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细胞活性MTT法定量分析中的异速生长代谢动力学
目的:分析细胞活性噻唑蓝比色法(MTT法)定量分析中细胞代谢MTT的特殊动力学特点,建立适于临床应用的分析方法.方法:以传统的MTT法为基础,以MTT浓度、反应时间(t)及细胞数(X)为主要研究参数,观察4种肿瘤细胞系(Hep-G2等)在体外对MTT的代谢特点.采用一级代谢动力学方程[P1=Q0[1-exp(-kt)]]为分析MTT总量(Q0)与其代谢产物甲臜(P1)关系的基本模型,采用逻辑斯谛方程[Pi=ea+βxi/(1+ea+βxi)]分析呈S-型曲线的细胞死亡率(Pi),采用异速生长方程[Y=KXb]表达细胞代谢活性(Y)与每孔细胞数(X)间的关系,以逐步分析MTT代谢中各项因素之间的相互作用和内在联系.结果:根据光学原理,在MTT法中吸光度(At)与甲臜的量(Pt)成正比,MTT初始总量(Q0)全部代谢成甲臜相当的吸光度为极限吸光度(Amax),按本试验条件MTT50μ g/孔约相当于4.0.At对反应时间(t)和Amax呈有限依赖性,提示MTT的代谢不遵从典型的一级代谢动力学规律.MTT的细胞毒性所致细胞渐进性死亡呈S-型曲线,遵从logistic模型的规律.细胞代谢MTT的能力与细胞密度成负相关,遵从异速生长规律,4种细胞系代谢MTT能力的异速生长指数b均介于0.5-0.75之间.以上3种现象各项参数之间存在内在的联系,可用平衡细胞方程(BCEq)[At.=Amax{1-exp[-KXbf(t)]}]表示,式中K为一常数,f(t)为时间函数.结论:体外细胞MTT的代谢遵从特殊的异速生长动力学规律,BCEq是对细胞代谢MTT规律的三维解析,可用三维三步MTT法进行比较准确的细胞定量分析.
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淫羊藿素和脱水淫羊藿素对人类乳腺癌细胞T47D增殖和细胞周期的影响
目的 探讨淫羊藿素和脱水淫羊藿索对人类乳腺癌细胞株T47D增殖和细胞周期的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定淫羊藿素和脱水淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D的细胞增殖作用.并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780和雌激素受体ERB激动剂DPN为工具药来评价淫羊藿素和脱水淫羊藿素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对T47D细胞的增殖情况进行分析.结果 淫羊藿素和脱水淫羊藿素在10-8～10-6范围内能促进T47D细胞的增殖,并将T47D细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且淫羊藿素和脱水淫羊藿素促进T47D细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗.结论 淫羊藿素和脱水淫羊藿素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的.
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小半夏加茯苓颗粒含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响
目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏加茯苓颗粒对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用.方法:设空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、原方汤剂组及颗粒剂不同剂量组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测其细胞增殖抑制率.结果:与空白对照组比较,CTX组、原方汤剂组以及颗粒不同剂量组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞生长不良,细胞数量减少;MTT实验结果显示CTX组、汤剂组、颗粒不同剂量组对SMMC-7721细胞作用24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05).各时段内各中药组对细胞的抑制率均低于CTX组(P<0.05),原方汤剂组与颗粒大剂量组无显著差异(P>0.05).结论:小半夏加茯苓颗粒含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,且其作用呈现时间-效应关系和剂量-效应关系.
关键词： 小半夏加茯苓颗粒 含药血清 肝癌SMMC-7721 噻唑蓝 -
回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响
目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制.方法:采用H2O2建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型.采用MTT法测定回心草提液对H2O2损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA(3-amino,4-aminomethyl-2',7'-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性.结果:H2O2 12.5 mmol·L-1为合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24 h后,2.50 mg·mL-1、3.33 mg·mL-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50 mg·mL-1剂量组有显著作用(P<0.05).结论:12.5 mmol·L-1的H2O2作用24 h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H2O2损伤的内皮细胞,2.50,3.33 mg·mL-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50 mg·mL-1可增加NOS活性,促进NO的分泌.
