纤维型4例),Ⅲ级12例(肥胖型3例,间变型9例),Ⅳ级10例(为胶质母细胞瘤),均经病理诊断证实为星形细胞肿瘤.即用型兔抗人PTEN、第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)多抗和鼠抗人血管内皮细胞生长因子(VEGF)单抗,EDTA抗原修复液及SABC试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司.
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pH9.0 Tris-EDTA 和pH6.0 Citrate在抗原修复中的应用
甲醛是形态学和免疫组织化学的标准固定液.但是,经甲醛固定的组织常引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇的封闭.抗原决定簇是否充分暴露,是免疫组织化学成败的关键因素之一.抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色中是一种简单有效的增强方法,但目前尚没有单一的化学物质既能作为基本的修复液又能作为佳的抗原修复液,为了确定理想的修复液,我们采用"组合实验"的方法,比较了0.05 mol/L Tris +0.001 mol/L EDTA pH9.0(简称pH9.0 Tris-EDTA)和0.01 mol/L pH6.0 Citrate微波热修复及不修复的情况下,免疫组织化学染色的表达效果.
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pH9.0不同成分的抗原修复液对免疫组织化学染色结果的影响
抗原修复技术自Shi等[1]首次应用以来,现已常规应用于日常病理诊断或科研免疫组织化学中.由于种种原因,全自动封闭的免疫组织化学染色仪在国内外尚未普及.进行免疫组织化学检测时,许多实验室仍需人工进行组织前处理(包括脱蜡、抗原修复等).不同的实验室所采用的抗原修复方法及抗原修复液不尽相同,导致相同的抗体在不同的实验室检测效果存在明显的差异.我们用Dako EnVisionTM检测试剂盒测试抗体时发现,pH 9.0几种不同配方的抗原修复液对某些抗体表达效果存在差异,现就此情况作一介绍.
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固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响
目的:研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响.方法:取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织,分别用pH值3.0,5.0,7.0,8.0,10.0的缓冲福尔马林固定液固定. 选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3)为一抗, Evinsion二步法免疫组化染色.染色时分别用pH值6.0,7.0,8.0的抗原修复液或用市售pH值8.0的EDTA作微波抗原修复. 结果:不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化,本实验得知CK(AE1/AE3)、ER是以阳性细胞数目改变为主,SMA、EMA是以染色强度改变为主.结论:(1)使用10%中性或微碱性缓冲福尔马林固定液,固定效果佳.(2)本实验所用的4种组织,抗原修复液选择pH值7.0、8.0均优于pH值6.0,皮肤组织选择EDTA(pH值8.0),雌激素受体选择pH值8.0时染色效果佳.(3)固定液pH值>8.0容易造成背景染色,修复液>8.0影响切片附着,造成脱片.
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不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响
目的 针对不同的抗原修复液与时间对免疫组化所产生的影响进行探讨.方法 取出26例乳腺浸润性导管癌标本试样.其中的每例中附着4个时间点,这四个时间点组分别为:立即固定组,延迟12小时固定组,延迟24小时固定组和延迟48小时固定组.依次对所选取4块肿瘤组织,在肿块部位进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等相关操作,利用行HE染色方法验证试验中的肿瘤组织,再通过抗原修复液展开免疫组化验证实验.结果 CK7、ER和C-erbB-2在4组试样在不等的时间和不同的抗原修复液的乳癌组织间表现出了不同的效果,并且结果的差异可以从统计学角度进行分析.结论 在本实验中,所进行延迟固定的组织,在通过充分固定和进行选取抗原修复液A[高温高压EDTA(pH9.0)缓冲液修复)]、抗原修复液B[高温高压EDTA(pH8.0)缓冲液修复]、抗原修复液C[高温高压柠檬酸盐(pH6.0)缓冲液修复]和抗原修复液D[微波炉EDTA(pH9.0)缓冲液修复法]的前提下能够进行免疫组化检测,但需要注意的是尽量减少和避免延迟固定时间.
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基层医院抗原修复液的选择
免疫组织化学是利用抗原与抗体间的特异性结合原理而发展起来的一门技术. 而日常的甲醛固定等因素又使大部分的活检组织抗原失活. 在一定条件下,抗原可以在强酸或强碱中恢复[1].所以抗原修复中修复液的选择十分重要.但由于基层医院病理科技术员和场地的不足,使得无法配备专职的免疫组织化学技术员和建立专业正规的免疫组织化学实验室. 在抗原修复液的选择上也很难做到每一种抗原都做预实验筛选出佳修复液. 为此我科做了一系列对比实验,期望能对基层医院抗原修复液的选择有所帮助.
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新型脱蜡抗原修复液应用价值的探讨
目的:探讨新型脱蜡抗原修复液在免疫组织化学实验中的应用价值。方法选用乳腺癌较常应用的ER、PR、P53、Her-2免疫试剂盒,采用新型脱蜡抗原修复液与传统操作两种方法进行免疫组织化学实验,对比实验结果。结果新型脱蜡抗原修复液染色结果阳性率与传统操作无差异;Her-2不确定率低于传统操作。结论将组织切片脱蜡和抗原修复一次性完成具有操作简便、染色结果满意、避免二甲苯对人体造成伤害等优点,值得推广。
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一种新型脱蜡抗原修复液在免疫组织化学染色中的应用
目的 探讨将新型的石蜡切片脱蜡抗原修复液对免疫组织化学染色结果的影响.方法 使用新型的石蜡切片脱蜡抗原修复液替代传统的免疫组织化学操作,将适量20倍稀释的脱蜡抗原修复液用于乳腺癌组织石蜡切片标本雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表面生长因子受体-2(CerbB-2)表达的检测.结果 ER、PR、CerbB-2阳性定位准确.结论 将组织切片脱蜡和抗原修复一次性完成具有操作简便,避免二甲苯对人体造成伤害,且染色结果满意.
