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骨髓彩色图像分析系统的应用及评价
随着血液病患者的增加,医院骨髓检查手写报告面临着前所未有的新挑战,为了解决这一难题,我院血液科骨髓实验室引进骨髓彩色图像分析系统应用于临床.本文对骨髓彩色图像分析系统的应用做详细的论述,并对其功能和特色给予评价.
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2.3前列腺素E2合酶和环氧合酶-2与反流性食管炎的关系研究
目的检测反流性食管炎组织中mPGES和COX-2的表达,探讨二者在食管炎组织中的作用.方法39例经临床和内镜确诊的反流性食管炎患者病变处活检组织及20例正常对照组的食管活检组织,应用鼠抗人COX-2单克隆抗体及兔抗人mPGES多克隆抗体进行免疫组化染色,采用北航计算机图像分析系统作半定量分析.
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应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性
目的 探讨应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性.方法 选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片,Feulgen染色和天青蓝染色,TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的DNA含量与倍体.结果 涂片内肝细胞核分布均匀,轮廓清晰;Feulgen染色法中肝细胞核呈紫红色,天青蓝染色法呈蓝色;作为参比的Feulgen染色涂片中不同倍体间IOD的比值比天青蓝染色标本更接近倍体数的比值,其CV值也低于天青蓝染色法.结论 小鼠肝细胞涂片可应用于评估显示DNA染色方法的可靠性.
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针刺足三里穴对大鼠冷应激性溃疡下丘脑NOS表达的影响
目的:本实验采用冷应激的方法,研究针刺足三里穴对急性胃溃疡的保护作用,以及应激大鼠下丘脑与应激有关的NOS的表达情况.方法:应用胃黏膜溃疡指数的计算和RT-PCR的方法研究针刺足三里对大鼠的冷应激性溃疡的保护和下丘脑-氧化氮合成酶(NOS)的表达情况,经图像分析系统照相并进行半定量.结果:针刺足三里穴可以明显减少冷应激造成的溃疡指数(正常对照组为0,单纯应激组为26.25±4.40,针刺预防溃疡组为9.75±1.91,针刺预防溃疡组与单纯应激组相比P<0.01).下丘脑NOS1不参与冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可以在生理范围内上调下丘脑的NOS1的表达过程(正常对照组为0.69±0.05,单纯应激组为0.77±0.09,针刺预防应激组为1.87±0.1 5,针刺预防应激组与正常对照组相比P<0.01);下丘脑NOS2参与了冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可以下调其表达(正常对照组为0.06±0.02,单纯应激组为0.24±0.05,针刺预防应激组为0.12±0.06,P<0.01),减少病理损害程度;NOS3也参与了冷应激溃疡这一病理过程,针刺可以下调其表达作用(正常对照组为0.30±0.08,单纯应激组为0.63±0.14,针刺预防应激组为0.45±0.14,针刺预防应激组与单纯应激组与正常对照组相比P<0.05,单纯应激组与正常对照组相比P<0.001).结论:针刺对冷应激溃疡具有保护作用,该种保护作用是通过对生理性上调NOS1的生理性表达,下调NOS2、NOS3的病理性表达而实现的.
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实验性肝硬化大鼠小肠血红素氧合酶的表达
目的:观察血红素氧合酶在肝硬化大鼠小肠组织中的表达.方法:建立大鼠四氯化碳肝硬化模型,采用免疫组化法显示血红素氧合酶异构酶HO-1、HO-2在肝硬化实验组与正常对照组大鼠小肠组织中的表达,应用图像分析系统对免疫组化的结果进行定量分析.结果:肝硬化实验组大鼠的门静脉压力较正常对照组显著增高(2.609±0.144及0.916±0.034,f=39.37,P<0.01),而平均动脉压降低则低于正常对照组(13.411±1.208及17.423±1.472,f=7.297,P<0.05).肝硬化实验组大鼠小肠黏膜下层的小动脉及小静脉、肌层、浆膜层,甚至黏膜腺体内HO-1的表达均较强,而正常对照组中的表达则较弱(0.4 813±0.1 223及0.3 762±0.0 689,f=19.022,P<0.01).HO-2在两组大鼠的小肠组织中差异无统计学意义(0.4834±0.0997及0.4813±0.1 056,t=0.595,P>0.05).并且,肝硬化实验组小肠HO-1的表达与门静脉压力呈正相关,而与外周动脉压呈负相关.结论:肝硬化大鼠小肠组织中HO-1的表达增高,可能参与了肝硬化门静脉高压性肠病的发生.
