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激活低氧诱导因子-1的转导通路
低氧诱导因子-1(HIF-1)与心血管缺血、肺高压和癌症等有密切关系,是在低氧的肝细胞癌细胞株hep3B细胞的核提取物中发现的,是一种结合于促红细胞生成素(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列的特异蛋白.据报道,许多类型的细胞都可被低氧诱导而产生效应,其中HIF-1起主要作用,提示细胞中普遍存在一个低氧转导机制.一些转录因子,如活化蛋白-1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)、HIF-1[1]都与低氧应激反应有关.哺乳动物细胞对缺氧的适应性反应主要是表达HIF-1,这一过程与某些蛋白基因如醛缩酶A、烯醇化酶α、乳酸脱氢酶LDH、丙酮酸激酶和葡萄糖转移酶-1(GLUT-1)的表达有密切关系[2].
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急性脊髓损伤与基因表达(二)
5离子通道基因钾离子通道蛋白(putative K+ channel protein),电压门控型钾离子通道PK5(voltage-gated K+ channel PK5),电压门控型钾离子通道RK5(voltage-gated K+ channel RK5),钾离子通道TWIK(K+ channel TWIK),钾离子通道蛋白KSHⅢA3(K+channel protein KSHⅢA3),钠、钾离子腺苷三磷酸酶α2(Na+,K+ -ATPaseα2),钠离子通道Ⅰ(Na+ channel Ⅰ),钠钙离子交换蛋白基因NCKX2(Na+/Ca2+exchanger NCKX2),钙-腺苷三磷酸酶2(C2+ ATPase 2)在脊髓损伤后均下调,提示离子通道关闭,各种离子交换功能障碍.
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Toll样受体及其通路是中医药干预艾滋病免疫重建的可能作用靶点
Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是广泛存在于昆虫、脊椎动物、植物中序列高度保守而古老的家族,与果蝇Toll蛋白同源的人类Toll样蛋白基因及其编码的TLR于1997年被首次发现[1].
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严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒N蛋白基因的表达及其初步应用
严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)的病原是SARS冠状病毒[1],该病毒引起以呼吸道肺上皮细胞损害为主的全身性疾病,引发免疫抑制而造成全身感染.同时,SARS病毒感染导致全身血管病变,是一种传染性很强的新病原.目前,在我国SARS感染后的免疫学诊断尚无完善的方法,细胞培养的抗原面临纯化困难和操作的危险性.我们利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了SARS冠状病毒N蛋白全长基因,为进一步建立特异性诊断方法、基因工程疫苗的研制提供了备选实验材料.
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鉴别病毒受体方法的研究进展
病毒与易感细胞上的受体分子相结合,是病毒进入细胞的第一步,也是病毒嗜性的基础。这些受体分子介导的病理过程很可能与病毒的致病机制相关,鉴别病毒的受体对于了解其组织嗜性和病理机制,制定预防和治疗措施有着重要的意义。而且也为了解病毒与细胞的相互作用,病毒的感染周期等有趣的问题提供了基础的切入点。本文谨就识别病毒蛋白受体的几种方法的研究进展综述如下。1 筛选易感细胞的cDNA文库鉴别受体蛋白 这是一种既经典又在不断发展的方法。易感细胞的易感性来源于细胞内编码受体蛋白基因的表达,建立所有表达基因的cDNA文库,采用适当的方法筛选cDAN文库,则可直接找到编码受体蛋白的基因。一般的设计是:将易感细胞cDNA文库转染拮抗细胞,转染后获得编码受体蛋白克隆的拮抗细胞也获得了对病毒的易感性,就可以有病毒结合和进入,借助一些筛选标志可筛选出这些细胞从而分离出编码受体的克隆。其中筛选标志和策略的确定是关键,它依不同的病毒“量身定做”,有很强的针对性。
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芝麻主要过敏原清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
了芝麻是亚洲地区重要的油料作物,主要含有两种储存蛋白,为11S的球蛋白和2s的清蛋白,这两种蛋白占芝麻中总蛋白的80%~90%,清蛋白是其中主要的致敏蛋白之一.
