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白藜芦醇对舌癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探究白藜芦醇对舌癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 本文选取2017年10月～2018年9月我院收治的84例舌癌患者为研究对象,采用MTT比色法观察白藜芦醇对舌癌细胞的抑制作用,流式细胞仪监测舌癌细胞的周期和凋亡情况,观察细胞凋亡过程中进行荧光染色.结果 通过对实验结果进行分析,发现当白藜芦醇作用舌癌细胞12 h,24 h,48 h和72 h,IC50值分别为184μmol/L,125μmol/L,86μmol/L和51μmol/L,表明白藜芦醇对舌癌细胞有明显的抑制作用;白藜芦醇对舌癌细胞的作用时间为1 h、3 h、5 h和7h,对应的细胞凋亡率为21.75％、49.33％、75.61％和92.64％,表明白藜芦醇可以明显诱导细胞凋亡.结论 通过对舌癌细胞进行白藜芦醇处理,可以明显提高对舌癌细胞的抑制作用,诱导细胞凋亡,对舌癌细胞患者有重要的临床意义.
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化疗对舌癌细胞凋亡和增殖及Bcl-2表达影响的研究
1.资料和方法:收集新疆医科大学第一附属医院病理科1980～2001年手术切除的舌癌石蜡包埋组织42例,其中维吾尔族21例,汉族21例;男性18例,女性24例;高分化鳞癌30例,中分化鳞癌12例;年龄25～65岁,中位年龄50岁;舌癌化疗10例,其中高分化鳞癌6例,中分化鳞癌4例.舌癌化疗标本为术前行颞浅动脉插管,区域性的动脉灌注,用药包括顺铂、长春新碱、平阳霉素;化疗3周后,行手术切除.舌乳头状瘤20例,其中男女各10例,并取正常舌粘膜7例作正常对照,分别进行TUNEL原位末端标记及免疫组化染色.
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原代培养舌癌细胞对抗癌药物敏感性观察
舌癌是头颈部常见的恶性肿瘤,其病因和发病机制尚不清楚,对其生物学特性的了解还不完善,因而影响治疗效果.目前研究表明,恶性肿瘤应进行综合治疗,其中,化疗药物治疗是其重要组成部分之一,但是化疗的疗效除受肿瘤组织学类型影响外,常存在个体差异,致使相同的治疗却结果不同.因此,本研究应用手术切除的新鲜舌癌组织制备单细胞进行培养,以MTT(噻唑蓝)比色法和流式细胞术法,观察临床常用化疗药物的敏感性,为临床化疗提供依据.
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窖蛋白1 mRNA在人舌癌细胞系中的表达
目的:检测窖蛋白1基因mRNA在舌癌不同转移力细胞系中的表达,初步探讨窖蛋白1在肿瘤发生发展中的作用.方法:以舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系及其脑转移株Tb作为研究肿瘤转移分子机制的模型,应用RT-PCR技术检测窖蛋白1 mRNA的表达.结果:窖蛋白1 mRNA在两种细胞中均有表达,其在Tb细胞中的表达水平高于Tca8113细胞.结论:窖蛋白1可能在舌癌转移过程中发挥作用.
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橙皮苷对人舌癌Tca8113细胞体外增殖的影响
目的 探讨橙皮苷对人舌癌细胞株Tca8113体外增殖的影响.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞,采用不同浓度的橙皮苷对其进行干预,用MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对舌癌细胞增殖的影响.结果 橙皮苷可明显抑制舌癌细胞Tca8113的增殖,并且随着浓度的增加,抑制作用明显增强(r=0.825,P<0.05),呈明显浓度依赖性.结论 橙皮苷能明显抑制人舌癌Tca8113细胞体外增殖,可能为临床治疗舌癌提供一种新的化疗药物.
