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白细胞介素-1β对离体大鼠黄体细胞孕酮分泌及钠-钾三磷酸腺苷酶活性的影响
为探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对黄体细胞甾体激素分泌的影响及其与黄体细胞膜钠-钾三磷酸腺苷酶(Na+-K+ATPase)活性变化的关系,本研究以经孕马血清促性腺激素-人绒毛膜促性腺激素(PMSG-hCG)处理的未成年雌性Wistar大鼠为模型,制备了黄体细胞悬液.用放射免疫测定(RIA)和定磷法分别测定了IL-1β对离体大鼠孵育的黄体细胞孕酮(P)分泌及黄体细胞膜Na+-K+ATPase活性.结果表明,IL-1β(1 ng/ml)可显著抑制离体孵育的黄体细胞基础P及hCG诱导的P分泌,并可使黄体细胞膜Na+-K+ATPase活性明显降低.IL-1β引起的P分泌减少和Na+-K+ATPase活性降低之间呈显著正相关.提示Na+-K+ATPase活性降低可能是IL-1β抑制P分泌的因素之一.
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急性脊髓损伤与基因表达(二)
5离子通道基因钾离子通道蛋白(putative K+ channel protein),电压门控型钾离子通道PK5(voltage-gated K+ channel PK5),电压门控型钾离子通道RK5(voltage-gated K+ channel RK5),钾离子通道TWIK(K+ channel TWIK),钾离子通道蛋白KSHⅢA3(K+channel protein KSHⅢA3),钠、钾离子腺苷三磷酸酶α2(Na+,K+ -ATPaseα2),钠离子通道Ⅰ(Na+ channel Ⅰ),钠钙离子交换蛋白基因NCKX2(Na+/Ca2+exchanger NCKX2),钙-腺苷三磷酸酶2(C2+ ATPase 2)在脊髓损伤后均下调,提示离子通道关闭,各种离子交换功能障碍.
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新城疫病毒对BGC-823胃癌细胞线粒体的影响
目的 探讨新城疫病毒对BGC-823胃癌细胞线粒体结构和三磷酸腺苷(ATP)酶活性等功能的影响.方法 应用电子显微镜观察、线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性变化测定、罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位及Western Blot测定细胞色素C等方法 进行分析.结果 新城疫病毒感染肿瘤细胞线粒体结构破坏,线粒体Na+-K+ATP酶、Ca2+-ATP酶活性较对照组显著下降(P<0.01).线粒体膜电位及细胞色素C显著下降(P<0.01).结论 对线粒体结构及功能的影响可能是新城疫病毒杀伤BGC-823胃癌细胞的机制之一.
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厄贝沙坦对肾性高血压大鼠左心室肥厚心肌腺苷三磷酸酶和钙调神经磷酸酶的影响
目的 观察厄贝沙坦对肾性高血压大鼠(RHR)心肌组织Na+-K+腺苷三磷酸酶(ATPase)、Ca2+-ATPase和钙调神经磷酸酶(CaN)及心肌肥厚指标的影响.方法 采用两肾一夹制造肾血管性高血压模型,21只大鼠随机分为肾性高血压大鼠模型组(RHR)、厄贝沙坦组[50mg/(kg·d)]和假手术组,每组7只;测量各组大鼠术前、术后及用药后血压;用药8周后,测量大鼠左心室质量/体质量(LVM/BM)、左心室心肌细胞横径(TDM),采用生物酶学方法检测心肌Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、CaN活性.结果 与假手术组比较,RHR模型组血压、LVM/BM、TDM均显著增高,心肌Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性明显降低,CaN活性升高;厄贝沙坦能降低RHR血压、LVM/BM、TDM,增加RHR心肌Na++K+-ATPase活性[RHR模型组(6.83±0.80)比厄贝沙坦组(9.53±1.03)μmol Pi/(h·mg pro),P<0.01]和Ca2+-ATPase活性[RHR模型组(6.47±0.77)比厄贝沙坦组(8.06±0.53)μmol Pi/(h·mg pro),P<0.01],降低CaN活性[RHR模型组(0.91±0.08)比厄贝沙坦组(0.72±0.05)μmol Pi/(h·mg pro),P<0.01].结论 厄贝沙坦可能通过增加心肌Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性和抑制CaN活性,从而减轻肾血管性高血压大鼠左心室肥厚.