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大黄素对大鼠结肠环行平滑肌细胞[Ca2+]i的影响
目的:观测大黄素对Wistar大鼠结肠环行平滑肌细胞胞质游离钙水平([Ca2+]i)的影响,并探讨机制.方法:酶解法分离结肠环行平滑肌细胞,分别采用图像分析系统和激光扫描共聚焦显微镜观测细胞长度和[Ca2+]i的变化.结果:大黄素可收缩大鼠结肠环行平滑肌细胞,也可浓度依赖性升高[Ca2+]i;大黄素作用后,[Ca2+]i迅速升高达到峰值([Ca2+]iPeak),而后下降至平台期([Ca2+]iSustain,仍高于静息值).Nifedipine对大黄素的钙动员作用没有明显影响,EGTA明显降低[Ca2+]iSustain.Heparine几乎完全抑制[Ca2+]iPeak,Ryanodine明显抑制[Ca2+]iPeak.结论:大黄素通过升高[Ca2+]i收缩结肠环行平滑肌细胞.大黄素升高[Ca2+]i的机制为:活化IP3受体释放细胞内钙,进一步以CICR方式促进RYR受体开放,共同作用升高[Ca2+]i,细胞外钙内流参与平台期[Ca2+]i的升高.
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慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白4蛋白表达的关系
目的:从水液代谢来研究慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与AQP4表达的关系.方法:慢性浅表性胃炎患者32例,其中脾胃湿热证20例,脾气虚证12例;另10例正常人为对照.胃镜下取胃体上部黏膜,观察黏膜炎症情况,免疫组化法、图像分析系统半定量AQP4的蛋白表达量.结果:脾胃湿热证胃黏膜的炎症明显要重于脾虚证和正常人组(中重度比17/20 vs 6/12,0/10,P<0.05,P<0.01);脾胃湿热证AQP4蛋白表达量强于脾虚证组(209±59 vs127±61,P<0.01)和正常人组(vs 164±32,P<0.05);脾虚证蛋白表达量低于正常人组,但两组无显著性差异(127±6l vs 164±32,P>0.05).结论:AQP与水液代谢密切相关,AQP的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一.
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灯盏花注射液对大鼠低氧性肺动脉高压作用的实验研究
低氧性肺动脉高压对肺心病的发生发展起着十分重要的作用,因此降低肺动脉高压是该病防治的关键环节,我们将有关灯盏花注射液对低氧性肺动脉高压大鼠影响的实验结果报告如下。 材料与方法雄性SD大鼠30只(温州医学院动物实验中心提供),随机分为3组,每组10只:①对照组:常压常氧下常规饲养;②低氧组:将动物置于自制常压低氧箱内,控制箱内氧浓度为(10.0±0.5)%,二氧化碳浓度<1.5%,箱内以无水氯化钙吸收水蒸气,钠石灰吸收CO2,每天低氧10 h,每周6 d,共4周。每日于低氧前腹腔内注射1 ml生理盐水;③灯盏花组:每日低氧前腹腔内注射1次4 ml/kg灯盏花注射液(云南生物制药厂提供,批号980803,含总黄酮4.5mg/ml),低氧方法同低氧组。4周后,用导管法测定平均肺动脉压(mPAP)、平均颈总动脉压(mCAP),分离右心室(RV)、左心室加室间隔(LV+S),滤纸吸干水分后分别称重,并计算两者的比值[RV/(LV+S)]。各组右下肺取材,常规脱水,10%甲醛固定,石蜡包埋,弹力纤维染色。