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绿茶提取物EGCG对舌癌Tca8113细胞凋亡的影响
目的 探讨绿茶提取物EGCG对人舌癌细胞株Tca8113体外凋亡的影响.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用AO/EB荧光染色法和DNA琼脂糖凝胶电泳法检测其对舌癌细胞凋亡的影响.结果 在EGCG的作用下,舌癌Tca8113细胞的凋亡具有浓度依赖性.结论 EGCG可能通过增加细胞凋亡达到抗癌作用.
关键词： 没食子儿茶素没食子酸酯 舌癌细胞 凋亡 -
Cx31.1蛋白在舌癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响
目的探讨细胞缝隙连接蛋白(connexin)Cx31.1在人舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪及其Lucifer Yellow划痕荧光传输技术,研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)作用对Tca8113细胞Cx31.1蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。结果 Tca8113细胞经HMBA处理后,流式细胞仪分析,Cx31.1蛋白表达阳性细胞计数率由1.7%上升至30.3%,Tca8113细胞生长明显受到抑制,推测细胞间隙连接通讯功能得到部分恢复。结论 HMBA可上调Cx31.1蛋白在Tca8113细胞中的表达,可能使细胞间隙连接通讯功能得到恢复,并实现对舌癌恶性表型的逆转作用。
关键词： 缝隙连接蛋白 舌癌细胞 细胞间隙连接通讯 流式细胞仪 划痕标记荧光传输技术 -
新型有机硒化合物Eb诱导舌癌细胞凋亡的实验研究
目的体外研究新型有机硒化合物Eb对人舌癌细胞Tca83的诱导凋亡作用.方法体外培养人舌癌Tca83细胞,不同浓度的有机硒化合物Eb作用24h后,通过MTT(四唑氮盐)法和流式细胞仪检测细胞的存活率和凋亡率.结果新型有机硒化合物Eb诱导细胞凋亡,凋亡率随浓度的增强而增加.各浓度组与对照组有显著性差异(P＜0.05),各浓度组之间也有显著性差异(P＜0.05).结论新型有机硒化合物Eb能够诱导细胞凋亡,并且有浓度依赖性.
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英文文摘
1．缺氧肿瘤微环境调节侵袭性口腔癌细胞的入侵（英）／Tep-po S…／／Exp Cell Res．－2013，319（4）．－376－389
侵袭是癌症的一种重要特征，涉及肿瘤微环境和肿瘤细胞之间的相互作用。缺氧，是一种低氧水平，在许多癌症中均与侵袭和转移能力的增强相关。本研究探讨缺氧对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）侵袭的影响和一种新的三维肌瘤器官侵入模型在缺氧实验中的适用性。我们研究了口腔鳞状细胞癌细胞系（原发性口腔癌细胞 UT-SCC-43A，复发性口腔癌细胞 UT-SCC-43B 和侵袭性舌癌细胞 HSC-3）在常氧、缺氧及在氯化钴低氧模拟环境下的迁移和侵袭能力。如预期结果，复发性 UT-SCC-43B 细胞较原发性口腔癌细胞更具侵袭性。相反，舌癌细胞 HSC-3在转移或侵袭实验中对缺氧条件反应较轻，说明缺氧对癌细胞侵袭潜能的影响具有细胞系特异性。通过漂洗组织清除各种潜在的可溶性因子，可改变HSC-3细胞的侵袭模式和缺氧刺激产生的效果。在洗脱后的组织中，缺氧状态可显著提高侵袭性，但在原有完整组织中未发现侵袭性的改变。这说明可溶性因子对侵袭模式和缺氧反应极为重要。缺氧调节赖氨酰氧化酶（LOX）作为一种转移和预后不良的标志物存在于肌瘤组织中，但可经漂洗清除。LOX 的抑制可缩小侵袭范围，但对浸润深度的缩小影响非常有限。据此认为，LOX 可能对侵袭模式的调节具有一定作用。另一个缺氧相关预后不良标志物碳酸酐酶9（CAIX），是由低氧暴露条件下的 HSC-3细胞及在常氧条件下侵入组织内的侵袭性 HSC-3细胞所诱导的。总之，完整肌瘤器官模型可提供佳缺氧环境，是极好的人类肿瘤微环境模拟物。 -
黏着斑激酶基因沉默促进舌癌细胞失巢凋亡的实验研究
目的 观察黏着斑激酶(focal adhension idnase,FAD)基因沉默对口腔舌癌细胞株Tca8113失巢凋亡抗性的影响,探讨FAK基因与口腔鳞癌转移特性的关系.方法 以舌癌细胞株Tca8113为研究对象,首先应用免疫细胞化学和免疫蛋白印记的方法检测FAK基因的表达,然后利用RNA干扰的方法抑制FAK基因的表达.后利用悬浮培养、流式细胞仪的方法观察FAK对口腔舌癌细胞株Tca8113体外培养过程抗失巢凋亡的影响.结果 舌癌细胞株Tea8113体外培养过程中具有较强的抗失巢凋亡特性.特异性siRNA可以抑制FAK基因的表达.FAK基因干扰后,Tca8113细胞的失巢凋亡显著提高(P<0.01).结论 FAK基因沉默可以逆转舌癌细胞株Tea8113体外培养过程中的抗失巢凋亡特性.
