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乳康胶囊治疗乳腺增生病的实验研究
乳腺增生病归属于中医“乳癖”范畴.临床主要特征为乳房肿块和乳房疼痛,一般常于月经前期加重,行经后减轻.乳康胶囊专为治疗本病而设,对本病引起的上述症状和体征有较理想的治疗作用和显著效果.为探讨其作用机理,针对本病病理和临床特点,我们进行了乳康胶囊治疗乳腺增生病的实验研究.1 实验材料1.1 动物健康Wi star大白鼠,体重160g~200g,雌雄兼用;昆明种小白鼠,体重22g~25g;健康未孕家兔,体重2.5kg~3.0kg,雌雄兼用(以上动物均由河南医科大学动物实验中心提供).
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灯盏花注射液对大鼠低氧性肺动脉高压作用的实验研究
低氧性肺动脉高压对肺心病的发生发展起着十分重要的作用,因此降低肺动脉高压是该病防治的关键环节,我们将有关灯盏花注射液对低氧性肺动脉高压大鼠影响的实验结果报告如下。 材料与方法雄性SD大鼠30只(温州医学院动物实验中心提供),随机分为3组,每组10只:①对照组:常压常氧下常规饲养;②低氧组:将动物置于自制常压低氧箱内,控制箱内氧浓度为(10.0±0.5)%,二氧化碳浓度<1.5%,箱内以无水氯化钙吸收水蒸气,钠石灰吸收CO2,每天低氧10 h,每周6 d,共4周。每日于低氧前腹腔内注射1 ml生理盐水;③灯盏花组:每日低氧前腹腔内注射1次4 ml/kg灯盏花注射液(云南生物制药厂提供,批号980803,含总黄酮4.5mg/ml),低氧方法同低氧组。4周后,用导管法测定平均肺动脉压(mPAP)、平均颈总动脉压(mCAP),分离右心室(RV)、左心室加室间隔(LV+S),滤纸吸干水分后分别称重,并计算两者的比值[RV/(LV+S)]。各组右下肺取材,常规脱水,10%甲醛固定,石蜡包埋,弹力纤维染色。选取断面较完整的外径为100~200 μm的肺细小动脉,应用上海申腾信息技术有限公司、华东理工大学和上海医科大学联合研制的IMS细胞图像分析系统(产品标准号:Q/IAFP01—1997),采用华东理工大学自动化研究所研制的心胸血管分析软件进行测量,获得平均肺细小动脉中膜厚度(mMTPA)以及其占血管外径的比值(MT%),计算肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)和管腔面积/管总面积(EA/TA)。将剩余肺组织制成10%的匀浆,采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒,测定匀浆一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。蛋白定量采用考马斯亮蓝法。采取颈总动脉血,用硝酸还原酶法测定血浆NO含量,试剂盒购自伊利康生物技术有限公司。数据用(±s)表示,组间比较采用非配对t检验。
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基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1在肺间质纤维化实验中的表达
细胞外基质(ECM)合成和降解失衡是引起ECM积聚导致肺间质纤维化的重要病理生理因素。基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)是调节ECM降解的重要体系。我们以博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠为模型,观察肺间质纤维化发生过程中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、 MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的变化,探讨MMP-2、9和TIMP-1在肺间质纤维化发病中的作用。 材料与方法 (1) 动物模型制备:雌性Wistar大鼠60只(沈阳军区医学专科学校动物实验中心提供),体重(215±20)g,随机分为:模型组、对照组,每组各30只。模型组吸入乙醚麻醉后,颈前暴露气管,一次性气管内注入0.4%博莱霉素A5(天津华北制药厂)生理盐水注射液(5 mg/kg),制成动物模型。然后分别于第1、3、7、14、28天处死6只大鼠,心脏取血。对照组同样方法注入等量生理盐水,同样天数各处死6只。(2)酶谱分析:根据刘煜等[1]介绍的方法,对标本进行MMPs酶谱分析。(3) Northern Blot:取5 μg大鼠肺组织总RNA,行RT-PCR,引物序列为:MMP-2:5′-AGTGGGACA AGAATCAGATCACAT-3′(上游), 5′-TCGGTGGTACAGCTGT TGTAAGAG(下游);MMP-9:5′-AAGCAGACATTGTCAT CCAGTTTG-3(上游),5′-GACAGAAACCCCACTTCTTGTCAG-3′(下游);TIMP-1:5′-CTCATCGCGGGCCGTTTAAG-3(上游),5′-GAAGGCTTCGGGTCATCGAG-3′(下游),geneclean纯化回收PCR产物制备探针,随机引物法行α-32P-dCTP标记。20 μg RNA 样品经甲醛变性电泳、转入尼龙膜、65 ℃预杂交1~3 h、65 ℃杂交18 h,常规洗膜及放射自显影。
