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天津市2002年冬至2003年春流行性感冒病原学检测分析
为了解天津市流行性感冒(流感)流行情况,自2002年10月至2003年3月对天津市四家医院和两所学校采集流感样患者咽拭子标本,用MDCK细胞和鸡胚两种接种方法分离流感病毒.结果共采集流感样患者咽拭子标本305份,分离到流感病毒123株,其中B型90株占73.2%,A(H3N2)亚型33株占26.8%,A(H1N1)亚型未被分离到.总分离率为40.3%,如将2002年12月医院门诊(55/99)与学校采样(9/13)的两组数据汇总,该月的病毒分离率达57.1%(64/112),形成峰顶.所分离的90株B型流感病毒,其中4株为Yamagata系,占4.4%(4/90);其余的95.6%均为Victoria系.123株流感病毒均首先分自MDCK细胞,将对应的标本液直接接种鸡胚,仅收获到3株阳性尿囊液,阳性率2.4%(3/123),且均为B型毒株;阳性细胞液转种,有96.7%的B型毒株能适应生长,而33株A(H3N2)亚型毒株虽经反复转种却无一株转变为鸡胚生长适应株(0%).红细胞凝集试验中96.7%(87/90)的B型毒株的第一代细胞培养液具有D相特征(即与人O型红细胞及鸡红细胞均凝集良好),其余3株(3.3%)B型毒株及全部33株A(H3N2)亚型毒株均具只凝集人O型红细胞的O相特征,将A(H3N2)毒株在MDCK细胞上反复传代,但仍持续保持O相特征.
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钙激活钾通道KCa3.1对巨噬细胞吞噬功能的抑制性调节作用
目的 观察巨噬细胞膜的钙激活钾通道KCa3.1与吞噬功能的关系.方法 通过光镜下半定量观察RAW264.7巨噬细胞吞噬鸡红细胞,以及采用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的大肠杆菌(FITC-tagged E.coli)等方法,研究正常RAW264.7细胞的吞噬活动,以及阻断KCa3.1通道后RAW264.7细胞吞噬能力的改变.结果 光镜检测结果显示,未受吞噬刺激因子激活的对照RAW264.7细胞对鸡红细胞有较弱的吞噬能力,其吞噬率为1.67％±0.29％；用KCa3.1通道选择性阻断剂TRAM-34(20nmol/L)处理RAW264.7细胞后,吞噬率增高至5.08％±0.38％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),且单个RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞的个数也明显增加.流式细胞术结果显示,阻断KCa3.1通道后,RAW264.7细胞吞噬FITC标记的大肠杆菌的数量明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 KCa3.1通道的活动对RAW264.7巨噬细胞的吞噬活性有抑制性调节作用.
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灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响研究
目的 了解灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法 采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法),以灵芝多糖溶液连续灌胃小鼠后,经腹腔注射鸡红细胞悬液,取腹腔洗液制作涂片,固定染色后置于显微镜下观察,同时计数小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数目并计算吞噬率和吞噬指数,对结果 进行统计学分析.结果 ① 21g/kg、84g/kg 组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数明显高于低剂量组和对照组,经统计学分析有显著性差异(P ＜ 0.05);② 84g/kg 组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数高于21g/kg 剂量组,经统计学分析有显著性差异(P ＜ 0.05).结论 灵芝多糖能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,从而增强机体的免疫功能,但与剂量有关,低剂量灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能无明显影响,只有中、高剂量才能提高小鼠巨噬细胞免疫功能.
