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青春型双歧杆菌脂磷壁酸对巨噬细胞的免疫活性影响
双歧杆菌的脂磷壁酸(lipoteichoic acid, LTA)有较强的免疫活性作用,能激活巨噬细胞以及增强单核细胞的呼吸暴发.作者观察了青春型双歧杆菌的LTA刺激小鼠腹腔巨噬细胞后分泌的TNF-α活性以及IL-12、NO的含量,同时检测巨噬细胞的体外杀瘤活性,旨在探讨它对巨噬细胞的免疫调节作用.
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双歧杆菌黏附素的提纯及鉴定
目的:双歧杆菌已广泛应用于益生菌及发酵乳的研制.由于双歧杆菌黏附于肠黏膜表面是其发挥作用的首要条件,开展对其黏附机制的研究有着重要意义.但目前有关双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的黏附机制所知不多,我们从青春型双歧杆菌中分离及纯化其黏附素.方法:黏附试验为检测青春型双歧杆菌与人肠上皮细胞系Lovo细胞间的黏附.收集双歧杆菌培养上清并用300 g/L硫酸铵沉淀,在4℃下8000r/min离心30min收集沉淀物.沉淀物溶解于0.01 mol/L pH7.4 PBS,加入至0.02 mol/LpH7.0 PBS平衡的Superdex 75柱中进行洗脱,速度为0.7mL/min,226 nm波长检测光密度ABS值.收集合并活性组分,冷冻干燥.干燥物溶解后加入至0.05 mol/L pH8.0PB平衡的Q-Sepharose FF柱中,先用同一缓冲液洗脱,然后分别用含0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L及1.0mol/L氯化钠的0.05 mol/L,PB进行阶段洗脱,速度为1.5 mL/min,检测各峰黏附活性,活性组分用SDS-PAGE进行分析.结果:使用硫酸铵沉淀对双歧杆菌黏附素进行了分离,沉淀物进一步经Superdex 75凝胶过滤和Q-SepharoseFF离子交换色谱纯化.结果黏附素不能结合与Q-Sepharose柱,经SDS-PAGE分析,证实纯化的黏附素成分基本单一,其M约为16ku.结论:双歧杆菌黏附素可能为一种M 16 ku的蛋白质,并且存在于培养液上清中.
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青春型双歧杆菌的抗菌作用及其成分分析
目的探讨青春型双歧杆菌的抗菌作用及其成分.方法利用自己筛选的青春双歧杆菌,经培养取其上清液,用Sevage法提取蛋白,无水乙醇提取多糖,制备蛋白及多糖水溶液,采用管碟法测定培养物上清液、蛋白及多糖水溶液的抗细菌和真菌能力.结果培养物上清液及多糖水溶液有一定的抗菌能力,且对革兰阳性菌作用较强;经比较分析,多糖是抗菌作用的主要组分.结论青春型双歧杆菌能分泌抗菌物质,具有一定的开发价值.
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原位末端标记技术观察双歧杆菌诱导实验性大肠癌的凋亡
本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将实验分为双歧杆菌注射组以及肿瘤对照组,用原位末端标记法观察了移植瘤组织的凋亡细胞百分率.结果显示:双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤的凋亡细胞百分率为264.28±18.62,而对照组则为20.62±8.80,两者比较具有显著的统计学意义(P＜0.001).提示青春型双歧杆菌可诱导大肠癌组织的凋亡,这可能是其抑瘤机理的一个方面.
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双歧杆菌对裸鼠腹腔巨噬细胞产生IL-6、IL-12及NO的影响
双歧杆菌是人体肠道内主要的生理性细菌.目前证实它能激活机体免疫系统中的巨噬细胞、NK细胞及其它免疫效应细胞,使之分泌IL-1、TNF-α及IFN-γ等细胞毒性效应分子[1].本文以ELISA及Griess试剂分别检测了青春型双歧杆菌刺激裸鼠腹腔巨噬细胞分泌的IL-6、IL-12和NO的含量,旨在探讨它们在双歧杆菌调节免疫反应中的作用.