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高脂饮食对老年大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白活性与含量的影响
老年肥胖者易患高血压、冠心病、糖尿病等疾病,而肥胖与饮食习惯有明显的关系.正常大鼠过度饮食时,可以通过增加能量消耗避免发展成为肥胖,这种现象被称为食物诱导的产热,也就是食物的热效应;而给予肥胖大鼠过度饮食则可导致大鼠体重过度增加.棕色脂肪与能量平衡有关,肥胖大鼠棕色脂肪明显减少,食物诱导的产热减少可能与棕色脂肪有关.我们于1999年9~10月应用高脂饲料喂养老年大鼠,旨在了解高脂饮食对解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)的影响,探索肥胖发生的机制,为临床治疗肥胖探寻新的途径.一、材料和方法1.试剂:[8-3H]鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)和[U-14C]蔗糖,为英国Amersham公司产品;羧基苍术苷(carbxyatractyloside)钾盐,为美国Sigma公司产品;三乙醇胺盐酸盐,为德国Boehringer公司产品;GTP由上海丽珠生物技术有限公司生产.2.动物及分组:18月龄雄性SD大鼠24只,体重370~390 g,随机分为正常对照组、高脂饮食组,每组各12只.正常对照组给予标准饲料(第二军医大学动物实验中心提供):碳水化合物热卡占61%,脂肪占12%,蛋白质占26%,喂养30 d;高脂饮食组予配制的高脂饲料:碳水化合物热卡占20%,脂肪占61%,蛋白质占19%,喂养30 d.饲养期间大鼠置于室温(22±1)℃中,自由饮水.3.UCP的测定:取肩胛间区棕色脂肪组织,以差速离心法分离出线粒体.用3H标记的GTP与UCP结合,用液体闪烁仪测定放射活性.后用Scatchard作图法对测定的数据进行分析,得出UCP与GTP结合的解离常数(Kd)及大结合容量(Bmax)值,其中Kd的大小反映UCP活性的高低;Bmax的大小反映UCP含量的多少.
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早期肠内营养联合大黄治疗重症急性胰腺炎的实验研究
本实验旨在探讨早期肠内营养(early enteral nutrition,EEN)联合大黄治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的合理性及治疗效果.材料与方法1.主要材料:雄性Wistar大鼠,生大黄煎液分别购自哈尔滨医科大学第一临床医学院动物实验中心及药房;结晶牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司;肠内营养液百普素购自荷兰Nutricia公司.
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大鼠抑郁性神经症模型下丘脑单胺类神经递质研究
我们在建立大鼠抑郁性神经症模型的基础上,应用高效液相色谱-EC法观察其下丘脑内单胺类神经递质的变化,旨在进一步探讨抑郁性神经症的发病机理.材料和方法 (1)动物模型:动物为成年SD雄性大鼠,体重180~220 g(南京中医药大学动物实验中心提供).首先用Open-Field法作行为学评分[1],选择得分相近的20只大鼠随机分为对照组和模型组,每组10只.模型组每笼饲养1只,对照组每笼饲养5只.模型组共接受21天各种不同的应激,包括冰水游泳(4 ℃,5 min)、热应激(45 ℃,5 min)、禁水(24 h)、夹尾(1 min)、电击足底(电压50 mV,每隔30 s刺激1次,每次持续10 s,共15次)、摇晃(1次/ s,5 min)、禁食(24 h)和昼夜颠倒等刺激,平均每种刺激各进行2次.(2)试剂:去甲肾上腺素(NE)酒石酸盐,多巴胺(DA)盐酸盐,5-羟色胺(5-HT)盐酸盐,3,4-二羟基苯乙二醇(DHPG),3-甲氧基-4-羟基苯乙二醇(MHPG),3,4-羟基苯乙酸(DOPAC),高香草酸(HVA),5-羟吲哚乙酸(5-HIAA),3,4二羟基苯甲胺氢溴酸盐(DHBA),半胱氨酸(以上均为SIGMA公司产品),乙二胺-四乙酸二钠(EDTA,分析纯),辛烷基磺酸钠(东京化成工业株式会社产品),无水乙酸钠(分析纯),柠檬酸(分析纯),二正丁胺(化学纯),高氯酸(分析纯),甲醇(一级品,高效液相色谱专用).实验用水为重蒸馏水.(3)仪器:高效液相色谱仪由岛津LC-10A系列组成.(4)样品制备及测定:动物造模后立即断头处死,并同批处死对照组.取大鼠大脑,置于冰皿上,按Glowinski法分离下丘脑[2],称重后测定1 g下丘脑组织的MHPH、NE、DHBA、DOPAC、DA、5-HIAA、HVA、5-HT的含量(ng),计量单位以ng/g表示.
