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安徽省阜阳市10只可疑狂犬脑组织狂犬病病毒抗原检测分析
近年来安徽省阜阳市狂犬病疫情持续上升,为此2004年我们采集疑似狂犬10只,记录其发病症状及咬伤人和动物情况,并取犬头送卫生部武汉生物制品研究所基因工程室做狂犬病实验室检测,死犬其余部分焚烧消毒.抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体、HRP标记的抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体由该室制备[1];异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗鼠IgG抗体由该所免疫研究室提供.用间接免疫荧光法(IFA)和双抗体夹心ELISA检测样品中狂犬病毒[2].
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慢性丙型肝炎患者肝内HCV-NS5的分布及其与组织病变的关系
一、材料与方法1.标本来源:所检肝穿标本均来自1997年8月至12月收治的甘肃省定西县城关乡长期献血和单采浆的农民.男41例,女25例.年龄大60岁,小24岁,平均39.4岁.所有患者5年前均已检出抗-HCV阳性,本次检测抗HCV仍阳性,HCV-RNA(RT-PCR)阳性,HBsAg阴性,ALT≥正常值1.5倍.肝穿标本,4%中性缓冲甲醛固定,常规石蜡包埋.对照组织来自武汉博士德公司提供肝癌旁组织和本研究收集部分乙肝肝穿标本.2.试剂与方法:NS5一抗部分来自博士德提供鼠抗HCV-NS5单抗(Tord Ji-22株),部分来自加拿大Yes Biotech公司(购自上海细胞所徐永华教授处),羊抗鼠二抗及ABC试剂盒均为Victor公司产品(购自华美公司). 实验方法:为提高NS5抗原检出率,我们用免疫组织化学ABC法比较了二种一抗、4种不同的组织预处理方法:(1)常规脱蜡入水,甲醇过氧化氢处理,正常鼠血清封闭后直接加一抗.(2)复合酶(博士德公司提供)消化(10~30 min)法.(3)入水、甲醇过氧化氢处理后,1%盐酸再处理10 min,蒸馏水洗5 min 3次,微波处理(5 min 2次),再用酶消化3~5 min.(4)基本同方法3,延长微波处理时间(10 min,2次).4种处理均为DAB显色,苏木精衬染.
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全血金标检测试纸条法在HBsAg献血者初筛中的应用
目前,血站对献血者HBsAg的筛查,大多采用ELISA法,虽然该法特异性、敏感性均佳,但因操作繁琐,故不适用于非固定采血点对献血者的快速筛查,而未经筛查直接采集的血液,往往由于该项检验不合格而报废。采用全血金标试纸条法对献血者进行HBsAg初筛,几分钟内即可完成检验,降低了血液报废率。 1 材料与方法 1.1 原理 全血金标试纸采用胶体金免疫技术,在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗(Au-ssAb),硝酸纤维素膜上检测线和对照线上分别包被抗HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠kgG。检测时,样本血清中HBsAg可与胶体金-抗体结合形成复合物,由于层析作用,复合物沿纸条向前移动。
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P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义
P27蛋白具有限制性调节细胞周期进程的作用,这一作用主要通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKS)复合物的功能来实现。P27蛋白表达与预后的关系在乳癌、淋巴瘤、前列腺癌以及消化道肿瘤已有报道[1],而在肺癌中的研究甚少。我们运用免疫组化法检测P27在非小细胞性肺癌组织中的表达水平,从而探讨其在非小细胞性肺癌中的意义。 对象和方法 1.对象:56例非小细胞肺癌(NSCLC)病例均在本院接受治疗及随访。其中男42例,女14例,年龄39~77岁,平均60岁。中位随访时间2年(1~5年),56例NSCLC中,腺癌36例,鳞癌18例,腺鳞癌2例。高分化12例,中分化20例,低分化24例。第1、2年每3个月随访一次,以后每半年一次。2.方法:(1)试剂:鼠抗人P27单克隆抗体(G173-524)购自美国Pharmingen公司。羊抗鼠IgG、链菌素亲生物蛋白和过氧化物酶、3,3-二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)均购自丹麦DAKO公司。(2)染色流程:5 μm石蜡切片脱蜡水化→过氧化氢室温处理20 min→甩干后微波抗原修复2次,每次10 min→鼠抗人P27单抗(1∶10)湿盒孵育过夜→生物素标记羊抗鼠IgG(1∶200),37 ℃湿盒温育40 min→DBA显色、复染、封片。用已知P27表达阳性的胰腺癌作阳性对照。用缓冲液(PBS)取代一抗作阴性对照。(3)染色结果判断:观察染色切片中10个具有代表性的高倍视野,其肿瘤细胞阳性数在50%以上为(+),低于50%为(-)。3.统计学方法:采用第二军医大学统计教研室统计软件SPSS软件包,运用Logistic逐步回归对P27表达与临床及病理指标的相关性进行分析;应用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,时序检验(log rank test),根据寿命表各随访年份生存率作生存曲线。
