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3T MRI基础与临床第七讲脑部成像(三)
34脑部:瘤形成--介绍为了评价脑瘤形成的过程,同许多其它领域如解剖学和病理学一样,在采用3T时我们将面对的是:将提高的SNR用于提高空间分辨率还是用于降低扫描时间的两难抉择.临床上所采用的扫描方案常常是这两种极端条件的折中方案.对患有或怀疑患有脑部肿瘤性疾病的患者而言,不经意的运动常常会给扫描质量造成问题.请此类患者保持静止是指,对于平面内分辨率在0.5×0.5 mm2以下切片厚度为5毫米的扫描,在5分钟的扫描过程中患者的动作幅度不能超过半毫米,这根本不切实际.一种合理的折中方法就是采用3~5毫米的切片厚度,平面内分辨率大于0.5×0.5 mm2,因为3TFSE T2加权成像很稳定,这样就可以在1~2分钟内完成扫描.除了进行如内耳道检查或垂体检查等特殊检查之外,采用3T系统进行的5分钟T2加权扫描时提高空间分辨率不会再为我们增加任何重要的临床信息,因为被检查的疾病进程本身相对于像素分辨率而言通常偏大.
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不同处理参数对丹参干制效率及活性成分含量的影响
目的:研究不同根径及切片厚度对丹参干制效率及有效成分含量的影响.方法:对不同根径、不同厚度的丹参进行干制,利用HPLC测定不同干制条件下丹参中有效成分的含量,脂溶性成分的色谱条件为流动相乙腈-0.2%乙酸水溶液,检测波长270 nm;水溶性成分的色谱条件为流动相乙腈-0.2%甲酸水溶液,检测波长286 nm.结果:同一直径的丹参,切片厚度越小干制效率越高.在水溶性成分中,当迷迭香酸含量高时,丹参根径0.3 ~0.4 cm,切片厚度0.2~0.3 cm;当丹酚酸B含量高时,丹参根径处于0.4~0.5 cm,切片厚度0.2~0.3 cm.在脂溶性成分中,当二氢丹参酮含量高时,丹参根径0.4~0.5 cm,切片厚度0.1 ~0.2 cm;当隐丹参酮含量高时,丹参根径0.3 ~0.4 cm,切片厚度0.1~0.2 cm;当丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量高时,丹参根径0.4~0.5 cm,切面厚度0.2~0.3 cm.结论:选用直径0.4~0.5 cm和切片厚度0.2~0.3 cm的丹参切片进行干制,能大程度地保证药材品质,为丹参饮片的批量生产和干制工艺的优化提供了理论依据.
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石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞DNA的影响
在肿瘤研究中,应用流式细胞仪技术分析肿瘤细胞的DNA含量及周期细胞群体数目,已成为肿瘤临床诊断、疗效评价及预后推测的重要参考依据[1,2].DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,在激发光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测并分析这些荧光强度,从而了解细胞群体中各周期的分布状况,即G0/G1期、S期、G2/M细胞所占的百分比例.
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厚、薄组织切片上细胞核体积测量结果的比较
目的:研究组织切片厚度对细胞核体积测量结果的影响.方法:收集鼻咽癌归档病例42例,每个病例包括正常鼻咽上皮组织和3个癌巢或肿瘤区域,制成4μm、8μm连续组织切片各一张.使用TIGER细胞图像分析仪分别测量4μm、8 μm连续鼻咽癌组织切片上正常鼻咽上皮细胞核与肿瘤细胞核的体积.结果:8μm组织切片上测得的细胞核体积明显大于4 μm组织切片上测得的,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:组织切片厚度影响细胞图像分析仪测量细胞核体积的结果;采用图像分析仪测量细胞核内化学成分的含量应以完整细胞核为单位.
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乳腺癌细胞核DNA含量不同分析方法的比较
目的:比较组织原位分析乳腺癌细胞核DNA含量的不同方法.方法:收集30例乳腺癌标本的归档蜡块,4μm和相邻8μm切片各一张,Feulgen染色,采用TIGER细胞图像分析仪测量每个癌巢的以单个完整细胞核体积为单位计算的DNA指数和以细胞核切面面积为单位计算的DNA指数,它们均以同一病例正常上皮细胞核作内参照.结果:(1)同一病例的VIOD分布直方图比IOD更集中;(2)30例标本的90个样本中,以VIOD为单位所测得的DI值比以IOD为单位测得的DI值高.结论:使用细胞图像分析仪对组织切片内细胞核DNA含量进行定量分析时,应以单个完整细胞核体积的DNA含量为单位,计算DI值.