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高血压大鼠动脉平滑肌细胞钙超载与腺苷三磷酸酶
目的探讨自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞钙超载与腺苷三磷酸酶(ATPase)的关系.方法组织块种植法培养SHR和Wistar-Kyoto( WKY )大鼠胸主动脉平滑肌细胞,应用流式细胞术、生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术等检测SHR和WKY大鼠动脉平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)、细胞膜Ca2+-ATPase和Na+-K+-ATPase活性及其mRNA表达水平.结果SHR动脉平滑肌细胞[Ca2+]i浓度高于WKY大鼠[(307.7±32.1 vs 118.9±21.4)nmol/L,P<0.01)],Ca2+-ATPase和Na+-K+-ATPase活性低于WKY大鼠(1.3±0.2 vs 2.6±0.3; 3.1±0.5 vs 4.9±0.5,P均<0.01),细胞质膜Ca2+-ATPase(plasma membrane Ca2+-ATPase, PMCA)亚型1和Na+-K+-ATPase α1亚单位 mRNA表达低于WKY大鼠(0.231±0.007 vs 0.403±0.021;0.253±0.028 vs 0.634±0.033,P均<0.01).结论SHR动脉平滑肌细胞出现钙超载,其机制可能部分与细胞膜PMCA和Na+-K+-ATPase活性降低有关,两种ATPase功能降低可能是其基因转录水平下调的结果.
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长期高盐饮食及替米沙坦干预对Wistar大鼠动脉重构的影响
目的 观察长期高盐饮食对Wistar大鼠主动脉和肠系膜动脉重构的影响,探讨长期高盐饮食致大鼠动脉重构的可能机制及血管紧张素受体拮抗剂替米沙坦的干预作用.方法 Wistar大鼠49只分为:对照组(n=13,给予0.5％NaCL的颗粒饲料)、高盐模型组(n=24,给予8％NaCL的颗粒饲料)、干预组[n=12,给予8％NaCL的颗粒饲料十替米沙坦2～40 mg/(kg·d)].每两周测量尾动脉压一次,喂养共24周.采用HE染色、Masson染色、免疫组化染色观察主动脉和肠系膜动脉中膜形态结构变化及增殖情况,酶学比色法检测细胞膜钠泵及钙泵活性,实时荧光定量PCR法检测细胞膜钠泵及钙泵mRNA表达水平.结果 与对照组比较,实验末高盐模型组大鼠尾动脉血压明显升高[(152.9±32.1)比(119.5±7.2)mm Hg,P＜0.05],主动脉及肠系膜动脉中膜厚度、中膜厚度/腔径、胶原纤维面积百分比值和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达百分比明显增高,主动脉平滑肌组织Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性降低[(8.80±1.98)比(11.14±2.23);(7.81±1.59)比(10.56±2.67)μmol Pi/(h·mg pro),均P＜0.05],主动脉平滑肌组织钠泵α1亚单位基因表达降低[(81.0±12.0)比(172.0±25.7),P＜0.05],细胞质膜钙泵亚型1基因表达明显升高(238.0±27.0比90.0±23.9,P＜0.01).与高盐模型组相比,实验末干预组血压[(127.8±4.3)比(152.9±32.1)mm Hg,P＜0.05]、主动脉和肠系膜动脉中膜厚度、中膜厚度/腔径、胶原纤维面积百分比值、PCNA阳性表达百分比均降低.相关分析显示高盐模型组ATP酶活性与上述血管重构指标均呈负相关.结论 长期高盐饮食可导致血压升高和主动脉及肠系膜动脉重构,细胞离子泵活性降低及其基因表达异常可能是高盐诱导动脉重构的机制之一.替米沙坦能够抑制血管平滑肌增生和胶原堆积、阻止高盐诱导的高血压和动脉重构.
