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大鼠脑缺血再灌注后诱导型环氧合酶和丙二醛的表达及川芎嗪的干预作用
目的 探讨脑缺血再灌注损伤后诱导型环氧合酶(COX-2)和丙二醛(MDA)的表达及其意义,为治疗缺血性脑病提供实验依据. 方法 以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹法和硫代巴比妥酸法以及与神经行为相结合的方法,观测缺血再灌注侧大脑皮质内COX-2和MDA的表达和神经功能的变化,2,3,5-氯化二苯四氮唑(TTC)染色观测脑梗死体积的变化. 结果 MDA与COX-2的表达呈正相关(r=0.910,P＜0.01).COX-2和MDA在假手术组含量均较低,I 2h/R 6h两者均有明显升高,并随再灌注时间延长逐渐升高,在I 2h/R 24h达高峰,I 2h/R 48h 略有下降,但仍维持在较高水平;与I 2h/R 24h模型组比较,川芎嗪治疗组的脑梗死体积明显减小(P＜0.01),MDA含量明显降低(P＜0.01). 结论 脑缺血再灌注后,COX-2和MDA的表达较正常组明显增多,是导致脑缺血再灌注损伤的因素之一.川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用.
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灯盏花注射液对大鼠低氧性肺动脉高压作用的实验研究
低氧性肺动脉高压对肺心病的发生发展起着十分重要的作用，因此降低肺动脉高压是该病防治的关键环节，我们将有关灯盏花注射液对低氧性肺动脉高压大鼠影响的实验结果报告如下。 材料与方法雄性SD大鼠30只（温州医学院动物实验中心提供），随机分为3组，每组10只：①对照组：常压常氧下常规饲养；②低氧组：将动物置于自制常压低氧箱内，控制箱内氧浓度为（10.0±0.5）%，二氧化碳浓度<1.5%，箱内以无水氯化钙吸收水蒸气，钠石灰吸收CO2，每天低氧10 h，每周6 d，共4周。每日于低氧前腹腔内注射1 ml生理盐水；③灯盏花组：每日低氧前腹腔内注射1次4 ml/kg灯盏花注射液（云南生物制药厂提供，批号980803，含总黄酮4.5mg/ml），低氧方法同低氧组。4周后，用导管法测定平均肺动脉压（mPAP）、平均颈总动脉压（mCAP），分离右心室（RV）、左心室加室间隔（LV+S），滤纸吸干水分后分别称重，并计算两者的比值［RV/（LV+S）］。各组右下肺取材，常规脱水，10%甲醛固定，石蜡包埋，弹力纤维染色。选取断面较完整的外径为100～200 μm的肺细小动脉，应用上海申腾信息技术有限公司、华东理工大学和上海医科大学联合研制的IMS细胞图像分析系统（产品标准号：Q/IAFP01—1997），采用华东理工大学自动化研究所研制的心胸血管分析软件进行测量，获得平均肺细小动脉中膜厚度（mMTPA）以及其占血管外径的比值（MT%），计算肺细小动脉管壁面积/管总面积（WA/TA）和管腔面积/管总面积（EA/TA）。将剩余肺组织制成10%的匀浆，采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，测定匀浆一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量。蛋白定量采用考马斯亮蓝法。采取颈总动脉血，用硝酸还原酶法测定血浆NO含量，试剂盒购自伊利康生物技术有限公司。数据用（±s）表示，组间比较采用非配对t检验。
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外源性心脏营养素1：保护PC12细胞和许旺细胞的可能性