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间接免疫荧光技术检测尖锐湿疣中的人乳头瘤病毒
目的:间接免疫荧光技术在临床与基础研究中的应用较为广泛,但却极少有人用于尖锐湿疣的检测,我们旨在验证该方法是否可行,并将之与PCR方法相比较,以了解其准确性和敏感性.材料和方法:60例临床确诊的尖锐湿疣疣体标本均取自性病门诊,采取疣体印片,用小鼠抗人的HPV6型作为I抗,FTTC标记的山羊抗鼠IgG作为Ⅱ抗.在荧光显微镜下检查.剩余标本消化后做PCR,证实有无人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的DNA,并用RFLP方法进行分型.结果:在34例尖锐湿疣标本中检测到特异性荧光,阳性率为56.67%,而用PCR方法共检测到58例阳性,阳性率为96.67%.用X2检验比较二者的阳性率,P<0.01.主要感染类型为6和11型,占98.28%.结论:间接免疫荧光技术针对的是乳头瘤HPV的衣壳蛋白,能检测有完整衣壳的成熟HPV,操作简便,有望用于宫颈涂片的常规检查,以筛查带HPV者,对预防宫颈癌提供帮助.但敏感性不及PCR技术.
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免疫PCR检测沙门菌方法的建立及其应用
1992年Sano等人[1]首次报告用免疫PCR方法检测微量的牛血清白蛋白.该方法将PCR技术的高敏感性与抗原抗体反应的持异性结合起来,具有极高的敏感性和特异性,更使PCR技术应用于对蛋白等非核酸类物质的检测.髓后的报道大都用于检测HBsAg[2]、TNF[3]等可溶性蛋白.本文利用链亲和索和生物素之间的高度亲和力,采用生物素化羊抗鼠IgG作二抗,将单抗与DNA相连接,建立免疫PCR检测方法,用以检测颗粒性抗原细菌,并与ELISA方法进行了比较.
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IL-1 0对体外培养的人树突状细胞的影响
近年来的研究发现IL-10并非一种简单的下调因子,它与自身免疫性及过敏性疾病等密切相关,本文作者通过分析II-10对树突状细胞(DC)体外培养的影响,为临床治疗自身免疫类相关疾病提供一种新的治疗思路。 1材料与方法 1.1 主要试剂 IL-10(R&D公司);Ficoll-Hypaque细胞分层液(上海第二试剂厂);CD1.-FITC,CD80-FITC,CD86-FITC,CD83-FITC,CD1。等抗体(Immunotech);CDi4-PE,HLA-DR-FITC(BD);GM-CSF(先灵保雅公司);IL-4(PharMingen);RPMI 1640(GIBCO);FCS(GIBCO);D-Hank′s液(自配);羊抗鼠IgG-FITC(天津血液病研究所)。
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黄芪对小鼠抗体形成细胞作用的实验研究
1 材料和方法1.1 仪器和药物 低温冷冻离心机:Beckman,美国;722分光光度计:上海光学仪器进出口公司.绵羊红细胞,新鲜豚鼠血清(补体),小牛血清,结晶紫溶液,羊抗鼠IgG.黄芪:购于滨州医学院附属医院中药房,取100g加水1000ml,文火煎煮1小时,去渣浓缩为100ml(浓度为100%)备用.
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体外诱导单核细胞分化为肝样细胞的研究
我们通过建立人为细胞诱导分化体系在体外诱导人外周血单核细胞分化为肝样细胞,旨在为肝组织工程研究及临床应用提供新的细胞来源.一、材料与方法1.材料:外周血由山东省立医院肝胆外科患者知情同意并志愿提供,由山东省立医院伦理委员会批准;RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco公司);粒细胞刺激因子(齐鲁制药公司),肝细胞生长因子( HGF)、成纤维细胞生长因子4(FGF-4,Peprotech公司);鼠抗人CK19单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(Abcom公司);FITC标记山羊抗鼠IgG、TRITC标记山羊抗鼠IgG(北京中杉公司);4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、抗荧光淬灭封片剂(碧云天公司);淋巴细胞分离液、β-巯基乙醇( Sig-ma公司).