选取断面较完整的外径为100~200 μm的肺细小动脉,应用上海申腾信息技术有限公司、华东理工大学和上海医科大学联合研制的IMS细胞图像分析系统(产品标准号:Q/IAFP01—1997),采用华东理工大学自动化研究所研制的心胸血管分析软件进行测量,获得平均肺细小动脉中膜厚度(mMTPA)以及其占血管外径的比值(MT%),计算肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)和管腔面积/管总面积(EA/TA)。将剩余肺组织制成10%的匀浆,采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒,测定匀浆一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。蛋白定量采用考马斯亮蓝法。采取颈总动脉血,用硝酸还原酶法测定血浆NO含量,试剂盒购自伊利康生物技术有限公司。数据用(±s)表示,组间比较采用非配对t检验。
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胰腺癌血管生成特征对肿瘤血供的影响
肿瘤内新生血管生成在恶性实体瘤的发生、发展和转移中起重要作用,它既是一个多种因子调控的复杂过程,又影响肿瘤的血供.既往的血管生成研究显示胰腺癌组织中微血管密度升高,但介入放射学检查显示胰腺癌却表现为乏血管肿瘤.为进一步研究胰腺癌的血管生成特征,我们应用免疫组化方法并利用计算机图像分析系统(IAS)测定组织中微血管密度(MVD)和总血管面积(TVA),探讨血管生成特征对肿瘤血供的影响及临床意义.
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前列腺癌MVD和DNA倍体值检测的临床意义
我们采用敏感性、特异性较高的CD34抗体作为检测肿瘤微 血管标志物,对30例病理证实的前列腺癌(Pca)标本进行了微血管密度(MVD)和DNA倍体值检 测,探讨其临床意义。报告如下。 材料与方法 30例前列腺癌患者,年龄54~91岁。其中行膀胱造瘘 活检+去势术16例,行前列腺切除术或根治性前列腺切除术14例。选取30例BPH开放手术标本 和 10例正常前列腺标本作为对照。所有标本均经病理证实。鼠抗人CD34抗体购自DAKO公 司,工作浓度1:60。 MVD检测采用免疫组化SP法。切片厚度4 μm,92 ℃~94 ℃微波修复抗原5 min,共2次,DA B显色。TBS代替一抗作为阴性对照。用已知肺癌阳性切片作阳性对照。CD34阳性染色 的微血管呈棕黄色至深棕色。按改进的Weinder法计数MVD,即在低倍镜下选5个MVD 多区域,随后在高倍镜下计数,取平均值。DNA染色采用Feulgen染色法。用真彩色病 理图像分析系统进行DNA含量测定,每例测定参照细胞50个, 分析细胞50个,校正因子1:1。统计学处理两样本比较采用t检验。
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米非司酮对早期妊娠妇女绒毛组织中波形蛋白基因表达的影响
波形蛋白是一种细胞骨架蛋白[1],它在维持细胞和细胞器的形态、参与细胞间的信号传导、基因表达和细胞分化发育等方面发挥重要作用[2,3].为了解波形蛋白在早期妊娠妇女绒毛组织中的表达情况及米非司酮对其表达的影响,我们采用间接免疫荧光法、免疫组化、胶体金标记、免疫电镜技术,结合Leica-Qwin计算机图像分析系统,定位和检测早期妊娠妇女绒毛组织中波形蛋白的表达情况,并比较米非司酮作用前后的变化,旨在探讨米非司酮抗早孕的机理.