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沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究
采用P1基因PCR扩增产物酶切图谱分析方法对沈阳地区分离的肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)菌株进行分型,以便了解本地区MP的流行情况,为临床诊断提供依据。 MP临床分离株的分离和鉴定:取临床诊断为肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子标本放3ml支原体肉汤培养基置37℃培养7~10?d,分别转种于支原体肉汤培养基和支原体固体培养基,用血球吸附实验和MP生长抑制试验鉴定分离株。结果:6株临床分离株血吸附实验结果阳性。用MP感染阳性患者的血清做MP生长抑制实验,6株分离株亦均呈现阳性结果。
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查菲埃立克体表面抗原P120蛋白基因的克隆与表达
查菲埃立克体(Ehrlichia chaffeensis)是人单核细胞埃立克体病(human mononcytic ehrlichiosis, HME)的病原体,已证实我国存在该病原。血清学分析是目前诊断HME及其流行病学调查的主要方法。但由于该病原体为严格胞内寄生菌,难以通过细胞培养制备大量抗原去满足临床HME的血清学诊断和流行病学调查的需要。
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SARS-CoV E蛋白基因的扩增及原核表达载体的构建
加拿大英属哥伦比亚癌症研究所基因组科学中心已完成了SARS冠状病毒的全基因组测序(基因库登录号:AY274119).SARS-CoV基因组编码包括S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白等结构蛋白质.E蛋白是小的结构蛋白(为糖蛋白),散布于SARS病毒的包膜,疏水性强,其核苷酸序列为231bp,编码76个氨基酸,其等电点为6.01,相对分子质量为8.361×103.推测E蛋白的作用有利于病毒形状的形成,在病毒颗粒形成过程中起主要作用.本文利用已公布的SARS-CoV基因组序列,克隆了E蛋白基因,以期为深入研究E蛋白的生物学功能和药物或疫苗开发提供研究基础.
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SARS冠状病毒S蛋白高保守性C区重组核酸疫苗肌肉免疫和黏膜免疫的研究
构建含SARS冠状病毒S蛋白基因高保守性C区基因的真核表达重组质粒pCDNA-Sc作为DNA疫苗,其中C区位于SARS冠状病毒S蛋白S1亚基基因片段的811~1221bp区域的病毒外部羧酸端多肽肽段.
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湖北汉族人群Tim-3基因多态性与类风湿关节炎的相关性研究
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性全身自身免疫性疾病,环境因素和遗传因素在疾病的发生和发展过程中共同起作用,而遗传因素显得尤为重要.易感基因的研究有助于阐明RA的发病机制,有助于RA的诊断、治疗.多项研究表明T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白基因-3(Tim-3)在自身免疫性疾病的发生及发展中起到了重要作用.我们采用两对交叉引物PCR(PCR-CTPP)技术对湖北地区汉族成人Tim-3第三外显子4259T>G单核苷酸多态性进行了研究,试图探讨该位点的变异与类风湿关节炎易感性的关系以及对类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)水平的影响.
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恙虫病东方体山西株56kD蛋白基因DNA疫苗的初步研究
我们构建了恙虫病东方体山西株(Sxh951)56kD蛋白基因DNA疫苗(pc-DNA3.1-Tsa56),该重组质粒转染的COS7细胞经IFA和WB染色均为阳性,表明该重组质粒能够在哺乳动物细胞中表达.为了探讨该DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果,将6周龄BALB/c鼠随机分成5组,每组10只.
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恙虫病东方体Karp株47kD蛋白基因的表达及DNA免疫初步研究
目的观察恙虫病东方体Karp株相对分子质量(Mr)为47×103蛋白基因的DNA免疫效果. 方法将恙虫病东方体Karp株Mr为47×103的蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1/47.在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上,单独和将其与Mr为40×103重组蛋白联合免疫小鼠.在每次加强免疫之后10?d,检测小鼠体液和细胞免疫反应. 结果质粒DNA和蛋白联合免疫组所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖反应均高于重组质粒DNA和蛋白单独免疫组,而第二次加强免疫后重组质粒诱导脾淋巴细胞的增殖情况则显著弱于其它免疫组(P<0.05). 结论重组质粒pcDNA3.1/47和重组Mr为47×103蛋白在刺激小鼠免疫反应上具有相互加强作用.