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回心草对心肌细胞缺氧损伤的保护作用
目的:研究回心草水提液对心肌细胞缺氧损伤的保护作用,并从氧化应激角度探讨其作用机制.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,以3×105～5×105/mL密度接种于96孔板后第4天用无血清DMEM/F12培养48 h,然后置于缺氧环境(37℃,94％ N2,1％O2,5％ CO2)中继续孵育24h,建立体外心肌细胞缺氧损伤模型,并采用噻唑蓝(MTT)法测定1,2,3,4,5 g·L-1回心草水提液干预24h后细胞的活力;利用全自动生化分析仪测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.结果:回心草水提液可提高缺氧损伤心肌细胞的活力,其中3,4 g·L-1组的吸光度(A)分别为(0.529±0.031),(0.534±0.024),与缺氧损伤组A值(0.498±0.012)比较差异显著(P ＜0.05,P＜0.01);能降低LDH,CK活性和MDA含量,提高SOD活性,其中以回心草水提液3 g·L-1组效果佳.结论:回心草水提液能够保护缺氧损伤的心肌细胞,可能与其改善氧化应激有关.
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正交试验量效比对法优选卷柏抗SMMC-7721肝肿瘤组分总黄酮的提取工艺
目的:优选卷柏抗SMMC-7721肝肿瘤组分总黄酮的提取工艺.方法:选取提取时间、提取次数、乙醇用量及体积分数为考察因素,以人肝癌细胞SMMC-7721抑制率为指标的正交试验结果优选总黄酮和穗花杉双黄酮提取量综合评分的权重系数比,并通过SPSS 17.0软件对有效组分与药效学指标进行Pearson相关系数分析.采用HPLC测定穗花杉双黄酮含量,流动相乙腈句.5％乙酸水(33∶ 67),检测波长269 nm.结果:佳提取工艺条件为加10倍量70％乙醇回流提取1次,每次3h;穗花杉双黄酮含量与总黄酮含量的权重系数分别为0.7,0.3,反映含量指标与抑制率呈一定相关性.结论:以有效成分含量代表药效作为正交试验指标是科学合理的,优选的提取工艺稳定可行,为中药有效成分的提取提供新思路.
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姜黄素-羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其体外抗肿瘤活性评价
目的:优选姜黄素-羟丙基-β-环糊精(CUR-HP-β-CD)包合物的制备工艺,并对其体外抗肿瘤活性进行评价.方法:采用乙醇-水共溶剂孵育-冻干法制备CUR-HP-β-CD包合物;以包合率为评价指标,运用正交试验优化CUR-HP-β-CD包合物的制备工艺;采用紫外分光光度法和荧光分光光度法验证包合物的形成;利用噻唑蓝(MTT)法检测CUR和CUR-HP-β-CD包合物对不同肿瘤细胞(人子宫颈癌细胞株HeLa细胞和人肝癌细胞株HepG2细胞)处理不同时间(24 h和48 h)后细胞活性的影响.结果:CUR-HP-β-CD包合物的佳制备工艺为CUR与HP-β-CD的摩尔比1∶3,溶剂比(无水乙醇-水)1∶9,包合温度40℃,包合时间12h;CUR包合率42.2％,其冻干品经鉴别已形成包合物.MTT试验结果表明随着药物浓度的增加,CUR和CUR-HP-β-CD包合物能明显降低HeLa细胞和HepG2细胞的活性,且二者的半抑制浓度接近,说明CUR-HP-β-CD包合物对肿瘤细胞的增殖具有很好的抑制作用.结论:优选的包合物制备工艺简单可行、重复性好,制备的CUR-HP-β-CD包合物很好地保留了CUR的生物活性.