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鸡红细胞标准品制备及其在流式细胞仪DNA周期检测中的应用
目的:制备鸡红细胞标准品并探索其在流式细胞仪DNA周期检测中的应用.方法:采集鸡红细胞制成纯净红细胞,然后用乙醇固定,放于4℃冰箱备用.用PI荧光染料标记鸡红细胞和分别加入鸡红细胞的人结肠癌细胞SW480、人喉癌细胞系Hep2、人肺腺癌细胞A5494,用流式细胞仪检测DNA含量.结果:鸡红细胞替代正常二倍体细胞与肿瘤细胞同时染色,直方图显示两种细胞G0/G1期峰位置相差大,可清晰分辨,得到肺腺癌细胞A549的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为4.7120,喉癌细胞系Hep2的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为7.0962,结肠癌细胞SW480的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为4.5234.结论:利用流式细胞术,以鸡红细胞为内标标记,可以准确计算并识别多种肿瘤细胞DNA倍体,并且可以辅助流式检测的质量控制,此方法简便易行值得推广.
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鸡红细胞标准品在胶质瘤细胞DNA周期检测中的意义
目的 自制鸡红细胞标准品在脑胶质瘤细胞周期检测中的应用.方法 选2例病理2级和2例4级脑胶质瘤患者术中切除的新鲜肿瘤组织提取单细胞悬液,加入自制鸡红细胞做内参,70%乙醇过夜,用PI荧光染料标记细胞,用流式细胞仪检测DNA含量.结果 鸡红细胞替代正常二倍体细胞与肿瘤细胞同时染色,4例脑胶质瘤DNA检测结果为1例2级患者可见肿瘤细胞和鸡红细胞G0/G1期峰荧光道数值分别为83.411和27.779,DI值1.000 9;另1例2级患者为82.545和27.811,DI值0.989 4.1例胶质瘤WHO 4级患者肿瘤细胞和鸡红细胞G0/G1期峰道数值分别为87.562和26.275,DI值1.111 0.这3例患者的DNA直方图上除鸡红细胞G0/G1期峰外只见1个患者细胞的G0/G1期峰.另1例胶质瘤WHO 4级患者直方图上可见鸡红细胞和三个倍体峰,G0/G1期峰道数值分别为81.682、96.075、120.243和23.806,DI值分别为1.143 7、1.345 2、1.686 1.结论 鸡红细胞为内参,可以准确计算并识别脑胶质瘤细胞DNA各个倍体,甚至内参照是计算DI值必不可少的参照物.这4例DNA周期分析结果和病理结果完全吻合,是一种客观的辅助诊断手段,可以推广至各种肿瘤的检测中,并可用于仪器的评估和校准.
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双酚A对妊娠小鼠仔鼠免疫功能影响
双酚A广泛用于碳酸聚酯、环氧树脂、聚丙乙烯树脂,以及杀菌剂、抗氧化剂和染料等的生产.现有资料集中在对成熟个体生殖与免疫研究,对子代的免疫系统影响报道较少.本研究旨在探讨双酚A对子代小鼠免疫系统的影响及其机制,为阐明其对人类健康的潜在危害提供实验依据.1 材料与方法1.1 动物昆明种小鼠36只(雌∶雄=2∶1),体重(20±2)g;豚鼠5只,均由吉林大学动物实验中心提供.绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞(CRBC)采自健康的绵羊和公鸡.1.2试剂双酚A(天津市光复精细化工研究所,分析纯);金龙牌玉米油.
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祛风湿类中药免疫作用的研究——对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响
目的:研究祛风湿中药对环磷酰胺(CTX)所致免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影响.方法:采用环磷酰胺建立小鼠免疫低下模型,测定灌胃给药后小鼠体内碳粒廓清水平和血清溶血素抗体水平.结果:四大类中药均有不同程度的提高免疫抑制小鼠碳粒廓清率,促进血清溶血素形成,在2个免疫增强作用的试验中,辛温(热)合归脾胃经药均表现出很强的免疫增强作用,其次是祛风湿强筋骨药也具有较强的免疫增强作用,另外2大类祛风湿止痹痛药和舒筋活络药有一定作用.结论:免疫作用可能是祛风湿中药的共同药理作用之一,辛温(热)合归脾胃经药表现出较强的免疫增强作用为临床应用提供了理论支持,同时完全支持提出将其归为第四类祛风湿中药的观点.