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高温烤片对石蜡切片黏附、厚度与染色的影响
目的 笔者实验室近发现,高温烤片可有效解决甲基丙烯酸树脂包埋的组织切片的脱片问题,本文拟进一步研究确定高温烤片对石蜡包埋切片黏附、厚度及染色的影响.方法 大鼠肾脏石蜡切片(切片机设定的切片厚度10 μm)脱蜡后经90℃、140℃热板烤片30 min处理,然后用过碘酸-席夫试剂和苏木精染色,观察脱片情况、切片厚度及染色效果.大鼠脊髓石蜡切片(14μm厚)同样处理后分别进行小胶质细胞和突触素颗粒的免疫组化染色.结果 与对照(未烤片)相比,90℃或140℃烤片都有效防止了肾脏石蜡切片从载玻片上脱落,但染色后的实际切片厚度减少了约50%(与设定切片厚度相比),染色变浅,结构清晰度欠佳(90℃烤片后),甚至有细胞消失(140℃烤片后);90℃烤片后免疫阳性小胶质细胞或突触素颗粒减少,非特异性染色加深,140℃烤片后几乎未见免疫阳性结构.结论 高温烤片防脱片的方法可能不适用于石蜡切片.
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不同器官石蜡包埋切片的切片压缩对比研究
目的 比较研究不同器官石蜡包埋切片的切片压缩.方法 从一成年雄性SD大鼠的肺、心、肝、睾丸和脊髓腰膨大各切取3个长、宽、高均约为2 mm的组织块,石蜡包埋后从每个组织块切取5 ~40 μm厚(切片机设定厚度)的切片各3张进行苏木精染色,然后利用体视学图像系统的指针测微计测量每张切片染色后的实际厚度,以后一厚度(实际厚度)与前一厚度(切片设定厚度)之比作为切片压缩系数.结果与结论 不同器官的平均压缩系数分别为84.4%(肺)、81.4%(心脏)、80.6%(肝脏)、77.9%(睾丸)和72.2%(脊髓),不同器官间有显著性差异.
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Stereo Investigator 8.0 对C57BL/6J小鼠脑切片厚度测量的信度研究
目的 应用Stereo Investigator 8.0测量小鼠脑切片厚度的信度研究.方法 雄性4 mC57BL/6J小鼠14只,随机分40 μm、60 μm组,制备脑冰冻切片.应用Stereo Investigator 8.0系统测量切片厚度,测量分为单人重复测量、3人测量;分析测量的一致性.结果 40 μm组单人重复测量一致性好,3人测量一致性存在轻度可疑;60 μm组单人重复测量和3人分别测量一致性均好.结论 应用Stereo Investigator 8.0体视学系统,单人重复测量40 μm及60μm冰冻切片染色后厚度结果一致稳定;不同人测量一致性略显不足.
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石蜡包埋组织自动和手动切片对切片厚度的影响
目的 观察手动与自动两种切片方法和组织种类对实测切片厚度的影响.方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝、胰腺、胃及肺4种组织,各组织单独包埋制成蜡块.预设电动切片机的切片厚度刻度值为3、5、7、10 μm,分别作自动和手动两种方法切片,所获得的薄组织片经二次包埋、切片、HE染色,TIGER图像分析仪测量切片的实际厚度.结果 组织切片实测厚度受自动和手动两种切片方法的影响,切片机的切片厚度预设值低估了石蜡包埋组织切片的真实厚度,自动和手动实测切片厚度分别比切片机预设切片厚度要厚29%~50%和48%~91%.结论 自动切片与手动切片的切片厚度相差25%,二者相对误差为61%,自动切片获得的组织切片的厚度精度较高,优于手动切片.
