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中药863对大鼠D-氨基半乳糖肝损伤保护作用的定量组织化学研究
药863是我们以清热利湿解毒为主,辅以舒肝健脾,活血化瘀为治则,结合现代科学对保肝中药的研究成果而组成的方剂.为判定该方剂的保肝作用并探讨其作用机理,本实验用国产D-氨基半乳糖做成肝炎动物模型,用组织学和组织化学方法观察和分析了所用方剂对D-氨基半乳糖肝损伤的保护作用,并用图象分析仪和Micro-videomat对组织化学染色结果进行了原位定量分析,以期获得可靠的生物参数依据.
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免疫组织化学质量控制(一)
为了促进免疫组织化学实验室的标准化,检测免疫组织化学染色结果的可靠性,每次染色时都应该进行有效的质量控制.免疫组织化学质量控制是指,采取不断优化的措施和技术制定实验室制度及常规工作,规范和完善实验室的免疫组织化学染色操作流程与步骤,保证免疫组织化学染色质量达到佳结果,并可以做出准确的诊断.
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免疫组织化学标准化(二)
1.3 免疫组化染色1.3.1内源性过氧化物酶的灭活在免疫组化染色中若采用过氧化物酶检测系统,必须进行内源性过氧化物酶处理,如果不进行处理,组织中的红细胞、粒细胞着色可能会干扰染色结果的判断.
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pH9.0不同成分的抗原修复液对免疫组织化学染色结果的影响
抗原修复技术自Shi等[1]首次应用以来,现已常规应用于日常病理诊断或科研免疫组织化学中.由于种种原因,全自动封闭的免疫组织化学染色仪在国内外尚未普及.进行免疫组织化学检测时,许多实验室仍需人工进行组织前处理(包括脱蜡、抗原修复等).不同的实验室所采用的抗原修复方法及抗原修复液不尽相同,导致相同的抗体在不同的实验室检测效果存在明显的差异.我们用Dako EnVisionTM检测试剂盒测试抗体时发现,pH 9.0几种不同配方的抗原修复液对某些抗体表达效果存在差异,现就此情况作一介绍.
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细胞色素氧化酶与琥珀酸脱氢酶双重染色在线粒体肌病诊断中的应用
细胞色素氧化酶( cytochrome oxidase, COX)与琥珀酸脱氢酶( succinate dehydrogenase, SDH)均为细胞有氧代谢的重要酶,二者均定位于线粒体内膜,是线粒体的标志酶。文献记载有Seligman、Moog、Butcher等多种方法显示组织切片的COX,我们选用Seligman的二氨基联苯胺法( DAB)法检测COX[1],并做一定的配方改良,阳性结果呈棕黄色;常用Nachlas法或Pearson法显示SDH,我们采用Nachlas硝基盐四唑法显示SDH[2],阳性结果呈紫蓝色颗粒。我们将两种显示不同酶的方法在同一张切片上进行染色,对于临床诊断倾向线粒体肌病的病例有着非常重要的意义。阳性的染色结果色彩对比鲜明、定位准确,便于观察与诊断,值得推广应用。
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血管组织自发荧光的去除方法及应用
血管组织尤其是动脉(如主动脉、颈总动脉、肾动脉等)具有丰富的弹性纤维与胶原纤维,后两者有很强的自发荧光,在荧光显微镜下根本不能区分特异荧光与组织自身的自发荧光,显著干扰荧光染色结果的观察,这限制了免疫荧光技术、绿色荧光蛋白((WP)等荧光报告基因载体在心血管组织的应用[1].
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RHS 自控微波技术在组织制片中的应用
为了缩短病理活检组织的制片时间,而不影响组织蜡块和制片质量,能达到100个组织块标本短时间出片的目的,我科2003年引进RHS自控微波组织处理系统.该系统技术的特点是通过电脑微积分集合软件(PID)有效地控制微波发射功率,利用红外线感应器监控温度,采用标准化的标本制作容器,配合独特的JFC组织脱水溶液或选用国产溶液异丙醇代替.在程序上做到脱水、透明同步进行.我们对各种类型的组织共1 848例进行了创新条件和简化程序制作方法上的试验,并将新方法制作的组织蜡块及切片、染色结果与传统的常规石蜡制作方法作比较,通过镜下观察新、旧两种方法对组织结构和细胞形态的影响,探讨了自控微波技术对组织制片效果的影响(固定、脱水、浸蜡、染色)及应用范围的广泛性和重复性.现将方法和技术特点介绍如下.
