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影响去离子水质量的主要因素及排除方法
利用电渗析和离子交换柱除去原水中的各种杂质可得到去离子水,而去离子水的质量直接决定了医用注射液的质量.本文通过理论分析并结合近二年的实际操作,列出了与去离子质量有关的主要因素,并提出一些相应见解.
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医用纯水制作技术原理及要素分析
探讨和介绍了医用纯水的制作技术进展.传统的蒸馏方法因其高成本,低产水量、低效率已逐渐被一些新技术所取代.随着医院感染控制制度的完善和不断提高的标准要求,医院对超纯水使用的要求也不断提高,使得水纯化设备的技术更新成为必然趋势.本文介绍几种常用的水纯化技术原理及要素,供同行参考.
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一种廉价、高效、实用的超纯水处理设备
现代检验医学新方法、新手段层出不穷,实验仪器日新月异.但随着该学科的发展与进步,对实验用水的要求越来越严格,使传统的运用蒸馏水的时代即将成为过去.本文介绍一种超纯水处理设备,它巧妙地应用电渗析和离子交换技术,在全自动化电气控制下,能实现由普通自来水到超纯水的连续制备.
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离子色谱法测定食品中硝酸盐和亚硝酸盐
目的 建立同时测定食品中硝酸盐和亚硝酸盐的离子色谱方法 .方法 采用超声提取、固相萃取柱净化的方法 对试样进行前处理,高容量阴离子交换色谱柱分离,抑制型电导检测器检测.结果 亚硝酸盐和硝酸盐的检出限分别为0.005 mg/L和0.008 mggL,回收率均在80%以上,RSD小于10%.结论 该方法 简便快捷、准确可靠,适用于多种食品基质中亚硝酸盐和硝酸盐的分析.
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建立同时测定调味品中非法添加的4种工业染料的SPE-UPLC-MS/MS法研究
目的 建立SPE-UPLC-MS/MS检测方法测定调味品中非法添加的碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄等工业染料.方法 以含50%甲醇、1%甲酸的50 mmol/L乙酸铵水溶液作为提取溶液,利用WAX弱阴离子交换固相萃取柱对样品进行净化,UPLC-MS/MS测定碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄含量.结果 方法的线性范围:碱性橙、酸性橙Ⅱ及酸性金黄0.0～500.0 ng/ml;碱性玫瑰精0.0～25.0 ng/ml,r≥0.992 2.方法 的定性检出限为:碱性橙、酸性橙Ⅱ及酸性金黄7.0μg/kg;碱性玫瑰精0.1μg/kg.定量检出限为:碱性橙、酸性橙Ⅱ及酸性金黄20.0μg/kg;碱性玫瑰精0.3μg/kg.高、低两个浓度水平的加标回收率89.5%～120.9%/相对标准偏差6.4%～27.1%.结论 本方法灵敏、准确,可用于调味品中碱性橙、碱性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性金黄等非法添加的工业染料的同时测定及确证.
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自动淋洗-电导抑制离子色谱法测定食品中甜蜜素
目的 建立自动淋洗液发生装置-电导抑制离子色谱测定食品中甜蜜素的方法.方法 对试样采取沉淀的前处理方法,采用AS18阴离子分析柱分离,自动淋洗液发生器,生的高纯氢氧化钾进行淋洗,电导抑制检测.结果 甜蜜素含量在0.1～100.0 mg/L范围内,其峰面积与甜蜜素的浓度呈良好线性关系(r=0.999 9),定性检测限(LOD)为0.030 mg/kg,定量检测限(LOQ)为0.10 mg/kg,回收率在95.6%～105.3%之间,相对标准偏差为1.3%～2.2%.结论 该方法简单、快速、测定结果可靠,能应用于食品中甜蜜素的检测.
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离子色谱法测定原料乳中蛋白质含量
目的 建立测定原料乳中蛋白质的离子色谱法.方法 用15%三氯乙酸沉淀原料乳中蛋白并抽滤得滤液,用硫酸-双氧水体系分别消解原料乳及滤液,用20 mmol/L的甲烷磺酸作淋洗液,Ionpac CS12A色谱柱,DS-6电导检测器测定原料乳及滤液中的NH4+-N含量,两者之差乘以转换系数即为蛋白质含量.结果 蛋白质(以NH4+-N计)在0.2～10 mg/L范围内线性良好,该方法的定量限为0.038 g/100 g,加标回收率为90.0%～105.0%,相对标准偏差(RSD)为1.06%～5.38%.结论 本法简便、快速、准确,灵敏度及精密度高,适用于原料乳中蛋白质含量的测定.