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糖肾平含药血清对高糖+LPS刺激足细胞增殖与凋亡的影响
目的:观察糖肾平含药血清对高糖环境下脂多糖(LPS)刺激足细胞增殖与凋亡的影响.方法:本实验在前期整体动物实验的基础上,进行足细胞传代培养后,将细胞种植于96孔培养板,分为正常组,高糖组,高糖+LPS组,厄贝沙坦组,糖肾平小、中、大剂量组及抑制剂组,分别在含药血清作用12、24、36、48h时,用MTT法检测各组足细胞增殖与凋亡情况.结果:高糖环境中足细胞经LPS刺激24h时增殖明显,糖肾平不同剂量组能明显抑制高糖环境中LPS刺激的足细胞增殖,与高糖组和高糖+LPS组相比,有显著性差异(P＜0.01);高糖组和高糖+LPS刺激36h时足细胞开始凋亡,48h时出现较多凋亡,糖肾平不同剂量组能明显抑制足细胞凋亡,与高糖组和高糖+LPS组相比,糖肾平大、中、小剂量组有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞的增殖和凋亡有一定的调节作用.
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肿瘤坏死因子α诱导胶质瘤细胞凋亡和p38丝裂素活化蛋白激酶表达
一、材料和方法1.材料:胶质瘤细胞C6购自本校全军神经外科研究所.重组人肿瘤坏死因子α(RhTNF-α)购自Sigma公司,按照所需浓度以PBS稀释.噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司.二甲基亚砜(DMSO)购自Fluka公司.
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COX-2抑制剂联合顺铂对胰腺癌细胞增生和凋亡的影响
目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂Celecoxib和顺铂联合应用对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响.方法:用Celecoxib和顺铂处理胰腺癌BxPC-3细胞后,用噻唑蓝(MTT)检测细胞的相对存活率,RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达,流式细胞术和Hoechst-33 258染色检测其对BxPC-3的凋亡诱导作用.结果:Celecoxib作用于BxPC-3细胞后,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性,其中24 h的IC50值为100 nM,Celecoxib可明显降低BxPC-3细胞COX-2 mRNA的表达;Celecoxib和顺铂联合应用对胰腺癌细胞增生的抑制和凋亡的诱导作用更加明显,Hoechst-33 258染色可呈现凋亡的形态学改变.结论:COX-2抑制剂和顺铂联合应用对抑制胰腺癌细胞增生和诱导细胞凋亡的高效性,表明其在临床上具有潜在的应用价值.
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SMMC7721肝癌细胞不等分次剂量照射后效果的实验研究
目的用SMMC7721肝癌细胞研究不等分次剂量(VFS)照射方案的效果.方法用不同的分次剂量方案照射相同细胞数目的不同样本,用噻唑蓝(MTT)分析方法获得照射后的细胞存活率(S)以进行比较.结果所有VFS方案照射后获得的S值均小于等分次剂量(CFS)方案照射后的S值,其中部分结果之间的差距有显著的统计学意义;在相同变化幅度的情况下,递减的VFS照射方案所获得的效果要好于递增VFS照射方案,其中,部分组别之间的结果有显著的统计学意义.结论实验结果与理论计算结果一致,所以,VFS方案,尤其是分次剂量递减的VFS方案可能应用于临床以提高治疗效果.
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原代培养舌癌细胞对抗癌药物敏感性观察
舌癌是头颈部常见的恶性肿瘤,其病因和发病机制尚不清楚,对其生物学特性的了解还不完善,因而影响治疗效果.目前研究表明,恶性肿瘤应进行综合治疗,其中,化疗药物治疗是其重要组成部分之一,但是化疗的疗效除受肿瘤组织学类型影响外,常存在个体差异,致使相同的治疗却结果不同.因此,本研究应用手术切除的新鲜舌癌组织制备单细胞进行培养,以MTT(噻唑蓝)比色法和流式细胞术法,观察临床常用化疗药物的敏感性,为临床化疗提供依据.
