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肝癌旁组织文献资料
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慢性丙型肝炎患者肝内HCV-NS5的分布及其与组织病变的关系
一、材料与方法1.标本来源:所检肝穿标本均来自1997年8月至12月收治的甘肃省定西县城关乡长期献血和单采浆的农民.男41例,女25例.年龄大60岁,小24岁,平均39.4岁.所有患者5年前均已检出抗-HCV阳性,本次检测抗HCV仍阳性,HCV-RNA(RT-PCR)阳性,HBsAg阴性,ALT≥正常值1.5倍.肝穿标本,4%中性缓冲甲醛固定,常规石蜡包埋.对照组织来自武汉博士德公司提供肝癌旁组织和本研究收集部分乙肝肝穿标本.2.试剂与方法:NS5一抗部分来自博士德提供鼠抗HCV-NS5单抗(Tord Ji-22株),部分来自加拿大Yes Biotech公司(购自上海细胞所徐永华教授处),羊抗鼠二抗及ABC试剂盒均为Victor公司产品(购自华美公司). 实验方法:为提高NS5抗原检出率,我们用免疫组织化学ABC法比较了二种一抗、4种不同的组织预处理方法:(1)常规脱蜡入水,甲醇过氧化氢处理,正常鼠血清封闭后直接加一抗.(2)复合酶(博士德公司提供)消化(10～30 min)法.(3)入水、甲醇过氧化氢处理后,1%盐酸再处理10 min,蒸馏水洗5 min 3次,微波处理(5 min 2次),再用酶消化3～5 min.(4)基本同方法3,延长微波处理时间(10 min,2次).4种处理均为DAB显色,苏木精衬染.