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不同的抗原修复条件对免疫组织化学染色结果的影响
抗原是指能刺激机体产生抗体,并能与抗体相结合的物质.物质所具有的这种特性称为抗原性,它主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定[1].但是部分组织经甲醛固定、石蜡包埋后,部分甚至全部抗原决定簇被封闭,影响免疫组织化学的标记效果,误导诊断.因此,不少的研究者纷纷采用不同的方法去暴露被封闭的抗原决定簇.笔者比较了30种常用的抗体在9种不同的抗原修复条件中的表达情况,以探讨各种不同的抗体佳的修复方法和佳的修复条件.
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HER2银染色原位杂交结果与前处理条件的相关性
HER2基因扩增和/或HER2蛋白过表达是判断乳腺癌患者预后的重要风险评估因子,同时也是判断曲妥珠单抗靶向治疗是否适用的重要依据。评价HER2状态的方法有免疫组织化学染色法( IHC)、荧光原位杂交( FISH)、显色原位杂交(CISH)及银染原位杂交(SISH)。 SISH法在亮视野下观察切片,切片可长期保存,观察结果与FISH结果的符合率高达90%~99%[1-5]。2013年美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院(ASCO/CAP)乳腺癌HER2检测指南及中国乳腺癌HER2检测指南(2014版)相应增加了亮视野原位杂交的检测及判读指南等内容[6-7],使得HER2 SISH检测技术逐步走向规范化、标准化。为了更顺利的开展HER2 SISH的检测,提高检测的成功率,我们分析不同前处理条件对HER2 SISH染色结果的影响。
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常规HE染色不同染色系统的评分分析
近年来,随着科技的发展,我国常规病理诊断中HE染色技术得到不断的改良,滴染式染色方法的出现对传统浸染模式提出挑战,与此同时,对于步骤繁琐的浸染程序进行精简的改良浸染模式也应运而生。我们从染色结果、染色均一性及有无交叉污染等方面,探讨3种染色体系的差异。
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Ki-67检测结果与乳腺癌临床病理指标的相关性分析
Ki-67已成为预测乳腺癌患者治疗反应以及预后的重要生物学标志物[1],其检测一般采用免疫组织化学方法,但是目前尚无统一的操作指南对乳腺癌Ki-67免疫组织化学检测进行规范[2]。我们采用组织芯片和计算机图像分析技术分析、评价各因素对Ki-67染色结果的影响,建立了乳腺癌Ki-67标准化免疫组织化学检测流程,并通过与乳腺癌分子分型等临床病理参数的相关性分析进一步验证其临床应用的有效性,为乳腺癌Ki-67规范化检测提供依据。
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乳腺癌雌孕激素受体及HER2免疫组织化学检测的质量控制
雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2免疫组织化学检测是准确进行乳腺癌个体化治疗的前提和依据,但免疫组织化学的染色结果受诸多因素干扰,严重影响乳腺癌患者的个体化治疗方案的准确制定与实施[1-2].如何把控乳腺癌ER、PR及HER2免疫组织化学的染色质量,本文谈谈我们的具体做法.
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全国性免疫组织化学质量控制活动介绍
免疫组织化学(IHC)是一个多步骤、多因素决定的实验方法,由于各实验室采用的组织处理、染色方法、抗体来源和抗体克隆号的不同,染色结果有时会出现较大差异,不合格的染色片时有出现,至今相当比例的实验室对其标准化尚欠足够重视,不合格的染色结果影响着病理医生做出正确的病理诊断,因此IHC染色结果的可靠性受到了极大的关注.在英国、北欧和美国相继开展了IHC质量控制(简称质控)工作,建立了一套比较完善的质控方法和程序.
