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肿瘤坏死因子α诱导胶质瘤细胞凋亡和p38丝裂素活化蛋白激酶表达
一、材料和方法1.材料:胶质瘤细胞C6购自本校全军神经外科研究所.重组人肿瘤坏死因子α(RhTNF-α)购自Sigma公司,按照所需浓度以PBS稀释.噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司.二甲基亚砜(DMSO)购自Fluka公司.
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rhTNF-α对人肝癌细胞HepG-2体外抗肿瘤作用研究
目的：探讨重组人肿瘤坏死因子α（recombinant human tumor necrosis factor-α， rhTNF-α）体外对人肝癌细胞 HepG-2生长抑制、侵袭能力及化疗药物敏感性的影响。方法以人肝癌细胞HepG-2为细胞模型，用不同浓度rhTNF-α作用于体外培养的HepG-2肝癌细胞，四甲基偶氮唑蓝法检测rhTNF-α对HepG-2肝癌细胞生长抑制率及其对抗肿瘤药物的敏感性的影响，应用Matrigel模拟基质检测细胞侵袭能力，用ELISA 法检测经不同浓度rhTNF-α作用后 HepG-2细胞中胸苷磷酸化酶（thymidine phsphorylase， TP）水平，对检测结果进行统计学分析。结果 rhTNF-α能显著抑制HepG-2肝癌细胞的生长，呈现明显的量-效关系和时-效关系；rhTNF-α能增强HepG-2肝癌细胞的侵袭能力，且随剂量增高越明显；rhTNF-α能显著提高HepG-2肝癌细胞TP的表达水平，TP水平随着rhTNF-α浓度的增加而增加，对照组及各试验组间TP的表达水平差异有统计学意义（F＝12.062， P＝0.014），各组间两两比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）；rhTNF-α与5-FU联合应用对提高HepG-2肝癌细胞对化疗药物的敏感性无明显影响，各组间差异无统计学意义（F＝0.485， P＝0.692）。 rhTNF-α与5′-dFUrd联合应用可提高HepG-2肝癌细胞对化疗药物的敏感性，各组间差异有统计学意义（F＝26.630， P＝0.006），且随着rhTNF-α浓度的增加，HepG-2肝癌细胞存活率逐渐降低，各组间两两比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。HepG-2肝癌细胞对5′-dFUrd敏感性的增加与rhTNF-α上调TP呈正相关性（r＝0.679， P＝0.001）。结论 rhTNF-α在体外能有效抑制HepG-2肝癌细胞增殖，但对其侵袭能力亦有明显增强，且能通过上调TP的表达，显著提高5-FU前体药物的化疗作用，并呈现明显量效关系。
关键词： 重组人肿瘤坏死因子α HepG-2细胞 胸苷磷酸化酶 增殖 侵袭性 -
人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增
目的研究人脐血来源的树突状细胞(DCs)体外培养扩增,并检测其功能.方法应用Ficoll-Hypaque离心获得界面细胞,贴壁培养2 h,获得单个核细胞,体外以重组hGM-CSF(50 ng/ml)+hIL-4(10 ng/ml)+hTNF-α(50 ng/ml)诱导培养14天.在DCs发育过程中,在光镜下观察其生长情况,应用流式细胞仪检测DCs表型.采用MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性.结果第6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞,随着培养时间的延长,此类细胞数量增多,第12天为形态不规则的毛刺状,为典型树突状细胞形态.流式细胞仪检测表明,成熟DCs高水平地表达HLA-DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c、CD123.被激活的T细胞对2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性.结论人脐血经rhGM-CSF+rhIL-4+hTNF-α体外诱导培养,能诱导出DCs.