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TF口服液诱导T细胞IL-2、IL-6及CD分子的表达
转移因子(transfer factor,TF)是介导细胞免疫的重要因子之一,其TF口服液具有协同诱导人T淋巴细胞IFN-γ和HLA-DR/DQ分子的表达[1],促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬功能,促进人T淋巴细胞增殖发挥良好的免疫调节作用[2].为进一步了解TF口服液协同诱导细胞因子的分泌和CD分子的表达,我们以TF口服液加入外周血淋巴细胞培养,观察其协同PHA诱导T细胞、IL-2、IL-6的分泌及CD3、CD4、CD8T细胞的变化.
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蓝靛果汁对小鼠免疫功能影响的实验研究
1实验材料药品与试剂:蓝靛果汁,由黑龙江省勃利县酿酒厂提供;植物血凝素(PHA),上海伊华医学科技有限公司生产,批号200502;可溶性淀粉,天津市科密欧化学试剂开发中心,批号20010830;生理盐水,哈药集团制药六厂,批号010970.动物:昆明种小鼠,雌雄兼用,体重18～22g,购自哈药集团动物中心.白色葡萄球菌(26101):由中国药品生物制品鉴定所提供.鸡红细胞(CRBC)悬液:健康雄鸡翼静脉采血,加肝素抗凝,生理盐水洗涤3次,配成2%CRBC悬液备用.
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红花对小鼠免疫功能的影响
1实验材料1.1动物昆明种小白鼠,体重20±2g,购于河北医科大学实验动物中心.1.2药品与试剂红花水煎液(0.6g生药量/1ml),自制.药材购于河北省药材公司,为新疆产一级红花;印度墨汁,上海长江日用粘合材料厂生产;PHA(植物血凝素),Siva公司生产,购自北京;5%鸡红细胞(CBRC)悬液及10%豚鼠补体均为自制.
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鸡红细胞融合适条件的探讨
目的:探讨快速、有效的细胞融合条件.方法:用鸡红细胞为材料,聚乙二醇(Mw=4000)为诱导剂,诱导鸡红细胞融合.结果:鸡红细胞融合的适温度为39℃,适时间为15min.结论:在该条件下,同时用Giemsa染液对融合细胞染色,实验观察效果明显.
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当归的免疫药理研究进展
当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels]具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠的功效,是中医临床常用药.国内对当归的药理研究日益深入,笔者仅就近10 a来对当归的免疫药理研究成果回顾总结如下.1 对巨噬细胞吞噬功能的影响实验证明[1],当归和其所含阿魏酸能明显促进小鼠碳粒廓清和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞,而且阿魏酸的作用较当归提取液强.当归多糖(AP)能增加小鼠血液钙的含量,从而补充机体对钙的需要,保护免疫细胞,增强巨噬细胞(MΦ)吞噬功能[2].据王氏等报道[3],AP与瘤苗联用能显著增强荷瘤鼠的巨噬细胞介导细胞毒作用,提高了瘤苗的抗瘤效果.又有实验表明[4],AP分离组分AP-1能明显提高正常小鼠单核吞噬细胞吞噬功能,而AP及其分离组分AP-3此功能则不明显.故当归能提高巨噬细胞的吞噬功能.
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柞蚕蛹虫草对小鼠非特异性免疫功能影响的研究
目的:探讨柞蚕蛹虫草对小鼠非特异性免疫功能的影响.方法:用柞蚕蛹虫草醇提取液0,8,16,32mg/kg的剂量连续灌胃7 d,分别作腹腔巨噬细胞吞噬试验和碳廓清试验.结果:8,16 mg/kg两个剂量组分别与对照组比较,P＜0.05,呈现显著性差异.结论:8,16 mg/kg两个剂量组能提高小鼠非特异性免疫功能,32 mg/kg剂量组不能提高小鼠非特异性免疫功能.