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青蒿素类药物对结肠腺癌细胞LS174T的细胞毒作用
目的 考察青蒿素(ART)、双氢青蒿素(DHA)及蒿甲醚(AM)对结肠腺癌细胞LS174T增殖的影响,为建立青蒿素类药物自身诱导代谢机制的体外研究体系奠定基础.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度药物、分别作用不同时间后对细胞增殖的抑制情况,计算抑制率并求得半数抑制浓度(IC50).结果抑制率均随药物浓度的增大和时间的延长而增加,ART作用24、48、72 h对LS174T的IC50分别为 > 240.00 μmol/L、> 240.00 μmol/L、211.18 μmol/L,DHA对LS174T的IC50分别为91.46、80.45、45.60 μmol/L,AM对LS174T的IC50分别为 > 320.00、262.90、163.93 μmol/L.结论 3种药物对LS174T增殖的抑制程度不同,但均呈浓度依赖性和时间依赖性.
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永磁磁场对大鼠胰岛细胞的增殖、活性影响的实验研究
[目的]研究在正常和缺氧培养条件下,不同强度永磁磁场对大鼠胰岛细胞增殖及活性的影响.[方法]根据大鼠胰岛细胞生长曲线的情况,选择培养第3天的细胞进行实验.在正常和缺氧培养条件下,采用3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9 mT强度磁场对加磁A-G组进行干预,对照组的细胞不加任何磁场干预,于磁场干预72小时后,利用噻唑蓝(MTT)方法检测各组细胞活性;采用44.8、90.6、182.1mT对加磁a-c组进行干预,对照组的细胞不加任何磁场干预,在磁场干预72小时之后,利用流式细胞仪检测各组细胞增殖情况.[结果]胰岛细胞生长周期吸光度(A)值从第2天(A值0.067±0.021)到第5天(A值0.449±0.113)呈直线生长趋势,故选择培养第3天的细胞进行磁场干预实验.在正常培养条件下,加磁组(A-G组)的MTT值与对照组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);在缺氧培养条件下,加磁A组MTT值高于对照组(P＜0.01).在正常培养条件下,加磁组(a、b、c组)的细胞增殖情况随着磁场强度的增加先降低后增加;在缺氧培养条件下加磁组细胞增殖情况随着磁场强度增加而提高.[结论]在正常培养条件下,不同强度的永磁磁场对大鼠胰岛细胞的活性无影响,在高强度的磁场作用下可以提高大鼠胰岛细胞的增殖能力;在缺氧培养条件下,低强度的磁场可提高大鼠胰岛细胞的活性,高强度的磁场则可提高大鼠胰岛细胞的增殖能力.
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缬草环烯醚萜抗肿瘤作用的实验研究
目的探索缬草环烯醚萜的抗肿瘤作用.方法对从缬草中提取分离的总环烯醚萜类物质及其中的环烯醚萜甙与环烯醚萜酯进行体内(小鼠移植性肿瘤)、体外(噻唑蓝染色法)抗肿瘤活性研究.结果缬草环烯醚萜甙与环烯醚萜酯对K562,HL60,U937,HepG2和Hale细胞株具有突出的细胞毒作用,对小鼠在体的EAC(腹水型)、S180(实体型)呈现出明显抑瘤作用;其抗癌活性强度为双烯键结构的环烯醚萜酯＞单烯键结构的环烯醚萜酯＞环烯醚萜甙.结论缬草环烯醚萜类物质具有显著的细胞毒与抗肿瘤作用,尤其是环烯醚萜酯.
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氯化镧对口腔内八种致病细菌的抑制作用
目的探讨氯化镧对口腔内8种致病细菌的抑制作用.方法液体稀释法进行药敏实验,测定氯化镧对口腔内8种致病菌的MIC与MBC并以常用抗菌药作对照,在液体稀释法中加入噻唑蓝,辅助测定MIC.结果氯化镧对口腔内8种致病菌有不同程度的抑制作用,其中对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、溶血性链球菌及变形链球菌较敏感(MIC 1533μg/ml).引入噻唑蓝所得MIC结果更客观.结论氯化镧对口腔内8种致病菌有程度不同的抑制作用,噻唑蓝在药敏实验中有较好辅助作用.