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豚鼠鼻粘膜一氧化氮合酶表达
一氧化氮(nitric oxide, NO)是新近发现的一种具有多种而复杂生物学活性的小分子物质,是生物体内重要的信使分子和效应分子,参与体内众多的生理病理过程。NO具有松弛血管平滑肌、调节血液循环、抑制血小板聚集等作用,并被认为是一种重要的神经递质[1]。催化NO的生物合成酶称一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS),本检测旨在探索NOS在鼻粘膜上的分布及其生理学意义。 一、材料和方法 1.豚鼠12只,发育营养正常,雌雄不论,体重350 g左右(本校动物实验中心提供)。 2.制片:豚鼠灌注固定处死后,迅速取下双侧鼻甲粘膜,分别置入10%中性甲醛固定,1侧鼻粘膜6 h后移入15%蔗糖过夜,鼻粘膜包埋在OCT水溶性包埋剂中,做5 μm厚的冰冻切片;另1侧硅烷化载玻片行4 μm石蜡切片。 3.酶组织化学染色:冰冻切片过0.01 mol/L 的磷酸缓冲溶液(pH 7.4)后,待其干燥,加入含有0.8 g/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠(nicotinamide dinucleotide phosphate-Na4,NADPH-Na4, 美国Sigma公司)、0.6 g/L的硝基四氮醋蓝和0.3% Triton-X100的孵育液,置于37℃恒温箱内孵育1.5 h,显色后0.01 mol/L磷酸缓冲溶液冲洗3次,终止反应,常规酒精脱水、透明、封片。阴性对照:孵育液内不含NADPH-Na4。 4.内皮型NOS(endothelial NOS, eNOS)原位杂交检测步骤:采用eNOS原位杂交检测试剂盒(武汉博士德公司)。石蜡切片脱腊至水,蛋白酶K消化5 min,暴露mRNA核酸片段,cDNA双链探针变性后,每张切片加10 μL含地高辛标记探针的eNOS原位杂交液,湿盒中37℃杂交18 h,充分洗涤后,用免疫组化ABC法显示探针与鼻粘膜靶核酸形成的杂交体。阴性对照为省去滴加eNOS探针杂交液,其余方法和步骤不变。
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电离辐射对小鼠腹水型S180细胞凋亡及小鼠生长的影响
电离辐射诱导细胞凋亡是目前肿瘤放射生物学研究的热点之一[1],但辐射诱导细胞凋亡的机理仍不十分清楚。本文作者通过研究S180荷瘤小鼠经电离辐射诱导肿瘤细胞凋亡,探讨电离辐射诱导细胞凋亡与照射剂量、照射方式、抑瘤作用及生存期之间的关系。 一、材料和方法 1.材料设备:昆明小鼠(内蒙古大学动物实验中心),S180细胞(北京肿瘤基础研究所),直线加速器(北京BG-4),流式细胞仪(美国B-D FACscan),透视电镜(日本H-700)。 2.动物模型建立:取7~8 d S180荷瘤鼠腹水液,按1∶4稀释,接种于鼠腹腔,每只0.2 ml,相当于2×106个瘤细胞,制成腹水型荷瘤小鼠。
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加强实验动物设施建设提高我院医学科技水平
实验动物科学是一门新兴学科,是伴随生命科学的发展而发展起来的一个新的领域,也是生命科学发展的重要基础条件.据报道,在动物体内蕴藏着所有人类生命信息遗传物质-基因密码的全部破解及基因功能特异性表达和定位.面对当今生物技术的高速发展,我国实验动物无论是基础理论还是发展水平远不能满足科学技术的需要.特别是在医药、生命科学领域中.由于社会的快速发展,人们的生活跨越式的提高,各种细菌的变异,是人们不知不觉的受到侵害,所以世界各国的科学家在生命科学的研究中,把实验动物作为临床前模型和"活的精密仪器",其体内的信息和作用是任何数据不可替代的[1].作为一所现代化知名度颇高的医院,科学研究及科技成果是衡量其技术水平的指标之一.为此,我院化费了大量人力、物力、财力,建设了一个SPF级实验动物中心,为促进我院实验动物研究开拓了一条攀登之路,为我院的医、教、研工作再上一个新台阶奠定了坚实的基础.
