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醋酸铅引起神经细胞的凋亡
细胞凋亡是一种有别于细胞坏死的受基因调控的细胞主动死亡方式,其生化特征是DNA被激活的核酸内切酶剪切成180～200 bp或其倍数的寡核苷酸片段,含有丰富的3′-OH末端.目前,不少研究表明细胞凋亡可能参与许多异常刺激引起的神经元损害,如缺血缺氧、神经毒物作用、氧化应激及神经系统退行性疾病等[1].近几年,铅与神经细胞凋亡的关系也引起了不少学者的兴趣.Fox[2]和Blankenship[3]相继发现铅可引起体外培养的新生大鼠皮层颗粒细胞及发育期视网膜的视杆细胞和双极神经元发生凋亡.但迄今为止,铅引起神经细胞凋亡的体内动物实验研究在国内外尚缺乏系统详实的报道.本研究采用原位末端标记TUNEL法[4]及HE染色观察亚急性染铅引起的大鼠神经细胞凋亡,并探讨其发生机制.
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黄芪糖蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的研究
目的:探讨黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的诱导作用.方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型,治疗2周后,取外周血、膝关节滑膜组织,分别使用流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)法检测外周血淋巴细胞和膝关节滑膜组织的细胞凋亡情况,使用免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平.结果:低剂量黄芪糖蛋白可提高外周血CD+4、CD+8细胞的凋亡比例(P＜0.05),低、中、高剂量黄芪糖蛋白均可增加膝关节滑膜组织的细胞凋亡率(P＜0.01),同时降低Fas表达水平(P＜0.01),增强FasL表达水平(P＜0.01).结论:黄芪糖蛋白可诱导佐剂性关节炎大鼠外周血淋巴细胞及膝关节滑膜组织细胞凋亡,且调节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平.
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仔猪人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后宿主细胞凋亡动态变化规律的研究
28日龄长白仔猪滴鼻人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),于接种后8h、24h、30h、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d、28d、35d和42d各随机剖杀2头,取各组织器官,利用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测PRRSV感染仔猪后所产生的细胞凋亡情况.结果表明,PRRSV在体内可诱导肺脏、淋巴结(肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结)、扁桃体、脾脏、肝脏、胰脏、十二指肠、胸腺、肾脏、子宫、睾丸、附睾、大脑和小脑等组织的细胞发生凋亡,发生凋亡的靶细胞主要是各种巨噬细胞、单核细胞以及生殖细胞.感染后8h即可检测到细胞凋亡,且凋亡细胞数目随着感染时间的延长在感染后第7d达到高峰,以后逐渐减少,至感染后42d时仍能检测到少量凋亡细胞.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 细胞凋亡 原位末端标记 -
卵丘细胞凋亡对体外培养卵母细胞发育潜能的影响
目的 研究体外培养中卵丘细胞凋亡对卵母细胞结构的影响,探讨体外受精中可用卵丘细胞凋亡率预测卵母细胞发育潜能的原因.方法 对GV期人卵丘-卵母细胞复合体进行体外成熟培养,用HE染色、DAPI染色和原位末端标记(TUNEL)法标记3种方法对单卵卵丘细胞凋亡率进行检测.分为凋亡率高和低的2组,用光镜和透射电镜观察卵母细胞的结构.对MⅡ期卵母细胞进行体外受精,培养2d后在光镜下评价胚胎质量.结果 卵丘细胞凋亡率低的卵母细胞结构和发育潜能良好;卵丘细胞凋亡率高的卵母细胞发育潜能差,存在各种结构异常,包括围卵周隙不均,对应不同部位的细胞质发育不同步;细胞质中出现堆积不均的细胞器团、次级溶酶体、及可能由溶酶体降解造成的大量空隙;线粒体外膜和嵴模糊、膨大,呈现凋亡迹象;第一极体碎裂;透明带异常增厚或变薄.相应的卵丘细胞微绒毛和细胞连接减少.结论 揭示了卵丘细胞凋亡对卵母细胞结构的影响,揭示了卵丘细胞凋亡率影响卵母细胞发育潜能的原因.
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孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响
目的 探讨孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响.方法 从妊娠母鼠第5d酒精灌胃直至小鼠出生;采用激活的半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)免疫组织化学和原位末端标记(TUNEL)法观察P0、P7和P14小鼠视皮质神经元的凋亡.结果 酒精实验组妊娠时间延长,出现死胎和畸形(小头畸形、无脑儿和脊柱脊髓裂等).酒精实验组Caspase-3阳性率和凋亡指数明显高于对照组(P＜0.001),高剂量酒精组明显高于低剂量组(P＜0.01).随着酒精剂量的增加,子鼠视皮质神经元的凋亡明显增加.结论 孕期酒精接触可导致子鼠视皮质神经元凋亡,且有剂量依赖性和长时程效应.