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血管紧张素Ⅱ对有高血压家族史人脐动脉血管平滑肌细胞离子泵的影响
背景 细胞膜离子泵活性和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)异常在高血压发病过程中起重要作用.有高血压家族史(FH~+)的青少年红细胞膜钠泵和钙泵活性比无高血压家族史(FH~-)的对照组低,而在有高血压家族史的人动脉平滑肌细胞,离子泵活性变化以及Ang Ⅱ干预对其的影响尚不清楚.目的探讨有无高血压家族史人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)钠泵、钙泵活性及其mRNA表达的异同以及AngⅡ干预对上述指标的影响.方法 选取有无高血压家族史新生儿脐带各7根,用组织块贴壁法培养其脐动脉平滑肌细胞,设置AngⅡ空白对照组和高、低两个剂量组,采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术分别测量其细胞膜钠泵(Na+,K~+-ATP酶)、钙泵(Ca~2+-ATP酶)活性和mRNA相对表达量.结果 未用Ang Ⅱ时,FH~+组HUASMCs质膜钠泵、钙泵活性均高于FH~-组(均P<0.05),但其质膜钠泵α_1亚单位mRNA表达和质膜Ca~(2+)-ATP酶(PMCA)亚型1(PMCA_1)mRNA表达无差异.Ang Ⅱ干预后,在FH~-组,Ang Ⅱ(1 X 10~(-7)mol/L)能提高两种离子泵活性(均P<0.01)和上调钠泵α_1亚单位mRNA表达水平(P<0.01),Ang Ⅱ(1×10~(-6)mol/L)能抑制两种离子泵活性和下调钠泵mRNA表达水平(均P<0.01);在FH~+组,Ang Ⅱ(1×10~(-7)mol/L)能抑制两种离子泵活性(均P<0.01)和下调其mRNA表达(P<0.05),Ang Ⅱ(1×10~(-6)mol/L)对两种离子泵活性的抑制更为明显(均P<0.01),但对Na+,K~+-ATP酶α_1亚单位和PMCA_1的mRNA的相对表达量无影响.结论 FH~+的HUASMCs质膜钠泵和钙泵活性增高;Ang Ⅱ抑制FH~+的HUASMCs离子泵活性.
关键词： 腺苷三磷酸酶 人脐动脉血管平滑肌细胞 血管紧张素Ⅱ 高血压 家族史 -
厄贝沙坦对肾性高血压大鼠血管腺苷三磷酸酶活性和血管紧张素Ⅱ的影响
目的 探讨厄贝沙坦对肾性高血压大鼠(RHR)血管Na~+-K~+-腺苷三磷酸酶(ATPase)、Ca~(2+)-ATPase和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及血管重塑的影响.方法 采用两肾一夹制造肾血管性高血压大鼠模型,18只造模成功的大鼠随机分为RHR组、厄贝沙坦组[50 mg/(kg·d)]、停药组[厄贝沙坦50 mg/(kg·d)灌胃7周后停药1周],每组6只.另设一假手术组(n=6).测量各组大鼠用药前后血压;8周后,测量大鼠胸主动脉及肠系膜动脉血管壁厚度;采用酶学比色法检测Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性;采用放射免疫技术检测血浆、肠系膜动脉及胸主动脉局部Ang Ⅱ水平.结果 与假手术组比较,RHR血压显著升高,血管壁厚度明显增厚,血浆及血管组织Ang Ⅱ明显升高,血管Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性降低;与RHR组比较,厄贝沙坦组大鼠血压明显降低,肠系膜动脉血管壁厚度明显减轻,胸主动脉、肠系膜动脉Ang Ⅱ水平及Ca~(2+)-ATPase活性均升高,Na~+1K~+-ATPase 活性无明显变化;与厄贝沙坦组比较,停药组血压明显升高,胸主动脉及肠系膜动脉Ca~(2+)-ATPase活性明显降低,Na~+K~+-ATPase活性无变化.RHR血管Ca~(2+)-ATPase活性与局部AngⅡ呈负相关.结论 RHR血管重塑与血管组织ATPase活性降低、Ang Ⅱ升高有关,厄贝沙坦逆转血管重塑的作用可能部分与Ca~(2+)-ATPase活性增加有关.