背景：外周神经损伤后的很短时间内，神经和肌肉已经开始发生不可逆的退变。如何延缓外周神经损伤后的退变过程，并创造一定的微环境作为其恢复的基础。目的：探讨外源性心脏营养素1保护PC12细胞和许旺细胞的作用。方法：获得并培养许旺细胞和PC12细胞，分别进行完全培养基培养、无血清培养基培养和50℃高温培养，心脏营养素1组中加入一定量的外源性心脏营养素1溶液，对照组中加入等量无菌DMEM溶液培养24 h。应用CCK-8比色法测定PC12细胞和许旺细胞的存活率，乳酸脱氢酶试剂盒测定上清液中乳酸脱氢酶活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛浓度，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性。结果与结论：加入心脏营养素1后PC12细胞和许旺细胞存活率明显增高，乳酸脱氢酶释放量、丙二醛浓度明显减少，超氧化物歧化酶活性显著增加。证实外源性心脏营养素1能够明显减轻缺血和热应激刺激对PC12细胞和许旺细胞的损伤从而起到保护作用，其作用机制可能与心脏营养素1与细胞表面受体结合激活了抗凋亡蛋白的表达有关。
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恬尔心、异舒吉联合应用治疗缺血性心脏病临床观察
我科自1999年5～12月对26例缺血性心脏病患者采用恬尔心、异舒吉联合治疗，研究其对缺血性心脏病心绞痛的治疗作用及其对自由基代谢的影响，现报告如下。1 资料与方法1.1 病例 26例缺血性心脏病心绞痛患者均在我院急救科住院治疗，依据临床症状、动态心电图、超声心动检查和其它实验室检查均符合世界卫生组织(1979年)诊断标准［1］。患者26例，其中男性15例，女性11例，年龄52～86岁，平均66.5±14.1岁。心绞痛类型：稳定型13例，不稳定型9例，自发型心绞痛4例，合并高血压6例，高脂血症4例，糖尿病5例，心律失常11例。1.2 方法 病人在治疗前两周内，治疗中停服维生素C、维生素E以及氯丙嗪等药物，治疗时给予恬尔心(日本田边制药株式会社制)1.5mg/(kg*d)，24小时静脉滴注维持，异舒吉(德国许瓦兹大药厂制)1mg/(kg*d)，24小时静脉滴注维持，丹参(上海第一制药厂制)20ml，静滴，每日1次。高血压患者同时服用抑平舒(上海罗氏制药)5mg，每日1次。心律失常患者加用心律平(上海东方制药厂)100mg，每日3次。1.3 观察指标 血浆过氧化脂质(LPO)，硫代巴比妥酸法［2］；血清超氧化物歧化酶(SOD)，邻苯三酚自氧化法测定［3］；全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，三氯法测定［4］，计算SOD/LPO、GSH-Px/LPO的比值，同时观察患者的血压、血脂、心电图变化。
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实验性糖尿病大鼠肾病进程的研究
本实验通过四氧嘧啶小剂量多次给药的方式造成大鼠糖尿病,考察其肾脏改变并探讨其意义.1 材科和方法试验用动物为沈阳药科大学动物室提供的体重210～250g雄性Wister大鼠100只,适应性饲养7天,禁食12小时候分成两组:一组90只作为糖尿病组,一组10只作为对照组.糖尿病组动物分别于第零周、第二周、第六周皮下注射四氧嘧啶(150mg/kg),对照组动物注射相应量的生理盐水,将血糖持续超过200mg/dl的大鼠入选糖尿病模型鼠,动物自由摄食饮水.每隔两周用代谢笼集尿、眶后血管采血,用葡萄糖、氧化酶法测定血糖含量,用尿八项自动生化分析仪(MA-4210型)测定尿糖、尿蛋白、尿酮体,用亲和层析试剂盒测定糖化血红蛋白,硫代巴比妥酸法[1]测定肾组织过氧化脂质生成量,采用苏木素伊红染色,400倍光镜下观察肾小球形态.数据用x士s表示,两均数差异显著性用t检验.