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小鼠雄性生殖细胞生后发育中的程序性死亡
为了观察小鼠睾丸生后发育过程中生殖细胞自发死亡的方式与规律.用生后0、1、4、7、10、13、18和50d A/J系小鼠,一侧睾丸用2.5%戊二醛,另一侧睾丸用4%多聚甲醛固定18h后,分别用树脂或石蜡包埋,制备超薄和连续石蜡切片,进行电镜观察和TUNEL染色光镜观察.电镜观察显示,在出生当日,可见个别呈坏死特征的变性生殖细胞,核质溶解,但无染色质聚集.核周间隙扩大,线粒体和内质网等细胞器肿胀,有空泡形成.细胞膜有突起、出泡现象.生后1d,死亡细胞罕见.生后4d开始见到典型凋亡特征的生殖细胞,并于生后10～13d达到高峰.TUNEL染色见阳性细胞在生后4d开始出现,10～13d达高峰,而后逐渐减少,与电镜观察结果一致.结果表明:小鼠睾丸在发育过程中生殖细胞的自发死亡主要以凋亡的形式发生,在一定时期,则以坏死的方式出现.凋亡的发生与细胞的分裂增殖具有密切关系.
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大鼠应激性溃疡胃黏膜nNOS/iNOS表达对细胞凋亡的影响
目的:探讨细胞间信息传递因子NO在胃黏膜遭受应激损伤时的变化及与细胞凋亡发生的关系.方法:原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠水浸-束缚应激(WRS)结束前后不同时间点细胞凋亡的发生;免疫组化的方法检测胃黏膜组织nNOS/iNOS蛋白表达的变化;检测不同剂量的NO合成抑制剂L-NAME对细胞凋亡的影响.结果:iNOS蛋白表达与细胞凋亡的变化呈显著正相关;nNOS蛋白表达与细胞凋亡变化呈负相关;与对照组比较,小剂量L-NAME(2.0 mg/kg)可降低凋亡细胞发生率34.6%(P＜0.01);大剂量L-NAME(20.0 mg/kg)明显增加凋亡细胞发生率25.8%(P＜0.05).结论:正常生理状态下及应激初期,胃黏膜以nNOS表达为主.若应激源持续存在,nNOS表达受抑制,iNOS表达增强,诱导合成大量NO,有明显细胞毒作用,促进细胞凋亡发生.
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胃肠道间质瘤端粒酶活性与细胞凋亡及p53、Bcl-2表达的关系
目的:探讨端粒酶活性、细胞凋亡及p53、Bcl-2基因表达与胃肠道间质瘤(GIST)生物学行为的关系.方法:分别采用端粒酶活性试剂盒、原位末端标记和免疫组织化学的方法对38例GIST标本进行端粒酶活性、细胞凋亡和p53、Bcl-2基因表达的检测,并结合临床病理资料进行分析.结果:GIST端粒酶活性阳性率在恶性中为85%(17/20),在潜在恶性中为22.8%(2/9),在良性中为0(0/9)(P＜0.01);GIST细胞凋亡指数在恶性中为11.7±5.4,在潜在恶性中为30.2±5.6,在良性中为45.2±7.2(P＜0.05);端粒酶阳性组细胞凋亡指数为9.5±5.7,阴性组为22.9±8.4(P＜0.01);端粒酶阳性组p53阳性表达率为78.9%,阴性组为40.0%(P＜0.05);端粒酶阳性组Bcl-2阳性表达率为84.2%,阴性组为40.0%(P＜0.05).结论:端粒酶活性、细胞凋亡与GIST良恶性有关,他们的检测有助于GIST的临床病理诊断.
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进展期胃癌病理和预后影响因素的关系
目的:研究机体免疫因素和肿瘤生物学行为与进展期胃癌病理之间的相关性,比较并筛选对进展期胃癌预后有影响的指标.方法:获得6l例行根治性切除术的进展期胃癌预后资料,用免疫组化(SABC法)和TUNEL(原位末端标记)方法检测组织切片中胃癌细胞增生细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)、树突状细胞(DCs,dendritic cells)浸润密度,凋亡指数(AI,apoptosis index),研究上述指标和病理之间的相关性并进行单因素、多因素生存分析.结果:PCNA-LI,DCs,AI与TNM分期、淋巴结转移、淋巴管浸润、胃癌分化有相关性.单因素生存分析表明胃癌患者的年龄、性别、病灶的大小、肿瘤分化、是否有淋巴管癌栓、AI等与胃癌预后无关.胃癌分期、浸润深度、淋巴结转移、PCNA-LI、DCs浸润密度是胃癌预后的影响因素(Log-ranktest,P＜0.05).多参数回归生存分析表明肿瘤大小(RR=2.328),UICC(1997年)TNM分期(RR=5.251)是胃癌预后的独立影响因素(P＜0.05).结论:UICC的胃癌TNM分期是判断胃癌预后有价值的指标.胃癌细胞本身生物学特性和机体的免疫状态与胃癌病理有一定相关性并且参与了对胃癌预后的影响.