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高血压左室肥厚与细胞离子转运和环核苷酸的关系
目的 探讨血流动力学、细胞阳离子转运和环核苷酸在高血压左心室肥厚（LVH）发生中的作用。方法 采用30例正常人和45例高血压非LVH病人双重同期对照，观察45例高血压LVH病人的血压、外周阻力，淋巴细胞ATP酶活性、阳离子和环核苷酸变化。结果 高血压LVH和非LVH病人血压、外周阻力、细胞离子转运和环核苷酸均有异常；高血压LVH组收缩压、细胞Na+、Ca2+、cAMP和cAMP/cGMP比值高于非LVH组，细胞Na+-K+-三磷酸腺苷酶（Na+-K+-ATPase）、Ca2+-ATPase活性和K+ 低于非LVH组。左室重量指数（LVMI）与Ca2+-ATPase、Na+、cAMP和cAMP/cGMP比值相关。逐步回归分析显示，在16个相关预选因子中，Na+、Ca2+-ATPase、Mg2+、cAMP与LVMI之间有独立的相关关系。结论 血流动力学、细胞阳离子转运和环核苷酸变化参与高血压LVH的发病过程，其中Na+、Ca2+-ATPase、Mg2+和cAMP可能起重要作用。
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尼莫地平对老年高血压患者内分泌激素和离子转运的影响
目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、去甲肾上腺素(NE)、内源性类洋地黄物质(EDLS)和细胞离子转运在老年原发性高血压(EH)发病及尼莫地平治疗中的作用.方法测定20例轻中度老年EH患者和21例健康老年人血浆AngⅡ、NE和EDLS及淋巴细胞Na+、Ca2+转运,观察尼莫地平治疗6个月后各项参数变化.结果老年EH患者血浆AngⅡ、NE和EDLS升高;细胞Na+-K+-腺苷三磷酸酶(Na+-K+-ATPase)和Ca2+-腺苷三磷酸酶(Ca2+-ATPase)活性降低、Na+和Ca2+增高、K+下降;NE与AngⅡ、EDLS、Na+和Ca2+正相关、与Ca2+-ATPase负相关,EDLS与Na+-K+-ATPase负相关.尼莫地平干预后,血压、总外周阻力、血浆3种激素、细胞Na+和Ca2+降低,两种ATPase活性增高.结论循环内分泌升压激素含量变化和细胞Na+、Ca2+转运失常及其相互作用可能参与老年EH的发病过程;尼莫地平长期治疗,能降低老年EH血压并改善其异常的病理生理机制.
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过表达肌浆网钙三磷酸腺苷酶抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡的研究
目的 研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价其对心肌细胞凋亡的影响.方法 体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组、缺氧组、过表达SERCA2a组和SERCA2a+缺氧组,以携带SERCA2a基因的重组腺病毒转染心肌细胞48 h后对其进行缺氧处理.Western blot法检测细胞质内SERCA2a蛋白及Caspase-3表达的变化;膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法及流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测细胞质内Ca2+浓度变化.结果 与对照组比较,缺氧组SERCA2a蛋白表达水平显著降低,过表达SERCA2a组蛋白含量升高2.5倍(P<0.05),缺氧组Caspase-3蛋白表达升高53.1%,过表达SERCA2a后给予缺氧处理,Caspase-3蛋白表达降低39.7%(P<0.05).与时照组比较,缺氧组心肌细胞凋亡率显著升高,与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞凋亡率显著下降(P<0.05).与对照组比较,缺氧组细胞质内Ca2+荧光强度显著升高;与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞质内Ca2+荧光强度显著降低(P<0.05).结论 过表达SERCA2a可减轻细胞内Ca2+超载和抑制Caspase-3激活,进而减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡.