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北京市第一次免疫组织化学评估活动介绍及总结
免疫组织化学(IHC)已成为病理诊断中不可缺少的辅助手段.质量好的IHC切片可以帮助病理医生做出正确的判断,是诊断的重要参考依据;相反,质量差的,假阳性或假阴性的染色结果会使病理医生产生困惑,甚至误导而做出错误的诊断.IHC制片过程受多种因素的影响,因此IHC的标准化及质量控制是当前亟待解决的问题.为此,在中华医学会病理学分会及北京市医学会病理专业委员会的指导和帮助下,北京病理技术学组决定对临床诊断工作中常用的几十种抗体进行摸底评估.目的是了解目前北京市IHC染色状况,发现其中存在的问题;指导IHC技术工作;寻找不同抗体的佳操作方法;为IHC标准化及质量控制提供参考依据.
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创伤性骨关节炎的物理康复治疗
骨关节炎( Osteoarthritis,OA)是世界范围内常见的关节疾病,是以关节软骨的变性、及骨质增生为特征的慢性关节病。我们前期的工作已证实关节机械加载可以抑制OA小鼠的MMP-13等相关分子的表达,但是关节加载对OA软骨作用尚不清楚。本实验用C57 BL/6雌性小鼠30只,随机分为假手术组、创伤性模型组、机械加载治疗组。验证关节机械加载可以减轻关节软骨损伤,并促进病变软骨的修复。通过切断前交叉韧带、内侧副韧带及切除内侧半月板,制备右膝关节创伤性骨关节炎的小鼠模型。右侧膝关节机械加载(1N,5Hz,5min/d)2周,取右侧膝关节经脱水、包埋、切片后,特异性组织学染色进行组织形态学观察与分析。采用OARSI评分评估关节软骨的病理过程,以及加载治疗的疗效。番红O染色结果显示:与假手术组相比,创伤性模型组的关节软骨不连续甚至剥落,OARSI评分显著增高(P<0.001),表明创伤性骨关节炎模型构建成功。而关节加载明显减轻软骨的退行性病变程度,显著降低OARSI评分( P<0.001)。 H&E染色结果显示:与创伤性模型组相比,机械加载治疗组钙化软骨与软骨全层比值显著减小(P<0.001),软骨下骨板的厚度显著增加(P<0.001)。番红O染色结果显示:与创伤性模型组相比,经加载治疗后的小鼠关节软骨下骨的骨小梁体积分数显著增加(P<0.001)。另外,TRAP染色结果显示:关节加载能够显著减少OA小鼠中关节软骨下骨中的阳性破骨细胞的数目。本研究表明关节机械加载可以有效减缓骨关节炎病理学进程,促进软骨修复。关节机械加载可以作为创伤性骨关节炎的有效物理康复治疗手段。
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动脉粥样硬化模型小鼠心脏中 Movat染色技术的应用
目的::ApoE基因敲除小鼠为目前研究动脉粥样硬化的常用模型之一,其在高脂饲养下可加速形成主动脉粥样硬化斑块。动脉粥样硬化的病灶成分有平滑肌细胞、泡沫细胞、胆固醇结晶、胶原纤维、弹力纤维和蛋白聚糖。 Movat染色技术可以在一张切片上直观显示出这几种成分的病理变化,规范和细化的实验操作步骤可以保证染色结果的一致性,为动脉粥样硬化的深入研究提供清晰可靠的实验依据,从而更客观的评估实验结果。方法:ApoE基因敲除小鼠,雄性70只随机分为8组:ApoE空白组,阳性对照药组,治疗药物A高、中、低剂量组,治疗药物B高、中、低剂量组,以及6只C57小鼠对照组。高脂饲养26周后,采血后处死。取心脏,石蜡包埋后进行定位切片。分批进行染色,染色过程中摸索和细化了染液配置、染色温度、染色时间等条件,规范实验操作。成片后进行组织病理学观察,并对胶原纤维、弹力纤维、蛋白聚糖、泡沫细胞等进行定性和定量分析。结果:通过试验建立了细化、规范化的Movat染色操作流程。光镜下观察染色结果可见各结构成分着色分明:胶原纤维和弹力纤维分别为黄色和黑色,蛋白聚糖呈绿色,泡沫细胞呈淡紫色,心肌平滑肌呈红色。主动脉粥样硬化斑块病灶部位结构清晰,病理表现为血管平滑肌增生,胶原纤维、平滑肌细胞和蛋白聚糖形成纤维帽,纤维帽下泡沫细胞形成并向下延伸,脂质大量沉积,弹力纤维断裂。与空白组和阳性对照组相比,治疗药物A和B均对病症的严重程度和病程进展有一定的治疗效果。结论:在本实验中对Movat染色的染液配置、染色时间、染色温度等进行细化和调整,为实验操作流程的规范化提供依据。在保证了实验统一性的基础上,可客观评估药物对动脉粥样硬化的治疗效果,同时因粥样斑块各结构成分颜色分明,利于镜下成像鉴别,可对各成分进行定量统计分析,为实验结果提供了可靠的实验数据。
