首页 > 文献资料
-
前列腺癌MVD和DNA倍体值检测的临床意义
我们采用敏感性、特异性较高的CD34抗体作为检测肿瘤微 血管标志物,对30例病理证实的前列腺癌(Pca)标本进行了微血管密度(MVD)和DNA倍体值检 测,探讨其临床意义。报告如下。 材料与方法 30例前列腺癌患者,年龄54~91岁。其中行膀胱造瘘 活检+去势术16例,行前列腺切除术或根治性前列腺切除术14例。选取30例BPH开放手术标本 和 10例正常前列腺标本作为对照。所有标本均经病理证实。鼠抗人CD34抗体购自DAKO公 司,工作浓度1:60。 MVD检测采用免疫组化SP法。切片厚度4 μm,92 ℃~94 ℃微波修复抗原5 min,共2次,DA B显色。TBS代替一抗作为阴性对照。用已知肺癌阳性切片作阳性对照。CD34阳性染色 的微血管呈棕黄色至深棕色。按改进的Weinder法计数MVD,即在低倍镜下选5个MVD 多区域,随后在高倍镜下计数,取平均值。DNA染色采用Feulgen染色法。用真彩色病 理图像分析系统进行DNA含量测定,每例测定参照细胞50个, 分析细胞50个,校正因子1:1。统计学处理两样本比较采用t检验。
-
缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子与脑膜瘤血管生成、肿瘤恶性程度的关系
采用免疫组织化学二步法对48例脑膜瘤及9例瘤旁正常脑组织中的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达进行研究,以探讨脑膜瘤组织血管生成及其与临床预后的关系.一、材料与方法48例脑膜瘤组织取自华中科技大学同济医学院附属同济医院2000年2月至2004年5月手术切除标本,均经病理切片检查证实.男28例,女20例.年龄32~69岁.脑膜瘤组织分级按Kernohan分级,并结合WHO分类标准:Ⅰ级18例,Ⅱ级19例,Ⅲ级7例,Ⅳ级4例.9例瘤旁正常脑组织(远离肿瘤边缘>5cm)作为对照.标本经10%福尔马林固定,常规脱水包埋,切片.采用免疫组化二步法进行免疫组化染色试剂盒(Zymed公司,USA),实验步骤按说明书进行,HIF-1α单克隆抗体美国Novus公司产品,鼠抗人VEGF单抗为美国SantaGruz公司产品.二氨基联苯(DAB)显色,微波修复抗原,PBS代替一抗作阴性对照.应用SPSS11.0系统统计分析软件包进行数据处理.数值变量资料的比较采用单因素方差分析(ANOV),两两比较采用q检验,分类数据变量资料的比较采用卡方检验,相关分析采用Spearman及Pearson等级相关分析,等级分布趋势采用Ridit分析.
-
微波修复与否对eNOS免疫组化结果的影响
以往人们常用微波进行抗原修复后再进行免疫组织化学反应,[1,2].本实验采用免去微波修复抗原步骤,直接进行eNOS免疫组化反应,实验结果后者优于或等同于前者.
-
高压修复与微波修复在免疫组织化学中的应用比较
随着免疫组织化学检测在病理诊断中的应用和发展,免疫组化染色已成为现代病理诊断中不可缺少的检测技术,特别是在判断肿瘤组织的来源、分类以及良恶性肿瘤的鉴别诊断等方面起着重要的作用[1].