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中药启乐抗肿瘤转移作用研究
一、材料与方法1.实验材料:(1)动物:C57 BL/6小鼠18~22g,615小鼠18~22g,昆明种小鼠18~22g,以上动物由中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所提供,H22肝癌小鼠,B16-F10黑色素瘤小鼠,子宫颈癌U14腹水型小鼠,Lewis肺癌小鼠,以上均由中国医学科学院动物实验中心提供.(2)药物:启乐提取液8g生药/ml,由山东中医药大学天然药物实验室提供.丝裂霉素:2mg/瓶,日本协和发酵工业株式会社出品.
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鼓楼医院动物实验中心的建立及管理体会
2004年初,我院投资两百多万元新建了动物实验中心(以下简称为中心),已经通过有关部门的检查验收,达到省内实验动物设施的先进水平.
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SPF级动物实验中心建设中存在的问题和解决方案探讨
在1999年广西壮族自治区卫生防疫站SPF级动物实验中心的设计和建设过程中,遇到了许多问题.通过多次对中心的结构布局、气流系统等进行改进,取得了较好的效果.建成后的试运行和验收阶段又发现了一些不足之处,我们对气流系统和空调系统在尽可能的范围内进行了一定的改造,并总结经验,为本自治区另两个后建的SPF级动物室所借鉴,达到较好的效果.
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辐射安全所动物实验中心提供服务
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大鼠同种异体肾上腺髓质植入蛛网膜下腔抗伤害性感受作用的实验研究
肾上腺髓质嗜铬细胞具有分泌功能,植入中枢神经系统有可治疗巴金森氏病的报道。本实验 旨在对大鼠进行同种异体肾上腺髓质移入蛛网膜下腔,观察其存活和分泌情况及对疼痛的影 响,为临床用类似方法,有效地治疗慢性痛提供基础。1 材料与方法 (1)动物和试剂 体重200~300 g健康雌性大鼠100只,由山东医科大学动物实验中心提供。 安全弗氏佐剂由山东医科大学免疫教研室配制。其余药剂为国产分析纯。 (2)移植手术 用1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉,动物取俯卧位固定。取出肾上腺后迅 速放入0℃的Hank's液中,在解剖显微镜下迅速分离出肾上腺髓质,再用无菌眼科剪剪成体 积小于0.5 mm3的小块,让其悬于Hank's液中。然后迅速对另一只大鼠在T12-L 2处进行椎板切除术,暴露出2~3 mm的硬脊膜。在解剖显微镜下轻轻划开硬脊膜下腔。把悬 于0℃的Hank's液中的肾上腺髓质组织块通过划开的小口移植入蛛网膜下腔。移植组(n= 40)移植2个肾上腺的髓质组织块。假手术组(n=20)移植同等量的肌肉块(直径<0.5)。 缝合肌肉和皮肤,观察其运动,异常者丢弃。 (3)动物分组 将动物分为两组:①假手术组;②移植组。为进一步确定移植组大鼠尼古丁 刺激后,释放了哪些镇痛物质,又将移植组分为:①尼古丁+纳络酮组:注射尼古丁2 min后 注射纳络酮(2 mg/kg s.c);②尼古丁+酚妥拉明组:注射尼古丁2 min后注射酚妥拉明(10 m g/kg s.c)。
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阿托伐他汀对糖尿病大鼠心肌中肿瘤坏死因子-α的影响
本实验通过建立糖尿病心肌病大鼠模型,对其进行阿托伐他汀的干预,观察心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达,探讨其发病机制并为防治提供新的依据.1 材料与方法1.1 动物模型分组:8周龄清洁级健康雄性Wistar大鼠54只(由山西医科大学动物实验中心提供),体质量195~230 g,随机分为正常对照组(A组,18只),糖尿病组(B组,18只)和阿托伐他汀干预组(C组,18只),C组给予10 mg· kg-1· d-1阿托伐他汀生理盐水混悬液灌肾,A组和B组给予等体积生理盐水灌胃.