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肿瘤坏死因子－α对舌癌细胞增殖活性和重组人骨形态蛋白2相关蛋白及受体的影响
目的：研究肿瘤坏死因子（TNF）－α对经过重组人骨形态蛋白（rhBMP2）2处理后的舌癌细胞增殖活性和相关的信号通路Smad4及受体蛋白的影响。方法复苏舌癌细胞，用MTT法检测TNF－α对舌癌细胞和经rhBMP2处理后的舌癌细胞的增殖活性的影响。 RT－PCR和Western blot检测其对细胞内信号通路Smad4和受体mRNA及受体蛋白表达的影响。结果结果表明TNF－α作用于舌癌细胞及经过rhBMP2处理的舌癌细胞后，细胞的增殖活性明显降低，后者降低更加明显。 TNF－α可以诱导Smad4、BMP2受体mRNA及受体蛋白的表达。结论 TNF－α可以抑制舌癌细胞的增殖，将TNF－α和rhBMP2共同作用于舌癌细胞后，对细胞的增殖抑制更加显著。 TNF－α可以提高Smad4、BMP2受体mRNA及受体蛋白的表达。
关键词： 舌癌细胞 重组人骨形态蛋白2 肿瘤坏死因子-α 重组人骨形态蛋白受体 Smad4 -
橙皮苷抑制人舌癌Tca8113细胞体外增殖的实验观察
橙皮苷(Hesperidin)是由芸香糖和橙皮素组成的糖苷,属于二氢黄酮衍生物,被证实有一定的恶性肿瘤细胞杀灭作用,而未见严重的不良反应.张冬松等[1]报道,橙皮苷能抑制多种体外培养的肿瘤细胞如乳腺癌、肺癌等的生长和增殖.故本项目将橙皮苷引入南方医科大学附属深圳医院口腔科抗舌癌细胞的实验研究,旨在为临床用药提供参考依据.
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5-氟尿嘧啶和顺铂对舌癌细胞的体外杀伤效应及其对端粒酶活性的影响
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(CDDP)对舌癌细胞的体外杀伤效应,并探讨其与舌癌组织中端粒酶表达的关系.方法 将30例舌癌细胞制备成单细胞悬液,分为4组:5-Fu组加入5-Fu;CDDP组加入CDDP;联合用药组加入5-Fu和CDDP;对照组不加任何药物.四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测各组细胞生长抑制效果,PCR-ELISA法检测各组端粒酶活性.结果 与对照组比较,5-Fu组和CDDP组对舌癌细胞有体外杀伤效应,能抑制舌癌组织端粒酶活性,联合用药组效果更佳(P<0.05或P<0.01).结论 5-Fu和CDDP联合用药对人舌癌细胞的抵制具有协同加强作用,其机制可能是对舌癌细胞的端粒酶活性有较强的抑制作用.