-
褪黑素受体亚型蛋白的免疫组化检测方法
1 方法介绍1.1 组织标本制备新鲜待检组织立即用4%多聚甲醇固定,常规脱水、透明、浸蜡,石蜡包埋组织,4℃冰箱贮存待检测.1.2 主要步骤将石蜡包埋组织作4 μm的连续切片,在37℃烘箱过夜.石蜡切片用二甲苯脱腊10 min×3,梯度乙醇洗2 min×3,3%过氧化氢溶液处理10 min,以阻断内源性过氧化物酶活性.蒸馏水洗2 min×3,0.01 mol/L,pH 6.0柠檬酸缓冲液微波修复抗原10 min,冷却后蒸馏水洗2 min×3,PBS洗2 min×3.每张切片加50 ml非免疫性动物血清温室孵育10 min,每张切片加50 ml 鼠抗人mt1和MT2受体亚型单克隆抗体(1∶75)置湿盒内4℃过夜,PBS洗2 min×3,每张切片加50 μl生物素标记的第二抗体温室孵育20 min,PBS洗2 min×3,切片加50 μl链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶溶液,温室孵育20 min ,PBS洗2 min×3,每张切片加新配制的液体二氨基联苯胺(DAB)显色5~10 min,流水冲洗,苏木精复染,中性树胶封片,以PBS代替第一抗体作为空白对照.
-
不同抗原修复方法在免疫组化染色的应用比较
目的 研究不同抗原修复方法 对食管癌中免疫组化染色结果 的影响.方法 选取Ki67、IL17、CD4和CDs四种分别定位于细胞核、细胞浆与细胞膜的不同抗原做为免疫组化染色的标记,在食管癌连续切片上应用高压抗原修复和微波抗原修复进行比较分析.结果 抗原高压修复的染色效果要优于微波修复.一方面,CD4抗原高压修复染色的阳性率要高于微波修复染色的阳性率;另一方面,CD8、Ki-67和IL-17高压修复染色的阳性率与微波修复染色的阳性率无显著性差异.结论 在组织不易脱片的情况下,优先考虑使用抗原高压修复;在微波修复与高压修复染色阳性率没有显著性差异的情况下,应该尽可能选择微波修复这种较柔和的方法 以避免组织脱片.
-
微波修复温度、时间对乳腺癌雌激素受体表达的影响
微波抗原修复已成为免疫组化染色中常用的一种抗原修复方法,我们用不同微波修复温度、时间观察对乳腺癌雌激素受体(ER)阳性检出率的影响,报告如下.1.材料与方法1.1 标本我院手术切除标本,病理诊断为乳腺癌的组织蜡块32例.每例选有代表性蜡块一个,4μm连续切片.1.2 试剂 ER单克隆抗体,S-P试剂盒,柠檬酸缓冲液,DAB显色剂.试剂均购自福州迈新生物技术开发公司.1.3 方法每例取两张切片分A、B两组.两组均常规脱蜡至水化,两组分别置于柠檬酸缓冲液中(PH值:6.0).A组:微波修复温度95℃,持续时间15分钟.B组:微波修复温度100℃,持续时间10分钟.A、B两组均室温自然冷却后,按常规S-P法免疫组化染色,DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片.1.4 统计学处理卡方检验.
-
不同修复方法对乳腺癌免疫组化染色结果的影响
目的:探讨检测乳腺癌ER、PR、ki-67、E-Cad的佳抗原修复方法.方法:微波抗原修复和高温高压加热抗原修复在相同pH值的缓冲液中对60例乳腺癌组织切片进行抗原修复,检测ER、PR、ki-67、E-Cad,显微镜观察结果.结果:高温高压抗原修复法在乳腺癌组织ER、PR、ki-67、E-Cad检测中阳性定位准确,着色强度增强,极大降低免疫组化背景着色.与微波抗原修复法比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:用高温高压对乳腺癌ER、PR、ki-67、E-Cad进行抗原热修复免疫组化染色效果佳.
-
EDTA作为抗原修复液用于脑石蜡片NMDA-R2A免疫组织化学检测的方法与效果探讨
石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态,其中修复待检测物质的抗原性(抗原修复)是一个关键步骤.抗原修复的效果直接影响到终的染色结果.用pH值6.0的枸橼酸(柠檬酸)缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用广,是国内外绝大多数实验室的首选方法.该方法能有效修复大多数物质的抗原性,得到阳性强、结果美观的图像,重复性好,颇受广大实验工作者的欢迎.但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷:它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大.比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体,免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上[1].但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后,阳性结果分布于神经细胞的整个胞质(图1B);这与NMDA-R2A的实际分布有明显出入.由于细胞质阳性的图像比较美观,并且这种阳性的成因也有解释的余地,因此常常被实验人员误认为是正常的.我们尝试了其它一些修复方法,综合比较后认为乙二胺四乙酸(EDTA)溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液,并对其使用方法和效果探讨如下.
