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T细胞依赖性抗体反应检测方法研究进展
T细胞依赖性抗体反应(TDAR)是检测免疫功能的主要试验技术.根据使用抗原及抗原特异性抗体检测方法的不同,TDAR方法包括绵羊红细胞(SRBC)作为抗原的空斑形成细胞(PFC)方法、SRBC作为抗原的ELISA方法和钥孔戚血蓝素(KLH)作为抗原的ELISA方法.KLH作为抗原比SRBC稳定、易标准化且容易获得,ELISA检测方法操作简便、样本可保存,便于整合到临床前毒理学研究中.本文综述了TDAR检测方法对免疫毒性的预测作用及其研究进展.
关键词: T细胞依赖性抗体反应 钥孔戚血蓝素 绵羊红细胞 免疫毒性 -
Ⅱ型超敏反应家兔模型的建立
目的 建立Ⅱ型超敏反应家兔模型,为免疫毒理学或药效学研究提供新方法.方法 家兔耳缘静脉注射绵羊红细胞(SRBC)5×108 kg-1,每天1次,每周连续6 d,停药1 d,连续6周,诱导Ⅱ型超敏反应.每周观察呼吸和喷嚏等症状,并监测体温,检测血清游离血红蛋白和游离胆红素及尿隐血,计数外周血网织红细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和血小板,测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性及尿素氮和肌酐浓度,用Coombs实验法检测血清抗SRBC抗体水平.6周后处死家兔,测定肝、肾、脾和胸腺指数,并观察组织病理变化.结果 与对照组相比,注射SRBC后1~6周,家兔呼吸和喷嚏等症状及体温未见明显变化,外周血网织红细胞数目和血清游离胆红素浓度未见明显变化.但从第1周开始出现尿隐血,第5周时血清游离血红蛋白显著增加,提示出现血管内溶血.外周血淋巴细胞从第1周开始显著增加,第4周时中性粒细胞明显减少,血小板数目未见明显变化,提示粒细胞受损伤.第1和第2周时血清GPT活性增加,第6周时GOT活性增加,尿素氮和肌酐水平未见明显变化.第3周时血清中出现抗SRBC抗体,第6周时脾脏和胸腺显著肿大,提示免疫系统参与此过程.第6周时肾脏、脾脏和胸腺组织未见明显变化,肝脏组织出现肝小叶排列紊乱、炎症细胞浸润和大量空泡等现象,提示肝脏有变性性损伤.结论 家兔耳缘静脉注射SRBC 6周可导致Ⅱ型超敏反应.
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细胞免疫学的临床试验
1 E-花环形成试验 人体淋巴细胞表面有绵羊红细胞(SRBC)受体,在体外一定的条件下,能与SRBC结合而形成像一朵玫瑰花的节环,称为 E-花环形成试验.测定外周血液中的T细胞所形成的花环百分率,可用于推测机体的细胞免疫功能.在检测中,经37℃孵育并在4℃下静置2h所形成的E花环,称为总花环,不需上述条件即能迅速形成的E花环自然数为活性花环.活性花环更能敏感地反映人体细胞免疫水平的动态变化.凡淋巴细胞周围粘附3个以上的绵羊红细胞称为花环细胞.计数200个淋巴细胞的花环细胞数,并算出百分数称为E-花环值.