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COX-2及其抑制剂在舌癌细胞增殖与凋亡中的研究进展
环氧合酶( cyclooxygenase,COX)是在花生四烯酸的代谢中合成前列腺素( prostaglandins,PGs)的限速酶,目前己知有3个亚型,包括有构建型的COX-1、诱导型的COX-2以及COX的第3种同工酶COX-3[1].其中COX-2在大多数组织的正常生理状态下几乎难以检测到,但在某些因子的刺激诱导下可高表达.舌癌是常见的口腔癌,多数为鳞癌,生长速度快,浸润性强,恶性程度较高,侵及舌肌可使舌活动受限,影响说话和进食,易发生颈淋巴结转移,预后较差,目前的治疗手段主要是以手术为主的综合治疗.
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PTEN基因转染对人舌鳞癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制
目的 探讨PTEN基因转染对人舌癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制.方法 将转染PTEN的SCC-4(pEGFP-PTEN-SCC-4)细胞作为实验组,以SCC-4和pEGFP-SCC-4作为对照,流式细胞仪检测3组细胞凋亡情况；应用Western blotting法检测3组中Akt、p-Akt、Bim的表达情况.结果 流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率比对照组明显增高(P＜0.01)；Western blotting结果显示,各组细胞间总Akt水平差异不明显；p-Akt在实验组中表达明显低于对照组；Bim在实验组中表达明显高于对照组.结论 PTEN转染能够诱导SCC-4的凋亡,可能机制是负调控PI3K/Akt信号通路并上调Bim的表达.
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骨形态发生蛋白2基因转染对舌鳞癌细胞体内外生物学行为的影响
目的 探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)基因转染对体外舌鳞癌细胞的作用及机制,并观察体内转染BMP2基因对严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下移植瘤生长与转移的影响.方法 体外培养舌癌Tca8113细胞,将重组腺病毒介导的BMP2(Ad-BMP2)基因分别按0、50、100感染复数(MOI)转染Tca8113细胞后,采用Western blot检测Ad-BMP2组和PBS组细胞中BMP2、Smad1和Smad5表达的差异.建立SCID鼠肿瘤模型并瘤内注射Ad-BMP2基因,观察肿瘤体积的变化及肿瘤转移情况.结果 Ad-BMP2基因成功转染至Tca8113细胞,MOI为100时转染效率较高,Ad-BMP2组和PBS组细胞中BMP2、Smad1和Smad5的表达差异有统计学意义,P＜0.05,Ad-BMP2组Smad1和Smad5的表达量与BMP2的浓度呈正比.SCID鼠皮下移植瘤的体积在2周后平均增大0.6 cm3,瘤内注射Ad-BMP2基因后,明显抑制移植瘤的生长.肝、脾、肾、大网膜等脏器均未查见肿瘤转移.结论以腺病毒为载体的BMP2在Tca8113细胞中有效表达,Smad1和Smad5蛋白的表达也显著提高.基因转染BMP2显著抑制SCID鼠舌癌移植瘤的生长.
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RNA干扰沉默HIF-1α基因对舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移的影响
目的 观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)基因对人舌癌细胞Tca8113侵袭和迁移的影响.方法 将3个shRNA序列质粒导入pGCsi-H1/Hygro/GFPshRNA质粒表达载体,并将重组质粒经脂质体介导转染人舌癌细胞Tca8113(siHIF-1α组),转染阴性对照质粒的细胞作为空载组.半定量RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α的mRNA及蛋白,细胞侵袭实验和划痕实验检测Tca8113的侵袭和迁移能力,同时采用Western blot法检测其上皮-间质转化(EMT)相关标志蛋白和黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(P-FAK).结果 测序证实成功构建了HIF-1α shRNA重组质粒(分别为sh1、sh2、sh3),将sh3,转染Tca8113后进行低氧培养,HIF-1α基因表达显著被抑制.与空载组相比,转染sh3的siHIF-1α组穿透Matrigel胶的细胞数明显减少,且迁移能力也显著下降,两组相比,P均＜0.05.与对照组(未转染质粒的Tca8113)相比,siHIF-1α组EMT相关标志蛋白和p-FAK蛋白表达下降,两组相比,P均＜0.05.结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因能有效抑制舌癌细胞的侵袭和迁移,在一定程度上可以逆转舌癌细胞的恶性表型.