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制备离子交换纯水的树脂毒化及其处理方法
用离子交换纯水洗涤玻璃器皿,配制医用溶液和消毒液,可避免杂质干扰,对消毒液尚可保证其杀菌效果.通常,离子交换纯水装置操作方便、安全可靠、成本低,制出的水质较好.但是,长期使用后,树脂颜色加深,或出现黑一块、白一块的现象,称之为树脂毒化.使用毒化后的树脂,制出纯水的质量与容量均明显下降.
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建立无机砷形态的检测方法及在大米基质检测中的应用
目的 采用新型离子交换柱技术建立高效、灵敏的无机砷的检测方法,并检测大米基质中的砷含量.方法 基于新型离子交换柱,对大米中无机砷分析的前处理方法、液相分离及质谱测定条件进行优化,终砷形态化合物以新型离子交换柱分离,液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法进行检测.采用外标法定量,通过检测大米样品和大米标准样品中砷形态化合物含量,对方法的检出限、精密度和准确度进行评价.同时选取3种广东市售大米作为本研究的实验样品,每份称取试样1 g,平行测量3次,将本方法与国家标准中的液相色谱-原子荧光光谱法(LC-AFS)、液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(LC-ICP-MS)进行比较.结果 经检测,在以0.5％硝酸溶液在65℃超声水浴条件下,对大米中无机砷萃取1.5 h,调节pH至碱性时,大米的平均提取效率高(>93％).以流动相A(8 mmol/L HNO3,50 mmol/L NH3·H2O)和流动相B(40 mmol/L HNO3,80 mmol/L NH3·H2O)为流动相梯度洗脱,在射频功率1500 W,雾化气流量0.97 L/min的测定条件下,5种砷形态化合物能达到基线分离,检出限范围在0.114～0.331μg/L,大米样品中无机砷含量为0.063～0.232 mg/kg,测定大米粉标准物质中砷形态化合物结果均在其标示的不确定范围内,加标回收率为86.7％～106.7％,测定精密度分别为1.9％～12.5％.与国家标准相比,大米中砷酸盐中的测定结果较为接近,采用本研究、LC-AFS、LC-ICP-MS检测大米样品1砷酸盐的含量分别为0.231、0.226、0.236 mg/kg,而国标方法由于灵敏度不足,难以检出低含量砷形态化合物(大米样品1中均未检出砷甜菜碱).方法可检出大米样品1中的砷甜菜碱含量为0.023 mg/kg.结论 本研究建立的方法能满足大米中无机砷的测量需求,相比现行国标,能较大程度地缩短了检测时间和提高效率,同时也降低了方法检出限,提高了方法灵敏度.
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急性脊髓损伤与基因表达(二)
5离子通道基因钾离子通道蛋白(putative K+ channel protein),电压门控型钾离子通道PK5(voltage-gated K+ channel PK5),电压门控型钾离子通道RK5(voltage-gated K+ channel RK5),钾离子通道TWIK(K+ channel TWIK),钾离子通道蛋白KSHⅢA3(K+channel protein KSHⅢA3),钠、钾离子腺苷三磷酸酶α2(Na+,K+ -ATPaseα2),钠离子通道Ⅰ(Na+ channel Ⅰ),钠钙离子交换蛋白基因NCKX2(Na+/Ca2+exchanger NCKX2),钙-腺苷三磷酸酶2(C2+ ATPase 2)在脊髓损伤后均下调,提示离子通道关闭,各种离子交换功能障碍.
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地黄中梓醇的分离纯化工艺探索
地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libsch 的块根.是常用补益中药之一,临床应用极为广泛.据文献报道,地黄的化学成分以苷类为主,其中又以梓醇等环烯醚萜苷类为主[1-4],此类化合物结构近似,极性极大,而且稳定性极差.本研究以地黄降血糖成分梓醇为检测指标,采用大孔吸附树脂、离子交换树脂柱层析法,对梓醇的分离纯化进行了工艺研究探索,并获得了满意结果.
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离子交换和亲和层析两种方法对糖尿病大鼠糖化血红蛋白检测的比较
探讨离子交换和亲和层析高效液相法对糖尿病大鼠糖化血红蛋白检测的影响及比较.应用离子交换法(使用Bio-Rad的Variant II糖化血红蛋白仪)和亲和层析高效液相法(使用Primus的Ultra2糖化血红蛋白仪)对不同血糖水平的Wistar大鼠进行糖化血红蛋白的检测.亲和层析高效液相法检测的总糖化血红蛋白(GHb)随血糖浓度的升高而升高,血糖浓度从3.6mmol/L开始升高,GHb的值从4.4%到16.1%,与血糖的相关性好.离子交换法测定的HbA1随血糖浓度升高而升高,但与血糖相关性不明显.亲和层析高效液相法测定的GHb能较准确的反映糖尿病大鼠糖化血红蛋白水平,可用来评价糖尿病大鼠的血糖变化.