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兔脊髓冲击伤后神经细胞Bcl-2及Bax基因表达与原位末端标记法检测凋亡的比较
目的 检测兔脊髓冲击伤后早期神经细胞Bcl-2及Bax基因表达,并与原位末端标记检测的基因断裂作比较,评价两者在检测脊髓神经细胞的凋亡方面的意义和一致性.方法 建立50只T9,10段脊髓损伤的兔脊髓冲击伤模型,随机分为5组(n=10),分别在伤后4、12、24、48、72 h不同时间点,分别取各组脊髓组织检测Bax、Bcl-2的表达,并与原位末端标记检测细胞凋亡进行比较,另取10只家兔作对照组.结果 Bax在伤后4h呈阳性表达,表达高峰在伤后24～48 h,Bcl-2在伤后12h呈阳性表达,表达高峰亦在伤后24～48 h,而但表达强度始终弱于Bax;TUNEL检测的基因断裂的变化趋势与Bax趋势相似.结论 兔脊髓冲击伤后早期促进凋亡因子表达占主导,而保护性因子的表达相对不足,基因断裂,促进脊髓神经细胞凋亡.
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神经生长因子对乙酰胆碱受体抗体致中枢损害的保护作用
重症肌无力(MG)是一种可累及中枢神经系统(CNS)的自身免疫性疾病.我们曾发现MG CNS损害模型大鼠脑中Fas/FasL表达增强,细胞出现凋亡,提示凋亡机制在MG致CNS损害中可能起重要作用[1].我们用原位末端标记(TUNEL)法观察MG CNS损害模型大鼠脑细胞凋亡情况,对实验组部分动物同时应用神经生长因子(NGF)进行干预治疗,以探讨可能对策.
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Bcl-2、fas蛋白在颞叶癫痫病灶内的表达与神经元凋亡
海马硬化是颞叶癫痫常见的病理类型,其主要表现为神经元脱失和胶质细胞增生.以往研究认为,神经元坏死是导致海马硬化的主要原因;近年来一些的动物实验表明[1,2],神经元凋亡可能参与了这一病理过程.但目前尚有争议,有学者在动物实验中研究发现癫痫发作导致神经细胞坏死而非凋亡[3,4].为进一步探讨海马硬化与神经元凋亡的关系,本文采用颞叶癫痫病人手术切除的颞叶病灶,联合应用光镜、电镜及原位末端标记(TUNEL)方法检测神经细胞凋亡,同时应用免疫组化的方法检测凋亡相关基因bcl-2及fas蛋白的表达.
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化疗对舌癌细胞凋亡和增殖及Bcl-2表达影响的研究
1.资料和方法:收集新疆医科大学第一附属医院病理科1980～2001年手术切除的舌癌石蜡包埋组织42例,其中维吾尔族21例,汉族21例;男性18例,女性24例;高分化鳞癌30例,中分化鳞癌12例;年龄25～65岁,中位年龄50岁;舌癌化疗10例,其中高分化鳞癌6例,中分化鳞癌4例.舌癌化疗标本为术前行颞浅动脉插管,区域性的动脉灌注,用药包括顺铂、长春新碱、平阳霉素;化疗3周后,行手术切除.舌乳头状瘤20例,其中男女各10例,并取正常舌粘膜7例作正常对照,分别进行TUNEL原位末端标记及免疫组化染色.
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大鼠实验性脑震荡的病变规律和神经细胞凋亡研究
采用Wistar大鼠复制脑震荡动物模型,于伤后1、3、7、14及30天活杀取脑组织,经光镜、电镜和原位末端标记等技术研究脑震荡的病变规律及神经细胞凋亡情况.结果显示,100g砝码于1m处撞击大鼠头部可复制大鼠脑震荡的模型,其基本病变为脑血管扩张、淤血、出血、脑组织水肿,神经元变性、凋亡和坏死,尼氏体减少甚至消失.伤后1～3天,脑组织呈点灶状坏死,周围组织疏松,单核及泡沫样细胞增多,神经元变性、凋亡和坏死.7天脑水肿达高峰,海马锥体细胞减少,呈极度缺血性改变.14～30天仍见血管扩张、淤血,可见出血,水肿好转.原位末端标记显示,伤后1天见凋亡细胞增多,3天数量达高峰,伤后30天凋亡的神经元持续存在.结果提示,脑震荡以血液循环障碍和实质细胞变性、凋亡和坏死为主要病理改变;神经细胞凋亡是脑震荡神经元迟发性损害的主要形式之一.