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白花丹素对舌癌细胞Tca-8113放疗增敏的作用
目的:探讨白花丹素联合X-射线对舌癌细胞Tca-8113的放疗增敏作用及其机制.方法:体外培养舌癌细胞株Tca-8113,分空白对照组、单纯白花丹素组、单纯放疗组及白花丹素联合放疗组；应用MTT法检测白花丹素对舌癌Tca-8113细胞的毒性作用及佳实验浓度；应用克隆形成确定白花丹素的放疗增敏效应；应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；采用Western Blot检测放射单独及联合白花丹素作用于Tca-8113细胞后,细胞核中NF-κB的蛋白表达水平的变化.结果:经MTT检测表明,白花丹素对舌癌Tca-8113生长抑制浓度IC10为1.42 μmol/L(24 h),即为佳实验浓度；经克隆形成检测显示,白花丹素对舌癌Tca-8113细胞具有放疗增敏效应,增敏系数SER为1.28；流式细胞仪分析表明,白花丹素组与放疗组比较,其细胞早期凋亡率无明显差异,而两者联合作用后,舌癌细胞的早期凋亡率显著增高；Western Blot检测显示,白花丹素能够显著抑制放射对Tca-8113细胞核中NF-κB的激活作用.结论:白花丹素能够诱导舌癌Tca-8113凋亡并具有放疗增敏作用,抑制细胞中NF-κB的激活可能是其放射增敏的主要机制.
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Transwell小室环境下小鼠不同器官微环境对人舌癌细胞生长的影响
目的：探讨骨髓和淋巴结微环境对人舌癌细胞SCC-9生长的影响。方法：利用Transwell小室建立微环境与SCC-9共培养体外模型，分为5组：SCC-9单独培养组（对照组），SCC-9+Balb/c小鼠骨髓共培养组，SCC-9+Balb/c小鼠淋巴结共培养组，SCC-9+Balb/c裸鼠骨髓共培养组，SCC－9+Balb/c裸鼠淋巴结共培养组。采用直接计数法分别于24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h检测SCC-9的数量。结果：利用Transwell小室成功构建骨髓、淋巴结微环境与SCC-9共培养体外模型。计数结果显示，SCC-9在Balb/c裸鼠淋巴结共培养组中的增殖程度高于其他4组（P<0.05）；在Balb/c裸鼠骨髓，Balb/c小鼠骨髓和淋巴结共培养组中均低于对照组（P<0.05），且抑制程度无明显差异（P>0.05）。结论：不同微环境可能通过不同的肿瘤休眠机制，控制肿瘤细胞的增殖与休眠，终被动形成淋巴转移的靶向性。
关键词： Transwell小室 共培养 舌癌细胞 微环境 肿瘤休眠 -
骨形态发生蛋白-2基因转染对舌癌细胞增殖活性的影响
目的 探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因转染舌癌Tca8113细胞后,对Tca8113细胞形态和增殖活性的影响.方法 分别以感染复数(MOI)为0、50、100的腺病毒为载体的BMP-2基因转染体外培养的舌癌Tca8113细胞.采用荧光倒置显微镜观察转染前后Tca8113细胞形态的变化,Western blot法检测Tca8113细胞BMP-2的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Tca8113细胞增殖能力,并绘制生长曲线.结果 MOI为100时转染率高,转染前后Tca8113细胞形态变化不大,Western blot检测到Tca8113细胞BMP-2的表达,转染后Tca8113细胞的增殖活性降低.结论 腺病毒介导的人BMP-2在体外能够抑制舌癌Tca8113细胞的增殖活性.