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肌内质网钙酶3对胰岛β细胞内质网钙离子浓度及内质网应激的影响
胰岛β细胞内质网内的肌内质网钙酶3和肌内质网钙腺苷三磷酸酶2b对内质网游离钙离子浓度有调控作用.一项发表在Diabetes上的研究应用在胰岛素促进剂的控制下可编码定位于内质网的低亲和力钙离子感受器D4的腺病毒,监测肌内质网钙酶3(+/+)和肌内质网钙酶3(-/-)小鼠胰岛β细胞内质网游离钙离子浓度,另外记录胞浆游离钙离子浓度,观察肌内质网钙酶3对小鼠β细胞胰岛素分泌和内质网应激的影响.
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心肌缺血再灌注损伤亚细胞Ca2+反常与ATP酶泵功能抑制
目的研究心肌缺血再灌注损伤亚细胞Ca2+分布、含量及ATPase活性变化,探讨Ca2+反常与ATP酶泵功能抑制的关系.方法采用离体心脏灌注模型,电子探针显微分析测定心肌缺血再灌注原位亚细胞Ca2+变化;电镜酶细胞化学及生化方法测定ATPase分布及活性变化.结果心肌缺血30min再灌注30、60min肌浆网及肌膜Ca2+明显减少(P＜0.01),而胞浆及线粒体内Ca2+明显增加(P＜0.01).再灌注肌浆网及肌膜Ca2+减少与胞浆及线粒体Ca2+增加呈负线性相关,r分别为-0.964和-0.994,胞浆与线粒体Ca2+变化呈正线性相关,r为0.997.心肌缺血30min ATPase活性明显阵低,缺血30min再灌注30及60min进一步加重.结论心肌缺血再灌注Ca2+超载发生在亚细胞水平,即亚细胞Ca2+的重新分布.ATPase泵功能抑制是心肌缺血再灌注亚细胞Ca2+紊乱的直接原因之一.
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肝豆状核变性基因类型与临床表型关系研究
目的了解中国人肝豆状核变性(Wilson′s disease,WD)患者的P型ATP7B基因突变的分布类型与发生情况,研究WD患者临床表现型和基因型之间的关系.方法采用生化酶测定、聚合酶链反应、单链构象多态性分析、限制性内切酶图谱和DNA序列分析等分子生物学技术,对57个无亲缘关系家庭的60例WD患者进行ATP7B基因突变的检测.结果 60例中52例有不同程度的肝脏损害症状(87%),其中30例临床表现为单纯肝脏损害症状,12例为肝脏合并神经系统症状,10例肝脏合并其他症状;7/60例表现为单纯神经系统症状;1例5岁,无临床症状.经DNA序列分析确认基因突变11种,其中错义突变类型5种(R778L、V1140A、G943S、V1106I和 V1216M),碱基缺失1种(1384del17),多态性变化5种(IVS4-5T/C、A2495G、C2310G、IVS18+6C/T和IVS20+5A/G).WD患者52/114个778位点的精氨酸被置换为亮氨酸(R778L),R778L基因突变发生率为45.6%.52例WD伴肝脏损害的患者中38例存在R778L基因突变(占73%),其中14例为R778L纯合型,24例为杂合型.2例V1106I基因突变类型的携带者均为迟发型WD患者(1.7%).3例已知ATP7B基因突变类型(R778L/V1106I、R778L/V1216M和R778L/R778L)的铜-ATP酶活性较正常对照分别下降44.55%、88.23%和69.49%.结论 1384del17和V1140A为ATP7B新基因突变类型.WD患者的常见R778L基因突变类型在本组的发生率为45.6%.在临床表现有肝损害的患者中,73%的患者携带R778L基因突变的等位基因.
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74例肝豆状核变性患者中ATP7B基因七种新突变的发现
目的 分析中国人肝豆状核变性(Wilson disease,WD)患者ATP7B基因突变的分布特征,建立利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对Wilson病进行基因诊断的方法,并评价其在临床的应用价值.方法 对临床确诊为Wilson病的74例患者及50名健康人抽取外周静脉血提取基因组DNA.以患者和健康人的DNA为模板,分别对ATP7B基因的21个外显子进行PCR扩增.取PCR产物应用DHPLC技术在部分变性条件下检测突变并DNA测序证实突变位点.结果 利用DHPLC技术筛查并经测序证实,共发现22种ATP7B基因突变类型,其中7种是新发现的,同时发现11种多态,其中3种是新发现的.第8外显子Arg778Leu突变率高,其频率为25.0%.其次,2356-2A＞G突变频率为3.4%,Arg919Gly突变频率为2.7%,其他外显子突变频率均在1.0%～2.0%之间.结论 中国人的WD基因突变具有多样性特点,热点突变是第8外显子Arg778Leu.DHPLC具有高通量、敏感、准确且经济的特点,适合于大样本的筛查且能够发现未知的突变,是一种有临床应用价值的基因诊断技术.