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人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化方法比较
我国现行的人用浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗,虽然免疫效价可达到2.5IU/剂以上,但因其为3～5倍的浓缩液,杂蛋白含量高,接种者副反应率明显上升.为此我们用蔗糖密度区带离心法、DEAE-sepharose离子交换柱层析法及sepharose凝胶柱层析法,对浓缩疫苗进行纯化效果试验.
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腹水型单克隆抗体纯化方法的研究
目的：比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果，探索出适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的 IgG1单克隆抗体腹水（4-D10）分别利用两步硫酸铵沉淀法（AS 法）、辛酸-硫酸铵沉淀法（CA-AS法）、辛酸-硫酸铵沉淀法联合 DEAE 阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白 G 亲和层析法纯化处理后，经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后，比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果① AS 法的蛋白纯度为25%，低于 CA-AS 法（44%）；AS 法回收率为63%，高于 CA-AS 法（41.8%）；比较抗体效价表明，AS 法（1.024×106）与 CA-AS 法（1.024×106）两者相当。②粗提后纯化效果表明，蛋白 G亲和层析法回收率明显降低，DEAE 纯品虽纯度略低，但回收率较高，且效价（5.12×105）高于蛋白 G 亲和层析法（1.28×105）。结论 CA-AS 联合 DEAE 离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。
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离子交换膜层析纯化重组HBsAg 的研究
目的 评价离子交换膜层析方法纯化CHO 细胞表达的重组HBsAg 的效果以及该方法替代传统超速离心方法和离子交换柱层析方法的潜力.方法 取3 种不同纯化阶段的CHO 细胞C28 株表达的重组HBsAg 样品进行试验,样品1 为重组HBsAg 经疏水层析柱纯化而成,样品2 为样品1 再经超速离心而成,样品3 为样品2 再经凝胶过滤层析而成.分别采用小试级别离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 和中试级别离子交换膜层析系统Sartobind MultiSep ion exchange modules 对HBsAg 样品1 进行纯化,以HBsAg、总蛋白回收率及CHO 细胞残留蛋白含量评价纯化效果,并观察不同膜层析洗脱流速(60、120、180、240 cm/h)对离子交换膜层析系统HBsAg 载量和纯化效果的影响.采用离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 对3种不同纯化阶段的HBsAg 样品进行层析并比较纯化效果.每个批次样品的试验均重复3 次.结果 HBsAg 样品1 经两种SartobindQ 离子交换膜层析系统进行纯化的效果无明显区别,均可有效去除杂蛋白,CHO 细胞残留蛋白含量均低于0.05%,且HBsAg 的回收率均大于80%.在洗脱流速60 ～ 240 cm/h 范围内离子交换膜HBsAg 载量保持恒定,未见流速对纯化结果产生明显影响.3 种不同纯化阶段的HBsAg 样品经离子交换膜层析系统SartobindQ MA75 down scale units 纯化后均能达到满意的纯化效果,HBsAg 回收率分别为89.7%、92.3% 和94.1%,CHO 细胞残留蛋白含量分别为0.03%、0.02% 和0.01%.结论 离子交换膜层析方法对CHO 细胞表达的重组HBsAg 纯化效果良好,有望替代传统的超速离心方法和离子交换柱层析方法.
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单克隆抗体电荷异构体分离方法优化
单克隆抗体是复杂的四聚体糖蛋白，常呈现微观不均一性，即“异质性”，包括电荷、疏水、形态等相关的异构体[1]。这些异构体可能来自于抗体分子复杂的生物合成途径，如细胞系及培养工艺[2]，也可能来自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段[1]。其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷异构体，一般分为酸性异构体和碱性异构体，产生原因主要与翻译后修饰有关。电荷异构体宏观表现为在等电聚焦电泳图上出现弥散或多个条带；离子交换色谱图主峰前后出现小峰。由于这些异构体可能会影响抗体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学，特征性地识别和分离电荷异构体是至关重要的。基因泰克公司曾对上市抗体及临床前抗体药物关于电荷变化产生的药效、药代等方面的影响做过一个总结，结果表明：①当电荷变异超过一个 pH单位时，会影响药物的组织分布及药代动力学；②增加正电荷，会提高药物的组织停滞，降低血液清除；③降低正电荷，会减少药物的组织停滞，提高药物的全身清除[3]。因而分离电荷异构体，得到均一性质的抗体是一个关键的挑战，尤其在生物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药保持一致。
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戊型肝炎病毒ORF2的构建表达和纯化
目的 获取有免疫原性的戊肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值.方法 经密码了优化后人工合成戊型肝炎病毒(HEV) HEV-ORF2(aa 368-607)基因,克隆入表达载体pET43a中,构建重组表达质粒pET43a-HEV并进行原核表达;经阴离子交换纯化后通过Western Blotting和ELISA鉴定该蛋白.结果 酶切鉴定及测序结果均显示表达质粒构建正确;SDS-PAGE电泳结果显示该蛋白与预期相对分子质量大小一致;Western Blotting和ELISA结果显示该蛋白能与戊肝抗体特异性结合.结论 成功获取了纯度很高且有生物活性的戊肝抗原蛋白,为研制新型检测试剂盒提供理论基础和方案.