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流式细胞仪用鸡红细胞的制备
目的 制备稳定可用的流式细胞仪校准用鸡红细胞.方法 引入明胶沉降、无Ca2+Hank's平衡盐缓冲液处理及低速离心等方法对传统鸡红细胞分离方法进行改良；并采用Triton X-100打孔及Rnase酶降解RNA的方法增强细胞DNA染色效果,检测所得新鲜细胞活率及固定后细胞DNA含量在流式细胞仪上的变易系数(CV)值,并与传统方法获得的鸡红细胞进行对比.结果 改良后方法获得的鸡红细胞活率(98.5±3.5)％高于传统方法(93.5±2.7)％(P＜0.05).经戊二醛固定后,该细胞在90 d的保存时间内基本稳定,且其CV值显著低于传统方法[(6.0±0.3)％～(6.2±0.4)％vs(8.6±0.5)％～(13.1±1.4)％,P＜0.01)].结论 改良后方法获得的鸡红细胞可被开发作为流式细胞仪校准的有效工具.
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绵羊红细胞与鸡红细胞对小白鼠溶血素的影响的探讨
绵羊红细胞(SRBC)是一种比较好的红细胞性抗原.近年我们做免疫功能测定仍用SRBC作为免疫原.由于SRBC来源比较困难,为了探索红细胞抗原问题,我们应用绵羊红细胞(SRBC)与鸡红细胞(CRBC)分别免疫小白鼠,进行其血清溶血素(抗体积数)测定的比较.现将结果报告如下.
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用鸡红细胞取代Hela细胞进行细胞融合的实验研究
为了探讨更经济、简便、有效的细胞融合方法,作者用鸡红细胞和Hela细胞为材料,聚乙二醇(mw=4000)为诱导剂,诱导鸡红细胞,Hela细胞融合.结果鸡红细胞和Hela细胞融合率分别为22%和20%,两者无显著差异,但鸡红细胞更优于Hela细胞.
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细胞融合方法实验中鸡红细胞储备液的改良
目的延长细胞融合实验中鸡红细胞的储备时间,降低教学成本.方法用生理盐水替代Alsver液作为鸡红细胞储备液,同时降低鸡红细胞浓度.结果生理盐水中鸡红细胞可在4℃保存216h以上,而且不影细胞融合率.用Alsver液,鸡红细胞在4℃保存时间不超过24h.结论生理盐水能明显延长鸡红细胞在4℃环境中的保存时间,不影响细胞融合率,而且成本低,值得推广.
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吞噬细胞吞噬功能的检测
目的:了解吞噬细胞的吞噬机制及原理,掌握吞噬细胞的吞噬功能检测的原理及方法.方法:葡萄球菌法检测中性粒细胞的吞噬功能,小白鼠腹腔巨噬细胞试验检测巨噬细胞的吞噬功能,显微镜下计数并求出吞噬率和吞噬指数.结果:巨噬细胞的吞噬率为90%,吞噬指数为4.5,中性粒细胞的吞噬率为60%,吞噬指数为7.2.结论:小鼠腹腔中的巨噬细胞可以吞噬注入其中的鸡红细胞,中性粒细胞在体个可以吞噬葡萄球菌等颗粒性物质,从而可以初步评价机体的非特异性免疫功能.
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扶正抑瘤方汤剂与配方颗粒剂增强小鼠巨噬细胞吞噬功能对比研究
目的:观察扶正抑瘤方汤剂与配方颗粒剂对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响,为临床应用配方颗粒剂提供依据.方法:给予小鼠灌胃扶正抑瘤方汤荆和配方颗粒剂,10天后进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,测定吞噬百分率和吞噬指数.结果:促进巨噬细胞吞噬功能作用强度汤剂组和配方颗粒剂组与正常组比较有显著性差异(P