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β淀粉样蛋白致PC12细胞毒性的自由基机制
本实验采用体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察β淀粉样蛋白Aβ25~35作用后细胞中自由基含量的变化,以及抗自由基药物的作用,并探讨自由基机制在培养的PC12细胞死亡中的意义以及抗自由基药物过氧化氢酶(catalase,CAT)的保护作用.方法和结果:将Aβ25~35或CAT加入培养的PC12细胞,24 h后通过MTT法[溴化-3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑]检测细胞活性,判断Aβ的毒性作用和CAT的保护作用;用激光共聚焦显微镜、KS400图像分析系统及荧光分光光度计直接检测以H2O2为主的自由基的生成.结果显示加药后24 h应用MTT法观察不同浓度Aβ(0.1~40 μmol/L)的毒性作用,发现随着Aβ 25~35浓度的增加,细胞活性下降,IC50大约为20 μm.而应用不同浓度的CAT(100、300、500 U/ml)可以拮抗20 μm Aβ 25~35的毒性,且随着CAT浓度的增加,其保护作用增强.用激光共聚焦显微镜拍照,Aβ组的细胞荧光强度明显高于对照组.用KS400图象分析系统,随机选取若干视野(3~5),检测单个细胞的荧光强度,与选定荧光小球作对比结果显示,Aβ组的细胞平均灰度为21.9±10.7(n=35),对照组细胞平均灰度为6.3±4.2(n=20),而CAT(300 U/ml)组则为13.4±5.5(n=24).Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).用荧光分光光度计检测各组的相对荧光强度(%,对照组),结果显示,Aβ组为1.8±0.2(n=6),而CAT(500 U/ml)组0.9±0.4(n=6),t检验示Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).
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良恶性脑膜瘤T淋巴细胞Ag-NORs表达活性的研究
一、材料和方法12例健康人为自愿献血,32例脑膜瘤患者为2000年8月~11月间本院神经外科收住病例依据病理诊断和WHO1993年分类标准,其中良性脑膜瘤16例,恶性脑膜瘤16例.均在无菌条件下取静脉血0.5ml,加到rDNA培养瓶中,进行培养、制片、印染和图片分析(2).主要仪器:KL型肿瘤免疫图像分析系统,北京健而康医疗设备有限公司产品.主要试剂:RPMI-1640培养液GIBCO产品;银染液(5%硝酸银)、固定液及其配套试剂由开隆仪器公司提供.统计学方法:采用SAS6.12统计软件包,进行检验F和q检验.
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血管性痴呆症与单纯性脑梗死患者脑体积比较
为进一步验证血管性痴呆症与脑萎缩之间的关系,我们于1996~1999年利用计算机图像分析系统,对血管性痴呆症和单纯脑梗死患者脑CT片的不同层面、不同部位相对面积进行了测量,并由此推断、比较两病患者不同部位的脑体积变化,结果发现,血管性痴呆症与脑体积大小并无直接关系.
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基因芯片技术及其在体育科研中的应用展望
基因芯片是指应用原位合成或微量点样等方法,将大量cDNA片段、肽核苷酸或寡核苷酸探针有序地固化于支持物(如玻璃片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机等特定仪器对杂交信号的强度扫描分析,从而获得大量的基因序列或表达信息[1].基因芯片的突出特点在于高度并行性、多样性、微型化和自动化.高度的并行性不仅可以大大提高实验的进程,并且有利于基因芯片技术所展示图谱的快速对照和阅读;多样性是指单个芯片中可以进行样品的多方面分析,从而提高分析的精确性,避免因不同的实验条件产生的误差;微型化是当前芯片发展的趋势,其优势是减少试剂用量和减少反应体积,从而提高样品浓度和反应速率.高度自动化可以降低制造芯片的成本和保证芯片的制造质量不易波动.另外,与计算机相连的图像分析系统使研究结果更客观、准确.同时由于生物信息学的迅速发展,为基因芯片的研究提供了物质基础[2].目前,该技术已应用于基因表达分析、新基因发现、基因突变及多态性分析、基因组文库作图、疾病诊断和预测、药物筛选、基因测序、个体化医疗等.此技术为"后基因组计划"时期基因功能的研究及现代医学科学及医学诊断学的发展提供了强有力的工具[1,3].