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糖尿病性乳腺病超声表现一例
患者女,56岁,健康体检发现右乳腺肿物6 d就诊,既往有1型糖尿病(病史16年)及甲状腺机能减退等病史,确诊为糖尿病后即长期自行注射胰岛素治疗,剂量不稳定,血糖控制不佳,平素血糖11~19 mmol/L、尿糖(+++)或(++++),合并视网膜病变和肾病病史5年。住院期间每日注射诺和灵,剂量为早18 U,中10 U,晚22 U。查体:于右乳外下方可触及一肿物6 cm×6 cm,表面欠光滑,质韧,边界不清,活动度差,无触痛,双侧锁骨上下及腋下均未触及肿大淋巴结。超声检查示:右乳头外侧7点处见一2.3 cm×5.7 cm×6.3 cm低回声病灶,形态不规则、边界不清晰,内部回声不均匀,无后方声影(图1),双锁骨上下及双腋下未探及肿大淋巴结;彩色多普勒血流成像未显示明显血流信号(图2)。实验室检查:尿糖(++++),餐后2小时血糖17.33 mmol/L。X线检查示:右乳外下象限非对称性密度增高区,未见明确肿块边界,未见钙化。术中快速冰冻切片病理诊断为浆细胞性乳腺炎。术后病理诊断:右乳腺硬化性淋巴细胞性小叶炎。免疫组化染色结果:CD20(+)、CD792(+)、CD45RO(+)、ViwPntin(+)、Actin(+)。临床诊断:糖尿病性乳腺病。
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第10例超声检查发现肝右叶占位性病变--穿刺活检病理结果
超声造影结果考虑为恶性,行超声引导下经腹壁肝右叶肿块穿刺活检(图3).病理诊断:腺泡细胞癌(图4).免疫组化染色结果:CK8/18(+),AE3(+)(图5),结合临床考虑来自肝脏胰腺异位基础上发生癌变.
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肛管直肠原发性恶性黑色素瘤临床病理特点
目的:探讨肛管直肠原发性恶性黑色素瘤的临床病理学特征及其鉴别诊断.方法:对2例发生在肛管直肠的恶性黑色素瘤进行光镜观察,应用SP法做免疫组化染色.结果:2例均为女性,年龄分别50岁和54岁,病程分别6 mo和12 mo,肿瘤位于齿状线附近及其以下,呈息肉样和蕈样.光镜下,瘤细胞大小不同、形态多样,组织结构复杂,未找见黑素颗粒.免疫组化染色结果:HMB45、S-100蛋白阳性,CK、EMA、Desmin阴性.结论:肛管直肠原发性恶性黑色素瘤罕见,病理学诊断困难.HMB45、S-100蛋白表达在病理诊断中具有重要作用.
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胰腺癌组织中血管内皮细胞生长因子、微血管密度的表达及其意义
我们应用免疫组织化学S-P法研究胰腺癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达及其意义。 1.材料与方法:收集胰腺癌标本42例,男性29例,女性13例,平均年龄(55.4±12.0)岁。所有标本均经10%甲醛溶液固定、石蜡包埋,常规连续切片。切片厚度4 μm,分别作HE、免疫组织化学染色。病理组织学类型:高分化腺癌22例、低分化腺癌20例。按Bloom等方法进行组织学分级,其中Ⅰ级15例、Ⅱ级17例、Ⅲ级10例。 结果判断:(1)VEGF:染色结果以细胞浆出现棕红色颗粒为判断标准。按染色强度分级为:阴性(-),所有肿瘤细胞无显色;弱阳性(+):胞浆内出现浅棕红色、细颗粒为主;强阳性(++):阳性物质为深棕红色,粗颗粒为主。(2)MVD:血管内皮细胞被染成棕红色或见到棕红色颗粒。以背景明显有别的任何一个棕红色的内皮细胞或细胞丛结构作为一个血管;只要结构不连续,分支结构也可作为一个血管。