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滑膜肉瘤中细胞凋亡、增殖活性的预后意义
滑膜肉瘤是一种高度恶性的软组织肉瘤,预后较差,但关于其预后因素的研究相对较少.本研究使用原位末端标记(TUNEL)技术检测滑膜肉瘤的细胞凋亡情况,免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53及细胞增殖指标Ki-67的表达,分析它们的预后意义,为了解滑膜肉瘤的生物学行为、指导治疗和判断预后提供依据.
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大鼠嗅觉神经元凋亡的相关研究
目的 研究凋亡是否参与嗅上皮正常生理更替和嗅球摘除后嗅觉神经元死亡后再生过程,探讨凋亡与神经元再生的关系.方法 应用原位末端标记法观察正常成年人鼠嗅上皮和摘除嗅球后大鼠嗅上皮12、24、48 h和8 d中凋亡的出现和改变情况.结果 正常成年大鼠嗅上皮中有末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)阳性细胞((2.35±0.43)个/200 μm],摘除嗅球后TUNEL阳性细胞数增加,24 h达峰值[(102.37±19.33)个/200 μm],以后迅速下降,维持于低水平.结论 凋亡参与成年嗅觉神经元生理性更替以及实验性嗅觉神经元死亡和再生的过程.可能是通过直接或间接的信号传导调节神经元前体细胞的增殖和分化.
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美络宁对大鼠重型颅脑创伤后海马区神经元凋亡的影响
美络宁能够明显改善脑损伤后患者的预后,做为神经营养药物被广泛应用于临床,但其对创伤后神经元凋亡的影响报道较少.我们于2000年9月-2001年12月,利用稍加改良的Marmarou大鼠重型闭合性颅脑创伤模型[1],采用原位末端标记TUNEL法观察脑创伤后海马区神经元凋亡的变化,为进一步探讨美洛宁治疗脑创伤的作用机制提供依据.1 材料与方法1.1. 实验动物分组取288只健康成年雄性Wistar大鼠(购自北京大学医学部实验动物中心),体重300～350g,随机分成脑创伤组、假手术组及美络宁治疗组.每组又分别划分为伤后3,6,12,24,48,72,168,336h等8个时相组,各时相组均为12只大鼠,另取12只大鼠作为正常对照组.1.2. 大鼠闭合型脑创伤模型制备大鼠于致伤前0.5h,经腹腔注射阿托品(0.1mg/只).
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舌苔上皮细胞凋亡与厌食症患儿舌苔变化的研究及药物干预作用
目的:探讨厌食患儿舌苔上皮细胞凋亡及运脾中药的干预作用.方法:采用原位末端标记(TONEL)法检测厌食患儿舌苔上皮细胞凋亡水平.结果:厌食症患儿各组治疗前与正常组的凋亡指数差异有显著性(P＜0.05),而各组治疗后与正常组差异无显著性(P＞0.05).结论:证实了厌食症患儿舌苔异常改变(厚腻苔或花剥苔)与舌苔上皮细胞凋亡程度呈相关性,也证实了运脾化湿中药可调控其相应的变化.
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原位末端标记技术观察双歧杆菌诱导实验性大肠癌的凋亡
本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将实验分为双歧杆菌注射组以及肿瘤对照组,用原位末端标记法观察了移植瘤组织的凋亡细胞百分率.结果显示:双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤的凋亡细胞百分率为264.28±18.62,而对照组则为20.62±8.80,两者比较具有显著的统计学意义(P＜0.001).提示青春型双歧杆菌可诱导大肠癌组织的凋亡,这可能是其抑瘤机理的一个方面.
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电离辐射对小鼠淋巴结皮质细胞凋亡的影响
目的:研究不同剂量X射线全身照射对小鼠淋巴结皮质细胞凋亡的影响.方法:采用原位末端标记(TUNEL)法检测高、低剂量电离辐射后肠系膜淋巴结皮质中细胞凋亡情况.结果:淋巴结皮质的不同区域对高、低剂量电离辐射的敏感性均不同.结论:低剂量辐射所致的小结间区及深皮质区凋亡细胞数减少,是低水平辐射兴奋效应的一种表现.