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胰腺癌组织中血管内皮细胞生长因子、微血管密度的表达及其意义
我们应用免疫组织化学S-P法研究胰腺癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达及其意义。 1.材料与方法:收集胰腺癌标本42例,男性29例,女性13例,平均年龄(55.4±12.0)岁。所有标本均经10%甲醛溶液固定、石蜡包埋,常规连续切片。切片厚度4 μm,分别作HE、免疫组织化学染色。病理组织学类型:高分化腺癌22例、低分化腺癌20例。按Bloom等方法进行组织学分级,其中Ⅰ级15例、Ⅱ级17例、Ⅲ级10例。 结果判断:(1)VEGF:染色结果以细胞浆出现棕红色颗粒为判断标准。按染色强度分级为:阴性(-),所有肿瘤细胞无显色;弱阳性(+):胞浆内出现浅棕红色、细颗粒为主;强阳性(++):阳性物质为深棕红色,粗颗粒为主。(2)MVD:血管内皮细胞被染成棕红色或见到棕红色颗粒。以背景明显有别的任何一个棕红色的内皮细胞或细胞丛结构作为一个血管;只要结构不连续,分支结构也可作为一个血管。
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前列腺癌MVD和DNA倍体值检测的临床意义
我们采用敏感性、特异性较高的CD34抗体作为检测肿瘤微 血管标志物,对30例病理证实的前列腺癌(Pca)标本进行了微血管密度(MVD)和DNA倍体值检 测,探讨其临床意义。报告如下。 材料与方法 30例前列腺癌患者,年龄54~91岁。其中行膀胱造瘘 活检+去势术16例,行前列腺切除术或根治性前列腺切除术14例。选取30例BPH开放手术标本 和 10例正常前列腺标本作为对照。所有标本均经病理证实。鼠抗人CD34抗体购自DAKO公 司,工作浓度1:60。 MVD检测采用免疫组化SP法。切片厚度4 μm,92 ℃~94 ℃微波修复抗原5 min,共2次,DA B显色。TBS代替一抗作为阴性对照。用已知肺癌阳性切片作阳性对照。CD34阳性染色 的微血管呈棕黄色至深棕色。按改进的Weinder法计数MVD,即在低倍镜下选5个MVD 多区域,随后在高倍镜下计数,取平均值。DNA染色采用Feulgen染色法。用真彩色病 理图像分析系统进行DNA含量测定,每例测定参照细胞50个, 分析细胞50个,校正因子1:1。统计学处理两样本比较采用t检验。
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卡介苗细胞壁骨架与白细胞介素2膀胱灌注对肿瘤细胞凋亡的影响
卡介苗细胞壁骨架(BCG-CWS)及白细胞介素2(IL-2)用于膀胱癌治疗的历史很短[1]。本研究通过检测BCG-CWS+IL-2膀胱灌注后膀胱癌细胞凋亡的变化,探讨该治疗对膀胱癌的作用及机理。 1.材料和方法:33例膀胱癌患者在医院接受手术治疗,年龄平均56岁。术前留取肿瘤标本。之后于术前6~9 d用BCG-CWS 5 mg加500*!000 U IL-2膀胱灌注,隔天1次,共2次。手术时再留取肿瘤标本。所有标本统一采用10%的甲醛溶液固定,石蜡包埋,组织切片厚度为5 μm。
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戈壁沙漠地区驻军阑尾炎3 849例
1957年12月~2002年8月,我们共收治驻戈壁沙漠地区部队官兵阑尾炎3 849例,均行阑尾切除,全部标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,切片厚度4~5 μm,HE 染色,光镜观察,其中少数病例做了嗜银染色、网织纤维染色及黏液染色等特殊染色.目的在于了解戈壁沙漠地区驻军官兵阑尾炎的病理特点,为戈壁沙漠地区驻军阑尾炎的诊治提供参考.
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改良冷配 Schiff 染液在肾穿刺活检病理检查中的应用
肾活检穿刺术是在彩超引导下经皮肾脏组织穿刺,以了解肾脏组织形态学改变,为临床医生判断病情、治疗疾病和估计预后方面提供了重要的依据,肾脏病理检查结果已经成为肾脏疾病诊断的重要方法之一。过碘酸-雪夫氏(Periodic Acid-Schiff stain, PAS)染色是肾穿刺活检术中重要的染色方法之一,主要检测肾脏组织中糖元和其它多糖物质,显示肾小球系膜区的范围和基膜的厚度、肾小球内某些渗出性蛋白、节段性硬化和结节性病灶等[1]。Schiff 液是PAS 染色的主要试剂成分,由于肾脏病理切片厚度为1-2μm,较其他常规切片组织薄,着色相对困难, Schiff 液存放时间稍久,其与肾脏组织糖类物质着色能力下降,给临床诊断造成一定的困难。为此笔者从2010年起,经历了1134例肾穿刺组织染色的摸索,改良了 Schiff 染液的配方,并将该配方与国内传统配方的染色效果进行对比,认为改良冷配 Schiff 染液法有更好的应用效果,不仅缩短 PAS 染色时间,同时也保证肾脏组织糖类物质有效表达,满足肾脏组织中糖类物质定性和定量检测的需要。
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影响透射电镜生物样品超薄切片效果因素分析
由于电镜技术的不断发展,样品制备技术的不断改进,制备切片厚度在50nm以下的超薄切片已成为透射电镜生物样品制备的常规制样技术.但是如何制得高质量的超薄切片,得到清晰的高反差电镜图像,客观存在很多因素影响,比如超薄切片机性能好坏、玻璃切片刀是否锋利、组织包埋块硬度怎样、操作者技术经验等等.笔者根据几年的切片经验就上述影响超薄切片的几个因素作简略分析如下.