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胡桃变应原蛋白基因jug r 1在pET32表达系统中的高效表达
胡桃(Walnut,Juglans regia),也叫核桃,与扁桃、榛子、腰果并称为世界四大干果,被广泛地应用于各类食品中,是引起食物过敏的主要食品之一.根据美国食品过敏症和过敏性反应网络(Food Allergy & Anaphylaxis Network,FAAN)统计的数据显示:在引起过敏反应的坚果类食品中,胡桃位居第一(占34%),其次是腰果和杏仁,分别占20%和15%[1].
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链球菌M6蛋白的纯化及其在银屑病患者血清检测中的应用
为了进一步研究A群化脓性链球菌M6蛋白和点滴型银屑病之间的关系,我们对银屑病患者咽部菌群进行分离培养[1]并对培养分离的链球菌中的M6蛋白基因进行检测[2],对检测具有M6蛋白的化脓链球菌菌株再进行增殖培养,然后采用分子筛和阴离子交换层析的方法对链球菌菌体中的M6蛋白进行纯化,现将结果报道如下:
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恙虫病东方体Sxh951株56kD蛋白的表达及其在ELISA中的应用
目的构建含Orientia tsutsugamushi Sxh951株(Ot. Sxh951)相对分子质量(Mr)为56×103外膜蛋白基因(sxh56)的重组质粒pQE30/56,表达Mr 56×103蛋白并观察其在ELISA中的应用. 方法 IPTG诱导sxh56重组质粒;观察SDS-PAGE和免疫印迹结果;经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白分别与Ot. Gilliam、Ot. Karp、Ot. Kato感染鼠血清进行ELISA和免疫印迹检测. 结果 SDS-PAGE和免疫印迹检测显示有一Mr约为56×103的特异蛋白带;ELISA和免疫印迹结果显示该重组蛋白只与Ot. Gilliam感染鼠血清呈阳性反应;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测小鼠血清抗体IgG,特异性为100%,敏感性96.67%;检测人血清抗体IgG的敏感性为88.08%,特异性96.36%. 结论表达的重组Sxh56蛋白具有良好的免疫反应性;其作为ELISA包被抗原,具有良好的特异性和敏感性.
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软叶针葵花粉肌动蛋白抑制蛋白基因的克隆表达与纯化及免疫学鉴定
花粉是主要的吸人性过敏原之一.软叶针葵是一种热带、亚热带常见植物,在授粉季节所产花粉量较大,具很大的过敏潜能.但目前国内外尚鲜见软叶针葵花粉过敏原研究的报道.本研究用简并性引物从软叶针葵花粉中获得1个肌动蛋白抑制蛋白(profilin)基因,并在大肠杆菌中进行表达,获得有活性的重组profilin,同时研究其免疫学特性,并为软叶针葵花粉过敏诊断及免疫学治疗奠定基础.
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酵母双杂交技术筛选HCV E1蛋白结合的肝细胞蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与HCV E1蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV E1基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:获得了19个与E1蛋白特异性结合的阳性克隆,其中16个克隆为已知蛋白基因和3个克隆为未知功能蛋白基因.结论:成功克隆出与丙型肝炎病毒E1蛋白结合的肝细胞蛋白,为进一步研究HCV E1在HCV致病中的作用提供了新线索.
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酵母双杂交筛选白细胞中新基因NS3TP6结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6蛋白结合蛋白的基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AHl09并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HCV NS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个,其中3个人类白细胞CDl4抗原,1个人类免疫球蛋白入轻链,3个人类推定蛋白基因(ACl24014,AC097504,AC023785).结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白基因筛选
目的:筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白相互作用蛋白的基因,探讨前-前-S在HBV致病中的作用.方法:构建前-前-S的酵母细胞表达载体,采用酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析.结果:获得了54个与前-前-S蛋白特异性结合的阳性克隆,其中包括30种已知蛋白基因和8个未知功能基因.结论:克隆出与乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合的肝细胞蛋白基因,为进一步研究前-前-S在HBV致病中的作用奠定了基础.