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噻唑蓝法检测中药复方对人白血病CD34+CD38-干细胞群的影响
目的 运用噻唑蓝(MTT)法检测中药益气养阴方及其拆方后的扶正组方、祛邪组方对人白血病CD34+CD38-干细胞群的影响.方法 免疫磁珠分离人白血病CD34+CD38-干细胞群,MTT法检测中药复方对细胞生长的影响.结果 益气养阴制剂对白血病干细胞的体外抑制率为(24.390±0.046)%,扶正组抑制率为(9.270±0.052)%,祛邪组为(9.370±0.017)%,益气养阴组与扶正组、祛邪组比较差异均有统计学意义(P<0.05),扶正组与祛邪阻比较差异无统计学意义.结论 益气养阴方对白血病干细胞有明显抑制作用.
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莪术油协同卡铂对人卵巢癌耐药细胞株增殖的影响
卵巢癌化疗多采用铂类为基础的联合化疗，目前铂类药物多用卡铂，卡铂是继顺铂的二代铂类化合物，对顺铂耐药株有抑制作用，但因二者生化特性相似，存在交叉耐药，影响了卡铂的临床疗效。如何增加卡铂对顺铂耐药个体的敏感性值得探究。研究证实莪术油可以增加人卵巢癌耐药细胞株SKOV-3/DDP对顺铂的敏感性，增加顺铂对SKOV-3/DDP的细胞毒性［1］。基于此探讨莪术油能否增加SKOV-3/DDP对卡铂的敏感性、增大卡铂对SKOV-3/DDP的细胞毒性就有一定的实验基础和临床意义。本实验以人卵巢癌敏感细胞株SKOV-3及其耐药细胞株SKOV-3/DDP为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）法，研究莪术油协同卡铂对SKOV-3/DDP增殖的影响。
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改良五黄油对体外人表皮干细胞生长的影响
背景:烧伤创面外用药物五黄油具有抑菌、促进创面愈合的作用,但长期临床应用发现该制剂在止痛、抑制瘢痕形成等方面疗效不确切,且促进表皮牛长作用仍有待加强.目的:观察加入黄芪、粉防己碱的改良五黄油不同药物浓度和药物作用时间对人表皮干细胞体外生长增殖的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2005-10/2006-10在南昌大学医学院烧伤研究所细胞培养实验室完成.材料:2-12岁患者包皮环切术后的新鲜包皮(患者对实验内容均知情同意,并自愿捐献),改良五黄油工作液及五黄油工作液由南昌大学第一附属医院药剂科提供.方法:将不同质量浓度的改良五黄油(0,0.15,0.20,0.25,0.30 g/mL)分别加入体外培养的表皮干细胞中,并于5个不同时相点(2,4,6,8,10 d),以五黄油为对照组进行MTT细胞生长增殖检测,观察对细胞增殖影响程度.主要观察指标:利用MTT法在酶标仪上分别测定各组表皮干细胞的增殖率.结果:以0,0.15,0.20,0.25,0.30 g/mL质量浓度药物作用人表皮干细胞,其增殖程度与改良五黄油的质量浓度正相关性;改良五黄油在0.25g/mL和0.30 g/mL质量浓度,相同作用时间(4,6,8 d)对表皮干细胞的增殖率高于五黄油,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:在一定的体外作用时间范围内,改良五黄油对表皮干细胞的促增殖能力与药物质量浓度呈正相关;改良五黄油对体外表皮干细胞的增殖效果好于五黄油.
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碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析
目的探讨生物提取及重组碱性成纤维细胞生成因子(bFGF)的生物学活性.为进一步进行基础与临床研究提供依据.方法将bFGF作用于体外原代培养人脐静脉血管内皮细胞,利用噻唑蓝(MTT)方法,观察对DNA合成的影响.利用鸡胚绒毛囊膜体内试验,观察bFGF对活体血管新生的影响.结果体外和体内活性试验均证实:当bFGF>10ng/ml时,细胞生长呈明显的抑制状态,而bFGF<0.01ng/ml呈现明显生长不良状态.结论bFGF具有广泛的生物学功能,其生物活性的测定为基础与临床的研究提供了实验室依据.
关键词： 碱性成纤维细胞生成因子 生物活性 噻唑蓝 内皮细胞