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1152例北方汉族儿童原发性肾小球疾病组织学分型特点分析
为了解儿童原发性肾小球疾病的病理组织类型特点,我们将1152例儿童肾活检资料总结如下。 临床资料 全部病例均系我院1983年1月~1997年12月间收治的患儿。在此期间我们共做肾活检1382次,其中资料完整、明确诊断为肾小球疾病者1361例。在1361例中原发性肾小球肾炎(PGN)1152例(84.6%)。男性810例,女性342例,男∶女=2∶1。平均年龄9.8岁±4岁(4岁~17岁)。肾活检应用B超指导下的抽吸式负压穿刺法。所有病例肾活检获得的肾组织标本含肾小球10个以上。均经光镜及免疫荧光检查。光镜:穿刺所得肾组织石蜡包埋,切片厚度为2μm,分别以HE、PAS、PASM及Masson染色。免疫荧光:采用异硫氰荧光素标记的羊抗人IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q及FRA,用直接免疫荧光法。病理分型参照WHO(1982年及1995年)肾小球疾病组织学分型方案。 结果:①1152例儿童原发性肾小球疾病的组织学分型:在1152例儿童中常见的病理类型是系膜增生性肾炎(34.6%),依次是微小病变和轻微病变(17.8%)、IgM肾病(12.9%)、IgA肾病(12.4%)、毛细血管内增生性肾炎(11.3%)、膜性肾病(6.6%)等。②原发性肾小球疾病的性别、年龄分布见表1。
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肾穿刺活检石蜡切片厚度对淀粉样蛋白刚果红染色的影响
在肾穿刺活检实验中,应用淀粉样蛋白刚果红染色已成为诊断淀粉样变性肾病的重要参考依据[1]。淀粉样蛋白沉积物在HE染色中呈嗜伊红的均质、无结构的团块状沉积物,刚果红染色呈砖红色,将其置于偏光显微镜下观察,淀粉样蛋白沉积物呈苹果绿色的双折光性[2]。本组采用石蜡包埋组织切片进行淀粉样蛋白染色时,发现染色结果与切片厚度有一定的相关性。本文着重探讨应用刚果红染色淀粉样蛋白切片厚度对染色结果的影响,为进一步分析肾穿刺活检制片提供参考。
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3μm厚切片在乳腺癌HER-2扩增检测中的可行性探讨
乳腺癌HER-2基因扩增是曲妥珠单抗赫赛汀(Herceptin)靶向治疗和辅助治疗的重要参考指标[1-2] ,能有效延长患者的生存期,降低复发率[3].
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茯苓切片厚度需改进
茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核,性甘、淡、平.利水渗湿,健脾宁心,治疗脾虚食少、便溏泄泻、心悸不安、惊悸失眠,是临床配方常用药之一.其主要有效成分茯苓含β-茯苓聚糖、茯苓酸等.工作中,笔者发现茯苓具有一定的不亲水性,含茯苓的复方中药煎剂.煎毕后,药渣中部分茯苓片尚残留没有煮透的干心,这说明茯苓的生药成分不能有效地煎出,必然影响药效.
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切片厚度对何首乌干燥过程的影响
目的:探讨不同切片厚度对何首乌干燥过程的影响.方法:将何首乌分别切成2、5、8 mm的块,分别置45、55、65、75℃恒温条件下进行干燥实验,对干燥曲线进行模型拟合,以RMSE、R2和x2作为判断模型拟合优劣的标准;根据薄层干燥理论计算干燥过程的动力学参数.结果:当切片厚度较厚或干燥温度较高时,何首乌的干燥过程可分为第1降速和第2降速2个阶段,Aghbashlo模型能较好描述何首乌干燥过程;切片厚度对何首乌的干燥过程的有效水分扩散系数影响较大,但对活化能无影响.结论:应用薄层干燥理论可以较好地揭示何首乌干燥过程中水分的变化规律,从而为何首乌药材干燥过程的质量控制提供实验依据.