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雪松油免疫调节活性的初步研究
已有报道,雪松Cedrus deodara (Roxb.) Loud.挥发油对各种不同的炎症模型具有良好的抗炎活性,因此作者研究了雪松油对免疫系统的作用。 将雪松油用阿拉伯胶和西黄蓍胶作成乳剂,按照50和100 mg/kg的剂量给大鼠和小鼠口服。在大鼠中性白细胞粘连实验中,发现雪松油能减少炎症部位的中性白细胞数目,从而降低白细胞的吞噬作用,并抑制使炎症恶化的各种酶和介质的释放。在小鼠Arthus反应中,在50和100 mg/kg剂量时,抑制率分别为74.35%和84.33%。推断该抑制作用可能与下列步骤之一有关:针对抗原甲化了的牛血清白蛋白(MBSA)产生抗体;在注射部位产生免疫复合物;补体系统发挥作用;中性白细胞聚集;溶酶体酶的释放,以及在注射部位产生一系列由炎症引起的组织坏死。在绵羊红细胞(SR-BC)诱导的延迟型过敏反应(DTH)和血凝反应抗体效价实验中,雪松油对SRBC引起的小鼠延迟型过敏反应具有抑制作用,抗体效价也稍降低。盐水对照组为6.0,雪松油50和100 mg组分别下降到5.0和4.8,表明雪松油对T淋巴细胞和补助细胞有作用。在 唑酮诱导的小鼠接触性过敏反应中,50和100 mg/kg剂量时的抑制率分别为42.03%和60.20%,表明雪松油对肥大细胞具有稳定作用。 总之,雪松油对体液和细胞介导的免疫反应具有抑制作用,从而对炎症有治疗作用。但其作用机制和免疫调节活性尚需进一步的体内外实验验证。 (常海涛摘译史玉俊校)〔Shinde U A, Phadke A S, Nair A M, et al. Fitoterapia,1999,70:333〕
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高效价兔抗羊免疫血清制备及其在实验教学中的应用
家兔经绵羊红细胞(SRBC)免疫后血清中可出现抗SRBC的抗体,采集免疫动物血液分离血清,即可获得抗SRBC 的抗血清。用 SRBC与相应抗血清混合,当有补体存在时,在一定条件下, SRBC被溶解破坏,故抗 SRBC 抗体又称为溶血素。动物免疫血清是医学教学、科研及临床实验工作中经常要用到的试剂。但目前市场上购买到的溶血素价格昂贵,效价也不高,因此为了节约经费,使用方便,提高实验课的教学质量,本实验室选取S RBC作为颗粒性抗原,在短时间内获得了高效价的免疫血清(溶血素),并取得了较好效果,现报告如下。
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双酚A对妊娠小鼠仔鼠免疫功能影响
双酚A广泛用于碳酸聚酯、环氧树脂、聚丙乙烯树脂,以及杀菌剂、抗氧化剂和染料等的生产.现有资料集中在对成熟个体生殖与免疫研究,对子代的免疫系统影响报道较少.本研究旨在探讨双酚A对子代小鼠免疫系统的影响及其机制,为阐明其对人类健康的潜在危害提供实验依据.1 材料与方法1.1 动物昆明种小鼠36只(雌∶雄=2∶1),体重(20±2)g;豚鼠5只,均由吉林大学动物实验中心提供.绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞(CRBC)采自健康的绵羊和公鸡.1.2试剂双酚A(天津市光复精细化工研究所,分析纯);金龙牌玉米油.
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E花环法测定转移因子活性的研究
人类外周血淋巴细胞和猪脾TF细胞的表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体,简称为E受体,使TF细胞可与SRBC形成玫瑰花结.这是成熟TF细胞的特征之一.细胞经45℃加热1h或用胰酶处理可脱去E受体.转移因子可以促进脱E受体的TF细胞重新合成E受体.因此可用脱E受体的E花环实验来测定转移因子的活性.使用该法测定时,我们发现转移因子浓度与结花率具有相关性[1].结果报告如下.
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活性E花环标本染色法的改进
人类T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体,因此,SRBC能粘附于T淋巴细胞表面形成玫瑰花样的细胞团,故名为E攻瑰花环形成试验.是免疫学中的基本实验.E花环标本在G-W染色中,使SRBC及嗜酸性颗粒着鲜明的伊红色,但核着色浅甚至不着色,不利于在镜下观察.通过本法之染色,一般可使淋巴细胞呈蓝紫色,SR-BC呈鲜明的红色易于观察.
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微量溶血分光光度法测定抗体形成细胞
溶血分光光度测定(QHS)法是常用的抗体形成细胞功能测定法,它具有灵敏、稳定、客观等优点.QHS全量法在试管内进行,抗体产生细胞、补体和SRBC(绵羊红细胞)用量各为1.0ml,总体积3.0ml,用量较大及检测不便是全量QHS法的不足之处.我室将全量QHS法微量化(各种成分均为0.1ml),反应在96孔板内进行,用酶标分析仪一次大量检测,收到较好的效果,现报道如下.
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黄芪对小鼠抗体形成细胞作用的实验研究
1 材料和方法1.1 仪器和药物 低温冷冻离心机:Beckman,美国;722分光光度计:上海光学仪器进出口公司.绵羊红细胞,新鲜豚鼠血清(补体),小牛血清,结晶紫溶液,羊抗鼠IgG.黄芪:购于滨州医学院附属医院中药房,取100g加水1000ml,文火煎煮1小时,去渣浓缩为100ml(浓度为100%)备用.