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乌司他丁对急性肺损伤水通道蛋白-1调节机制的研究
乌司他丁治疗急性肺损伤(ALI)的机制是否与水通道蛋白(AQPs)的表达有关,乌司他丁调节水通道蛋白的机制是否是通过抑制炎症介质来实现,对此,我们进行了研究,现报告如下.1 材料与方法1.1 动物模型制备成年、健康Wistar大鼠40只,体质量平均250 g左右,全部购自山西医科大学动物实验中心.于实验室适应性饲养(商品化干块料、自由饮水、温度20~22℃、湿度50%~55%)1周后,采用随机区组设计将其分为4组:正常对照组10只,油酸组10只,治疗组10只,乌司他丁组10只.
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复方藤芷膏对化疗性静脉炎小鼠肿瘤坏死因子-α血管内皮生长因子表达的影响
本研究通过观察复方藤芷膏对长春瑞滨注射液导致的小鼠化疗性静脉炎的鼠尾血管内皮肿瘤坏死因子(TNF)-α及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨复方藤芷膏对化疗性静脉炎的作用机制.1材料与方法1.1实验动物健康昆明种小鼠,体质量(31±2)g,由山西省中医药研究院实验动物室提供.实验前1周饲养于山西省中医药研究院动物实验中心以适应实验室环境,实验室温度(20±2)℃,相对湿度34%RH,持续12 h明暗交替.小鼠雌雄分笼,自由活动,自由饮水,标准鼠食喂养.
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双酚A对妊娠小鼠仔鼠免疫功能影响
双酚A广泛用于碳酸聚酯、环氧树脂、聚丙乙烯树脂,以及杀菌剂、抗氧化剂和染料等的生产.现有资料集中在对成熟个体生殖与免疫研究,对子代的免疫系统影响报道较少.本研究旨在探讨双酚A对子代小鼠免疫系统的影响及其机制,为阐明其对人类健康的潜在危害提供实验依据.1 材料与方法1.1 动物昆明种小鼠36只(雌∶雄=2∶1),体重(20±2)g;豚鼠5只,均由吉林大学动物实验中心提供.绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞(CRBC)采自健康的绵羊和公鸡.1.2试剂双酚A(天津市光复精细化工研究所,分析纯);金龙牌玉米油.
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浅议完善SPF级实验动物设施设计方案
随着实验动物生产和使用逐步纳入法制化管理,2000年起各行业的科研和鉴定等工作所使用的啮齿类实验动物需达到清洁级以上的要求,广西壮族自治区近几年陆续通过新建或改建建立了多个SPF级实验动物饲育中心和动物实验中心,从而提高了实验动物科学的整体水平.
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初步评价99mTc-MIBI在诊断重度淤胆型婴儿肝炎综合征中的价值
99mTc-EHIDA肝胆显像在鉴别诊断婴儿肝炎综合征及先天性胆道闭锁方面的价值已得到业内公认,其对先天性胆道闭锁的诊断灵敏度可达100%[1].但由于EHIDA本身的药物结构,肝细胞摄取显像剂的多少与血液内胆红素含量呈负相关.对于那些重度淤胆型的新生儿来说,血液内胆红素含量很高,肝细胞功能受损,传统的99mTc-EHIDA肝胆显像常常会出现假阳性的结果[2].而99mTc-MIBI作为传统心肌灌注显像剂,其经肝胆排泄也为大家熟知.如何将二者联合,取长补短,我们进行了初步探讨,现总结如下.1资料和方法1.1实验材料取实验用新西兰兔2只,雌雄各一,体重约100克,由厦门大学动物实验中心提供.采用静脉注射氯氨酮与氯丙嗪复合麻醉.麻醉满意后由耳缘静脉注射99mTc-MIBI mCi,用平行孔准直器即时采集动态图像,1min/帧,共60帧[3].隔日对同一实验兔行上腹部正中切口,探查胆总管下段并用丝线结扎之,缝合切口,形成胆总管闭锁动物模型.其余注射及显像条件完全等同未结扎胆总管时.
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