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免疫组织化学抗原修复液PBS与EDTA的比较
免疫组织化学也称免疫细胞化学,是用标记抗体寻找组织细胞抗原的方法,来检测细胞中化学成分的科学技术.由于免疫组织化学技术特异性强,敏感性高,操作简单,设备要求简单,且该技术在组织中定位性能好,因此,常常应用于临床病理诊断及科学研究.影响免疫组织化学技术的因素有许多,其中抗原修复技术是关键步骤.本研究比较抗原修复过程中修复液柠檬酸盐缓冲液与EDTA缓冲液的使用,旨在优化抗原修复过程.
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抗原修复液pH值对淋巴组织免疫组化染色的影响
目的:研究抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响.方法:选用CD3、CD5、CD10、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、CyclinD1、κ、γ为一抗,Elivision二步法免疫组化染色.染色时分别用pH5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0的抗原修复液作微波抗原修复.结果:不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化.结论:本实验选用淋巴组织,抗原修复液选择pH7.0,8.0柠檬酸盐缓冲液均优于其它pH值,其中pH8.0染色效果佳.修复液pH>8.0影响切片附着,造成脱片.
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高压抗原修复液的pH值对淋巴组织免疫组化染色的影响
目的 研究高压抗原修复液的pH值对淋巴组织免疫组化染色的影响.方法 运用高压的抗原修复方式,按修复液pH值的不同分为pH 6.0枸橼酸抗原修复组和pH8.0EDTA抗原修复组,对76例淋巴组织进行免疫组化染色,每例分别标记抗体CD3、CD20和CD5.结果 pH 6.0枸橼酸抗原修复组有9例阳性标记不明确,其中5例出现了细胞膜破损,67例符合诊断标准;pH8.0EDTA抗原修复组有60例阳性标记不明确,其中59例出现了细胞膜破损,仅有16例组织染色符合诊断标准,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 免疫组化染色中,使用pH 8.0 EDTA抗原修复液对淋巴组织进行高压修复,致使淋巴细胞胞膜破损,使用pH 6.0枸橼酸高压修复有助于避免这一现象.
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EDTA作为抗原修复液用于脑石蜡片NMDA-R2A免疫组织化学检测的方法与效果探讨
石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态,其中修复待检测物质的抗原性(抗原修复)是一个关键步骤.抗原修复的效果直接影响到终的染色结果.用pH值6.0的枸橼酸(柠檬酸)缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用广,是国内外绝大多数实验室的首选方法.该方法能有效修复大多数物质的抗原性,得到阳性强、结果美观的图像,重复性好,颇受广大实验工作者的欢迎.但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷:它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大.比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体,免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上[1].但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后,阳性结果分布于神经细胞的整个胞质(图1B);这与NMDA-R2A的实际分布有明显出入.由于细胞质阳性的图像比较美观,并且这种阳性的成因也有解释的余地,因此常常被实验人员误认为是正常的.我们尝试了其它一些修复方法,综合比较后认为乙二胺四乙酸(EDTA)溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液,并对其使用方法和效果探讨如下.
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大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究
应用ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶(Ch AT)免疫阳性神经元.材料与方法,成年大鼠10只,雌雄不限,体重150克左右,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉,经左心室0.9%Nacl灌洗,4%多聚甲醛300ml( pH7.2磷酸缓冲液),灌注固定.取心房后壁,后固定12hr,常规石蜡包埋,切片厚5μm,切片脱蜡至水,用SABC法免疫组织化学反应:切片于3%H2O210 min,D》W洗3次×2min,0.01M枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波修复(1 00℃)10min,冷却后抗原修复液10min,D》W洗3次×2min,ABB封闭1hr,D》W洗3次×2min,牛血清(1:50)30min,ChAT一抗(1 :2000)4℃18h,PBS洗3次×2min,生物素化绵羊IgG(1:1000 )37℃20min,PBS洗3次×2min,亲合素辣根过氧化物酶(1:200)3 7℃20min,PBS洗4×5min,DAB呈色(苏木素轻度复染).结果显示:在心房后壁心外膜下的心房肌层或/和心内神经节有ChAT阳性神经元.其形态多为椭圆形或圆形,中等大小,个别大于40μm,核大偏位.用牛血清和PBS分别代替ChAT一抗 ,结果均为阴性反应.讨论:在胆碱能神经的研究中,AChE一直作为一种重要的组织化学显示方法,但由于AChE显示胆碱能神经的特异性不强,因此,尽管用AchE显示心内神经节中胆碱能神经元的研究已有许多报道,但对这些AchE阳性神经元是否即是胆碱能神经元,至今尚存争议.而用胆碱乙酰转移酶(ChAT)显示胆碱能神经元在心内神经节的研究至今未见报道.业已证实ChAT只能在胞浆内合成,是神经递质ACh的标志酶 .本实验用免疫组织化学的方法,发现心内副交感神经节有ChAT阳性的神经元,表明该类型心内神经细胞存在胆碱乙酰转移酶,因此是合成ACh的神经元.本实验为研究心内胆碱能神经元提供了更为直接的证据.
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抗原修复方式及修复液pH值对免疫组化染色的影响
在做石蜡组织免疫组化时,多数切片需做抗原修复,修复方式常用的是热修复,抗原修复液多为pH 6.0枸橼酸盐缓冲液和pH 9.0 Tris-EDTA缓冲液,我们选用不同的热修复方式和常用的两种修复液进行比较,以观察它们对免疫组化染色结果的影响,希望能找到有效的、稳定的、相对统一的抗原修复方法.