-
大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究
应用ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶(Ch AT)免疫阳性神经元.材料与方法,成年大鼠10只,雌雄不限,体重150克左右,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉,经左心室0.9%Nacl灌洗,4%多聚甲醛300ml( pH7.2磷酸缓冲液),灌注固定.取心房后壁,后固定12hr,常规石蜡包埋,切片厚5μm,切片脱蜡至水,用SABC法免疫组织化学反应:切片于3%H2O210 min,D》W洗3次×2min,0.01M枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波修复(1 00℃)10min,冷却后抗原修复液10min,D》W洗3次×2min,ABB封闭1hr,D》W洗3次×2min,牛血清(1:50)30min,ChAT一抗(1 :2000)4℃18h,PBS洗3次×2min,生物素化绵羊IgG(1:1000 )37℃20min,PBS洗3次×2min,亲合素辣根过氧化物酶(1:200)3 7℃20min,PBS洗4×5min,DAB呈色(苏木素轻度复染).结果显示:在心房后壁心外膜下的心房肌层或/和心内神经节有ChAT阳性神经元.其形态多为椭圆形或圆形,中等大小,个别大于40μm,核大偏位.用牛血清和PBS分别代替ChAT一抗 ,结果均为阴性反应.讨论:在胆碱能神经的研究中,AChE一直作为一种重要的组织化学显示方法,但由于AChE显示胆碱能神经的特异性不强,因此,尽管用AchE显示心内神经节中胆碱能神经元的研究已有许多报道,但对这些AchE阳性神经元是否即是胆碱能神经元,至今尚存争议.而用胆碱乙酰转移酶(ChAT)显示胆碱能神经元在心内神经节的研究至今未见报道.业已证实ChAT只能在胞浆内合成,是神经递质ACh的标志酶 .本实验用免疫组织化学的方法,发现心内副交感神经节有ChAT阳性的神经元,表明该类型心内神经细胞存在胆碱乙酰转移酶,因此是合成ACh的神经元.本实验为研究心内胆碱能神经元提供了更为直接的证据.
-
微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用
微波修复法多用于石蜡切片,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中,实行改良,将微波抗原修复法用于冰冻切片,取得了满意的效果,方法如:1.常规固定取脑组织冰冻切片.2.漂洗后3%H2 O2封闭10分钟,蒸馏水洗2分钟3次.3.微波抗原修复:入柠檬酸盐缓冲液(PH6. 0),用微波或电炉加热,循环3次后入1%BSA孵育15分钟.4.入一抗30分钟,转入二抗 20分钟,三抗20分钟,显色.结果讨论:1.与对照切片成比,阳性细胞染色增强,背景变浅,阳性检出率提高.由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛,醛基与蛋白质中的氨基交联,使抗原决定簇被掩盖,影响了免疫组化染色结果,使背景染色较深,阳性检出率较低.且这种作用随固定时间的增长而加重,用微波修复抗原的方法,可以使抗原决定簇暴露,有利于抗体结合.此外,部分因固定而被损伤的抗原决定簇也得到修复,因此能提高抗原的阳性检出率,增加染色强度,降低背景的非特异性染色.2.染色时间大大缩短.以往为保证染色效果,常规一抗孵育时间较长(12-24小时),而用微波修复后仅需 30分钟.因为微波修复法可使抗原暴露,利于抗原抗体结合,提高了反应速度,节省了时间 .综上所述,在冰冻切片中使用微波抗原修复的方法值得推广.