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青春型双歧杆菌联合孟鲁司特治疗儿童哮喘的疗效观察
目的 观察分析青春型双歧杆菌联合孟鲁司特治疗儿童哮喘的疗效.方法 选择我院2015年1月至2017年2月收治的哮喘患儿220例,随机分成对照组和实验组,各110例.对照组选择孟鲁司特治疗,实验组以青春型双歧杆菌联合孟鲁司特治疗,观察两组患儿临床疗效和肺功能改善情况.结果 对照组与实验组临床治疗效果比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,两组患者FEV1、PEF比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,实验组患者FEV1、PEF较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 青春型双歧杆菌联合孟鲁司特治疗儿童哮喘具有显著的临床疗效,改善患儿体能,提高肺功能,且安全性好,临床可推广使用.
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双歧杆菌对兔VX2瘤HIF-1α和VEGF表达的影响
目的:探讨青春型双歧杆菌对兔VX2瘤组织HIF-1α、VEGF表达的影响.方法: 建立兔荷VX2瘤模型20只,随机分成2组,每组10只.对照组经耳缘静脉注射生理盐水,实验组经耳缘静脉注射青春型双歧杆菌.处死动物,取出脏器和肿瘤组织粉碎后进行厌氧培养和革兰染色,观察双歧杆菌对肿瘤的靶向性;另取部分肿瘤组织H-E染色观察肿瘤组织的形态学变化;应用免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGF的表达.结果: 青春型双歧杆菌能够靶向定植于肿瘤组织中;经双歧杆菌治疗后实验兔肿瘤组织坏死面积明显增加.免疫组化显示实验兔VX2瘤组织中HIF-1α、VEGF阳性表达细胞密度显著低于对照组(P<0.05),且两组中HIF-1α与VEGF的表达呈显著正相关(r=0.86).结论: 青春型双歧杆菌能够在兔VX2瘤组织中靶向定植,且能下调兔VX2瘤中HIF-1α和VEGF的表达.
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双歧杆菌对兔VX2瘤组织的靶向性及其对肝癌细胞抑制作用的研究
目的 探讨青春型双歧杆茵对兔VX2瘤肿瘤组织的靶向性及其对人肝癌细胞的体外抑制作用.方法 ①建立荷VX2瘤兔模型,实验组经耳缘静脉注射青春型双歧杆菌;对照组经耳缘静脉注射生理盐水.处死动物,取出脏器和肿瘤组织粉碎后进行厌氧培养和革兰氏染色,观察双歧杆菌对肿瘤的靶向性.②采用超声波细胞粉碎法提取双歧杆茵细胞壁(BCW),应用MTT法和镜下观察来证明BCW体外对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用.结果 ①实验组瘤组织中可见革兰氏阳性菌落,对照组及实验组各正常组织培养未查见.②不同浓度BCW均能抑制HepG-2细胞生长,且BCW浓度越大,抑制作用越强(P<0.05),且镜下观察到HepG-2细胞的生长状态逐渐减弱.结论 青春型双歧杆菌能够在兔VX2瘤组织中靶向定植,且其细胞壁能够在体外抑制肝癌细胞的生长.
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双歧杆菌粘附大鼠肠上皮细胞相关因素的研究
目的以青春型双歧杆菌粘附大鼠肠上皮细胞株IEC-6为实验模型,探讨影响粘附的相关因素.方法采用体外定量微生物分析方法观察粘附等指标.结果双歧杆菌粘附需要一定时间、浓度、温度的作用,且酸性环境有利于粘附,胰蛋白酶能完全抑制其粘附.结论双歧杆菌能粘附于肠上皮细胞表面,其粘附素成分可能为细胞壁中的蛋白成分和脂磷壁酸.