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霍乱弧菌O1群和O139群NhaA基因的克隆和变异性研究
霍乱弧菌是一种嗜盐性细菌,可在较宽盐浓度和pH值范围内生长,Na+/H+离子交换泵与此密切相关.NhaA基因所编码的NhaA蛋白是维持该离子交换泵必需的功能蛋白.NhaA基因的变异可使霍乱弧菌适应不同的外环境而得以生存.为了解我国霍乱弧菌O1群和O139群NhaA基因的变异性与致病性的关系,我们采用PCR和序列分析的方法,对来源于我国广东省和内地部分省份的40株霍乱弧菌(包括O1群和O139群)NhaA基因进行克隆和序列比较分析.
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IFCC参考方法在五种糖化血红蛋白检测系统评价中的应用
目的 以国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)糖化血红蛋白参考方法为参比方法,对4个离子交换高效液相色谱法检测系统和1个毛细管电泳检测系统进行方法学评价研究.方法 制备40个浓度水平的溶血液样本,分别用IFCC参考方法和待评价的5个糖化血红蛋白检测系统进行测定,按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A3文件的程序进行正确度验证.使用全血样本,对5种系统的精密度、线性和分析干扰进行评价.结果 IFCC参考方法测定40个溶血液样本的平均变异系数(CV)为1.4％(范围0.2％～2.5％).经统计,5个系统测定结果未检出离群值,回归方程的斜率范围为0.9902～1.0267,截距范围为-0.1526 mmol/mol～+0.1512 mmol/mol,决定系数的范围为0.9962～0.9971,两个医学决定水平处估计值的偏倚均小于0.3％HbA1c.各系统实验室内CV均小于2％(NGSP单位).线性评价中所有系统测定结果与理论值的百分偏差均小于5％.高浓度葡萄糖对糖化血红蛋白检测存在一定的分析干扰.结论 5个糖化血红蛋白检测系统测定结果与IFCC参考方法具有较好的可比性,精密度和线性评价的结果符合相关标准的要求.
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双歧杆菌黏附素的提纯及鉴定
目的:双歧杆菌已广泛应用于益生菌及发酵乳的研制.由于双歧杆菌黏附于肠黏膜表面是其发挥作用的首要条件,开展对其黏附机制的研究有着重要意义.但目前有关双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的黏附机制所知不多,我们从青春型双歧杆菌中分离及纯化其黏附素.方法:黏附试验为检测青春型双歧杆菌与人肠上皮细胞系Lovo细胞间的黏附.收集双歧杆菌培养上清并用300 g/L硫酸铵沉淀,在4℃下8000r/min离心30min收集沉淀物.沉淀物溶解于0.01 mol/L pH7.4 PBS,加入至0.02 mol/LpH7.0 PBS平衡的Superdex 75柱中进行洗脱,速度为0.7mL/min,226 nm波长检测光密度ABS值.收集合并活性组分,冷冻干燥.干燥物溶解后加入至0.05 mol/L pH8.0PB平衡的Q-Sepharose FF柱中,先用同一缓冲液洗脱,然后分别用含0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L及1.0mol/L氯化钠的0.05 mol/L,PB进行阶段洗脱,速度为1.5 mL/min,检测各峰黏附活性,活性组分用SDS-PAGE进行分析.结果:使用硫酸铵沉淀对双歧杆菌黏附素进行了分离,沉淀物进一步经Superdex 75凝胶过滤和Q-SepharoseFF离子交换色谱纯化.结果黏附素不能结合与Q-Sepharose柱,经SDS-PAGE分析,证实纯化的黏附素成分基本单一,其M约为16ku.结论:双歧杆菌黏附素可能为一种M 16 ku的蛋白质,并且存在于培养液上清中.