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高分辨率DNA细胞图像分析仪可提高肺癌痰细胞阳性检出率
目的 用新型取痰方式、液基薄层制片、DNA倍体分析系统提高肺癌痰细胞学检查的敏感性.方法 46例CT怀疑肺癌病例的痰液标本进行传统涂片和液基薄层制片,做常规细胞学检查,比较两种制片方法的敏感性.另76例肺癌术前患者穿咳痰背心取痰,做3~4张液基薄层玻片,1~2张玻片作巴氏染色行常规细胞学检查.另1~2张玻片Feulgen染色做DNA倍体图像分析.结果 液基薄层制片常规细胞学检查可以提高肺癌痰细胞学检查18%的阳性率;DNA图像分析系统比常规细胞学检查可增加24%肺癌阳性敏感性;与直接咳痰相比,穿咳痰背心诱导咳痰、液基薄层制片、DNA定量检测可以提高19%的肺癌阳性检出率.结论 应用咳痰背心诱导咳痰、液基薄层制片、DNA倍体分析系统可以提高肺癌痰细胞阳性检出率.
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小儿复杂型先心病三维超声心动图诊断方法研究
1.主要内容:本项目在国家自然科学基金,上海市科委启明星计划,市教委"曙光计划"等资助下,于1997年7月~2001年10月运用三维超声图像分析系统,对三维超声心动图在儿科先心病无创评价中的价值进行了系统全面的评估,主要进行了三方面研究:应用正交试验设计主效应分析法,进行小儿心脏三维超声信息采集及计算机图像处理方法学研究,建立小儿心脏三维超声信息采集及重建优化方案;以离体猪心和先心病心脏病理标本为研究对象,进行三维超声剖视(切)方法研究,提出了5个剖切面10个剖视面的剖视诊断新方案;将所建立的新方案应用于小儿复杂型先心病临床诊断并以ROC分析法进行客观评价,提示了三维超声剖视诊断能较二维超声在心内结构上提供更直观、丰富、准确的空间信息.
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计算机图像分析系统对白癜风的测定与分析
2006年1月~2007年5月,我科应用皮肤计算机图像分析(computer digital image analysis,CDIA)系统对白癜风患者正常皮肤与皮损进行了测定与研究,现报道如下:1 资料与方法1.1 临床资料47例均为我科门诊白癜风患者,其中男27例、女20例;年龄20~45岁,平均28.80岁.白癜风病程1~18a,平均4.58a.所有观察对象在进入研究前至少2周停用所有外用药物及其它的各种治疗方法.
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极低频磁场对细胞缝隙连接通讯功能影响的超微结构观察
50 Hz连续或脉冲磁场对培养细胞的细胞缝隙连接通讯(gapjunctional intercellular communication,GJIC)功能影响的研究表明,0.4 mT以上强度的磁场具有抑制GJIC功能的作用,该作用与磁场强度及辐照时间相关,具有剂量-效应关系,脉冲磁场抑制效应较正弦磁场强[1-3].我们在已往实验的基础上,应用透射电子显微镜(TEM)及计算机图像分析系统进一步观察在0.8 mT、50Hz脉冲磁场辐射24h的条件下,极低频磁场对GJIC功能影响的超微结构变化.
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大鼠缺血再灌注心肌间质胶原含量和形态学变化的定量研究
目的研究大鼠心肌缺血再灌注后心肌间质胶原含量及形态学的变化.方法将Wistar大鼠随机分为对照组(A组)和缺血再灌组,后者按缺血时间(15,30,60min)又分为B,C,D 3组.观察各组大鼠心肌羟脯氨酸含量变化,心肌间质胶原线密度、光密度、体密度及面积.结果 C组和D组心肌羟脯氨酸含量及间质光密度和胶原线密度均低于A组(P<0.01),间质体密度高于A组(P<0.01).B组与A组比较无明显差异(P>0.05),且心肌间质形态正常.结论心肌缺血再灌可导致心肌间质损伤,缺血15min内再灌注造成的心肌间质损害较轻.