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Wilson蛋白离子结合功能的研究
目的研究Wilson蛋白(ATP7B酶)的离子结合功能,探讨锌剂治疗Wilson病的机制.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因,GST基因融合载体表达并纯化融合蛋白,凝血酶酶切并收集目的蛋白,应用离子螯合层析和放射性锌印迹技术研究蛋白不同离子的结合能力.结果 ATP7B的离子结合能力为Cu(Ⅰ)>Zn(Ⅱ) >Ni(Ⅱ)> Cu(Ⅱ),并发现锌离子和铜离子对蛋白的结合具有竞争作用.结论本实验证明了ATP7B以一价铜离子的形式行使其运铜功能,ATP7B不仅有结合铜离子的功能,而且有结合其他离子的功能;铜锌两种金属离子在蛋白结合位点的竞争作用可能是锌剂治疗WD的机制之一.
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Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究
目的研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础.方法构建含健康人全长Wilson病(WD) cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu/pcDNA3、Gln914Ter/pcDNA3和Thr935Met/pcDNA3;同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33-629抗体;分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞(Chinese hamster ovary,CHO),收集细胞提取蛋白,以ATP7Bn33-629抗体为一抗,免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度.结果 ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA/pcDNA3表达质粒和Arg778Leu/pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致,而在Gln914Ter/pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加.结论成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达,为进一步的功能研究打下基础.错义突变未改变ATP7B蛋白表达量,提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关.截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关.
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复方高渗盐溶液对大鼠低血容量性休克心肌细胞膜泵功能的影响
目的 探讨低血容量性休克大鼠心肌细胞膜泵功能的变化及高渗盐溶液对其泵功能的影响.方法 成年Wistar大鼠96只,随机分成高渗盐溶液组(HSH组)和生理盐水组(NS组),每组48只.双阶段放血法制备大鼠休克模型,按休克不同时相分为休克前、休克及复苏后30、60、90、120min 6个时相,分别测定心肌细胞膜ATP酶活性并行心肌细胞超微结构观察.结果 HSH组中休克时的心肌细胞膜ATP酶活性明显低于休克前及复苏后90、120min(P＜0.05),而NS组休克时和复苏后各时间点心肌细胞膜ATP酶活性均明显低于休克前(P＜0.05).HSH组复苏后各时间点心肌细胞膜ATP酶活性均明显高于NS组(P＜0.01).结论 低血容量性休克可导致心肌细胞膜ATP酶活性降低,能量消耗增加,细胞膜离子泵功能衰竭;复方高渗盐液不但能快速改善休克引起的血容量不足,而且能恢复心肌细胞膜离子泵功能.
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小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究
目的 构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况.方法 取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上.采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果.结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质.结论 成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具.
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口服高氧液对急性运动性疲劳的防治作用及可能机制的初步探讨
目的研究高氧液对急性运动性疲劳的防治作用及其机制.方法选择士兵80名,随机分为口服高氧液实验组和口服平衡盐液对照组.运动方式为5 000m连续跑,在运动前30min以及运动2 000m和4 000m处,分别口服高氧液或平衡盐液250ml、150ml、150ml.在运动前和运动结束即刻分别抽取静脉血,检测乳酸含量、三磷酸腺苷酶活力、丙二醛含量、总抗氧化能力等指标.结果高氧液实验组血清乳酸及丙二醛含量均明显低于对照组(P<0.05),三磷酸腺苷酶活力、总抗氧化能力与对照组比较均显著增高(P<0.05).结论高氧液有显著的抗急性运动性疲劳作用,其机制可能与高氧液增加氧供及抗脂质过氧化有关.