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两种免疫方法制备兔抗绵羊红细胞溶血素的效价观察
目的 比较两种免疫程序和途径制备抗血清的效价,并在免疫学溶血反应中的运用效果比较,寻求获取符合实验教学需要的高效价溶血素的较佳方法.方法 采用不同浓度的绵羊红细胞(Sheep red blood cells,SRBC)间隔1天和间隔3天腹腔、耳静脉免疫家兔,用血球凝集法浓度为1.5%SRBC悬液检测并比较两种免疫程序和途径所制备溶血素的效价结果免疫后获得的溶血素效价几何平均滴度,A组脱纤维绵羊RBC全血皮内多点注射家兔为1:22286.09,B组10%脱纤维绵羊RBC悬液耳静脉注射家兔为1:72407.73.结论 10%脱纤维SRBC悬液耳静脉注射家兔制备的溶血素效价高于脱纤维SRBC全血皮内多点免疫家兔,是获取实验教学用溶血素的较佳免疫程序.
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2 792例不孕育患者血清抗精子抗体检测结果分析
2004年1月~2005年10月,我们对2 792例不孕育患者行血清抗精子抗体(AsAb)检测,现报告如下.资料与方法:2 792例不孕育患者中,男1 427例,女1 365例;年龄27~48岁,平均32.7岁.均采集空腹静脉血2~3ml,分离血清,56℃灭活30min,采用混合抗球蛋白反应试验(MAR法)检测AsAb,试剂盒由安徽安科生物工程(集团)股份有限公司提供.计数100个活动精子,计算黏附有绵羊红细胞(sRBC)的活动精子在总活动精子中所占的百分比.≤10%为阴性,>10%为阳性.结果1 427例男性中AsAb阳性185例(12.96%),1 365例女性中阳性215例(15.75%),总阳性率为14.33%.
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短程免疫制备实验用溶血素方法探讨
目的 寻求采用短程免疫制备实验用溶血素(兔抗绵羊红细胞抗体)的较佳方法.方法 采用3%的脱纤维绵羊红细胞(SRBC),分别用连续5次注射的短程免疫和间隔一周注射的长程免疫方法,经耳缘静脉免疫家兔,用补体溶血实验检测两种免疫方法所制备溶血素的效价.结果 短程免疫组溶血素效价为1∶200,长程免疫组溶血素效价为1∶800.结论 采用高浓度的SRBC及合理搭配免疫间隔时间和次数的短程免疫程序是制备实验用溶血素的较佳方法.
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曲利本兰在E玫瑰花实验中的应用
目的进一步提高E玫瑰花染色效果。方法常规制备好的标本片置室温,实验组以1%曲利本兰染液染色,对照组以瑞氏、瑞一姬氏、美兰染液分别染色。结果实验组比对照组所染花结清晰,背景干净。结论曲利本兰染液稳定,不发生沉淀,染色效果理想。
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绵羊红细胞与鸡红细胞对小白鼠溶血素的影响的探讨
绵羊红细胞(SRBC)是一种比较好的红细胞性抗原.近年我们做免疫功能测定仍用SRBC作为免疫原.由于SRBC来源比较困难,为了探索红细胞抗原问题,我们应用绵羊红细胞(SRBC)与鸡红细胞(CRBC)分别免疫小白鼠,进行其血清溶血素(抗体积数)测定的比较.现将结果报告如下.
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山药多糖对正常小鼠与实邪证模型小鼠免疫功能的影响
目的:研究山药多糖对正常小鼠与实邪证模型小鼠免疫功能的影响.方法:40只ICR小鼠随机均分为正常对照(等容生理盐水)组与山药多糖高、中、低剂量(400、200、100mg/kg)组;40只实邪证模型小鼠随机均分为实邪证模型(等容生理盐水)组与山药多糖高、中、低剂量(400、200、100mg/kg)组,另以10只ICR小鼠为正常对照(等容生理盐水)组,均灌胃给药,每天1次,连续4周.进行碳粒廓清实验,绵羊红细胞诱导小鼠迟发型变态反应,测定小鼠血清白细胞介素(IL)-2含量.结果:与正常对照组比较,山药多糖高、中剂量组小鼠廊清指数(K)、吞噬指数(α)、足肿胀程度、血清IL-2含量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与实邪证模型组比较,山药多糖高剂量组小鼠K、Μ、足肿胀程度、血清IL-2含量减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:山药多糖对正常小鼠免疫力有促进作用,但对实邪证模型小鼠免疫力则有削弱作用.因此,临床用药时应注意具体情况,以免起到相反效果.