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硒拮抗镉诱导大鼠组织脂质过氧化作用的影响
镉是一种重金属毒物，对机体可造成广泛的损害，腹腔注射一定剂量的镉可引起脂质过氧化反应［1］。硒是必需微量元素，在正常摄入情况下具有抗脂质过氧化作用［2］。但经饮水同时给予硒和镉，硒对镉所产生的脂质过氧化是否有拮抗作用的报道较少。为此我们给大鼠分别饮用镉，硒加镉水溶液4周，并设空白对照组，研究肝、肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化，以探讨硒对镉的拮抗作用，从而为镉的防治提供参考依据。1 材料与方法1.1 材料 SD成年大鼠，由广东省实验动物场提供。GSH-Px、SOD、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。亚硒酸钠(Na2SeO3）、硫酸镉(CdSO4）由广州化学试剂厂供给。1.2 染毒方法 选用体重190～240 g SD大鼠24只，随机分为三组，每组8只，雌雄各半。对照组饮用自来水，镉组饮用含50 mg/L的硫酸镉水溶液，硒加镉组饮用含0.5 mg/L亚硒酸钠加50 mg/L硫酸镉水溶液。各组动物自由摄取普通全营养饲料。1.3 测定指标及方法 动物染毒4周后，断头处死，分离肝、肾，准确称取肝、肾组织各1 g，加冷冻生理盐水至10 ml，在冰冻下匀浆，以3 000 r/min离心20 min，取上清液按南京建成生物工程研究所试剂盒中方法分别测定GSH-Px活性(DTNB直接法)、SOD活性(黄嘌呤氧化酶法)、MDA含量(硫代巴比妥酸法)。统计学处理用t检验。
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复方丹参滴丸对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用与机制
目的:观察复方丹参滴丸对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉内皮细(HUVEC)损伤的保护作用,探讨其对心脑血管疾病治疗的机制,以及在防治心脑血管疾病中的意义.方法:用0.1 mmol/LH2O2制造HUVEC损伤模型,按分组分别把不同浓度的丹参滴丸(0.5g/L、0.25g/L、0.1g/L)于损伤前、损伤后加入,分别测定细胞活力(MTT法)即观察滴丸对H2O2损伤内皮细胞活性的影响;硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA),硝酸酶还原法测定细胞培养液中一氧化氮含量;免疫细胞化学法观察内皮细胞NOS2 NOS3,NF-κB的表达情况.
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bcl-2、bax基因在铁诱导肝细胞凋亡中的作用
1. 材料与方法: 雄性Wistar大鼠，40只，随机分为空白组、高铁组、CCl4组和CCl4+高铁组，每组10只。空白组和高铁组均饲以普通颗粒饲料，饮用自来水。其中高铁组腹腔注射右旋糖酐铁(ID)，50mg/kg，每周2次，共5周。CCl4组、CCl4+高铁组，第1～5周饲养及给药情况相应同前述两组；第6～10周，复制CCl4肝损伤模型，共10周。模型复制成功后剖杀各组大鼠。留血清采用比色法检测血清铁（SI）。取肝组织，制成10%肝匀浆，采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）。取肝组织0.5g左右，70%酒精固定后，处理样品。上流式细胞仪分析DNA 含量及Bcl-2和Bax含量，计算凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。消化部分肝组织后，用原子吸收/火焰发射分光光度计测定肝组织铁含量（HIC）。统计学处理采用组间方差分析，组内q检验，肝组织铁含量与SI及MDA的关系用直线相关分析。2. 结果：（1）各组SI、HIC、MDA含量变化：各实验组SI水平与空白组比较显著升高（F＝68.67，P＜0.0001)。HIC在补充铁剂组明显升高（F＝83.55，P＜0.0001)。各组MDA含量与空白组比较亦增高显著（F＝45.59，P＜0.0001)，且应用铁剂组尤为显著。SI与HIC呈直线正相关，（r＝0.7916，P＜0.001）。
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新疆两色金鸡菊抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力
目的 考察新疆两色金鸡菊的乙酸乙酯和正丁醇提取物抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力.方法 采用响应面优化工艺条件提取新疆两色金鸡菊.提取物经石油醚萃取后,剩余水相分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,获得乙酸乙酯提取物(EAE)和正丁醇提取物(BE).采用硫代巴比妥酸法测定提取物的抗脂质过氧化能力;采用盐酸萘乙二胺法测定提取物清除亚硝酸盐和抑制亚硝胺形成的能力.结果 在亚油酸反应体系下,测得EAE和BE的抗脂质过氧化能力(SC50)分别为443.96±11.24、840.29±16.38 μg·mL-1.EAE的抗脂质过氧化能力与阳性对照维生素C之间无显著性差异;但显著弱于阳性对照叔丁基对羟基茴香醚.采用大鼠肝细胞匀浆反应体系测得的结果分别为23.59±3.67、60.37±4.27 μg·mL-1.EAE的抗脂质过氧化能力强于维生素C;但显著弱于叔丁基对羟基茴香醚.在清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力中,EAE和BE清除亚硝酸盐的能力(SC50)分别为122.10±1.03、118.23±1.30 μg· mL-1;阻断亚硝胺形成的能力分别为2.3629 ±0.0113、2.1828±0.0107 mg·mL-1.两种提取物清除亚硝酸盐和阻断亚胺形成的能力与叔丁基对羟基茴香醚之间无显著性差异,但均弱于维生素C.结论 新疆两色金鸡菊的EAE具有很强的抗脂质过氧化能力,同时具有一定清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力.