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银耳多糖的药理学研究概况
近年来,国内外对银耳的主要成分—银耳多糖进行了大量研究,表明银耳多糖具有广泛的药理作用,是一种较好的保健食品和药物。银耳多糖主要分为酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类,不含核酸、蛋白质类物质[1]。下面就近年来对银耳多糖的药理作用研究作一概述。1 对免疫系统的调节作用1.1 对免疫器官重量的影响林志彬等[2]报道,银耳多糖皮下注射100mg/kg对正常小鼠的胸腺及脾脏重量均无显著影响,而腹腔注射200mg/kg可使正常小鼠脾脏重量明显增加。1.2 对体液免疫功能的影响银耳多糖100mg/kg可使正常和环磷酰胺处理小鼠经绵羊红细胞(SRBC)免疫所致溶血素生成分别增加92.9%和112.9%[2],表明银耳多糖可增强正常及改善免疫功能低下小鼠的体液免疫功能。
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随想克隆
~~~科技篇~~~"克隆"为"Clone"的音译.这个词的使用变得频繁起来,还得从免疫学领域说起.我们知道,体内的B淋巴细胞在特定抗原的刺激下,能产生专一的免疫球蛋白--抗体.长期以来,人们虽然能够从免疫的动物血清中获得抗体,但是这种抗体通常是多种抗体的混合物,不易分离.因而也就难以获得量大、且具单一针对性的抗体,作为生物制品,生产制备则非常困难.淋巴细胞可以产生特异性抗体,但不能在体外繁殖;肿瘤细胞在体外可以无限繁殖,却不能产生抗体.1975年,柯勒(kohler)和米尔斯坦(Milstein)利用以绵羊红细胞作抗原进行免疫的小鼠,从该小鼠脾脏中取其B淋巴细胞和小鼠多发性骨髓瘤细胞在特定条件下进行细胞融合,得到了B细胞杂交瘤.这种杂交瘤细胞一方面具有B淋巴细胞分泌抗绵羊红细胞抗体的特性,同时又具有骨髓瘤细胞在体外不断增殖的特性.B淋巴细胞杂交瘤经过反复筛选和单个细胞培养(克隆化Cloning),终获得由一个B淋巴细胞杂交瘤细胞增殖而来的纯细胞系,借助其大量的增殖并产生抗体,这种抗体称之谓"单克隆抗体"(Monoclonal Ati body McAb).单克隆抗体具有纯度高、特异性强、稳定性强、可批量生产等优点.单克隆技术的发明,被誉为免疫学上的一次技术革命,它在生物学和基础医学领域以及在诊断和治疗疾病方面都显示出了极其重要的理论价值和应用价值.因此,1984年,柯勒和米尔斯坦荣获诺贝尔医学奖.
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丝毛飞廉总黄酮对小鼠肝损伤中氧化应激介质生成的影响
目的 研究丝毛飞廉总黄酮(FGC)对绵羊红细胞(SRBC)诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤中氧化应激介质生成的影响.方法 预给予小鼠不同剂量的FGC(14、28、56 g·kg-1),连续ig7 d,第7日ip SRBC(红细胞个数为1.0×109 ·mL-1,剂量为10 mL·kg-1)致敏,12 d后用SRBC再次致敏,22 d后用SRBC肝穿刺攻击,诱发免疫性肝损伤,24 h后测定小鼠脏器指数,紫外分光光度法测定血清转氨酶(ALT、AST)水平,氧化应激介质丙二醛(MDA)的含量及小鼠肝微粒体中超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测肝细胞中DNA氧化损伤水平.结果 模型组脏器指数及血清ALT、AST与空白组比较均有显著性差异(P<0.05),表明SRBC诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤实验模型建立成功;FGC预给药组与造模组比较,小鼠脏器指数、血清中AST、ALT水平、SOD活性、MDA含量及彗星扫尾细胞的百分率均有显著性差异(P<0.05).结论 预先给予FGC(14、28、56 g·kg-1)可使SRBC诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤肝损伤中氧化应激反应减轻,并可显著降低肝细胞核DNA单链断裂氧化损伤水平,对免疫性肝损伤有保护作用.
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绵羊红细胞的质量对静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性测定的影响
为了分析IVIG抗补体活性测定出现负值与绵羊红细胞质量的关系.采用CH50试验测定IVIG ACA时,在被检样品和其他试验条件相同的情况下, 比较了被污染的和未污染的绵羊红细胞对IVIG抗补体活性测定的影响. 结果显示,使用被污染的绵羊红细胞(作为试验材料时所得的)检测10份样品ACA(%)均为负值;使用未污染的绵羊红细胞未出现负值.提示被污染的绵羊红细胞干扰了抗补体活性测定,从而引起CH50试验结果出现偏差.
关键词: 静脉注射用人免疫球蛋白 抗补体活性 绵羊红细胞