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鉴别病毒受体方法的研究进展
病毒与易感细胞上的受体分子相结合,是病毒进入细胞的第一步,也是病毒嗜性的基础。这些受体分子介导的病理过程很可能与病毒的致病机制相关,鉴别病毒的受体对于了解其组织嗜性和病理机制,制定预防和治疗措施有着重要的意义。而且也为了解病毒与细胞的相互作用,病毒的感染周期等有趣的问题提供了基础的切入点。本文谨就识别病毒蛋白受体的几种方法的研究进展综述如下。1 筛选易感细胞的cDNA文库鉴别受体蛋白 这是一种既经典又在不断发展的方法。易感细胞的易感性来源于细胞内编码受体蛋白基因的表达,建立所有表达基因的cDNA文库,采用适当的方法筛选cDAN文库,则可直接找到编码受体蛋白的基因。一般的设计是:将易感细胞cDNA文库转染拮抗细胞,转染后获得编码受体蛋白克隆的拮抗细胞也获得了对病毒的易感性,就可以有病毒结合和进入,借助一些筛选标志可筛选出这些细胞从而分离出编码受体的克隆。其中筛选标志和策略的确定是关键,它依不同的病毒“量身定做”,有很强的针对性。
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离子特异性DNA酶在人体重金属含量检测中的应用
20世纪90年代以来,研究人员逐渐发现了多种具有特定生物催化功能的DNA分子,即DNA酶.离子特异性DNA酶是上述DNA中特殊的一类.该酶是具有离子结合特异性的DNA分子片段[1-5],这些片段和某种特定离子结合后可以被活化成为一种核酸内切酶,能够将与之序列互补的核酸链切断[6-9],因此被称为离子特异性DNA酶.目前在分子诊断中一般通过多种方法筛选得到目的离子特异性DNA酶,随后构建相应的离子特异性DNA酶生物传感器(探针)用于离子浓度的检测.
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人源性大肠癌抗原基因的SEREX筛选
目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的大小.结果:构建成3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,滴度分别为2.39×106nfu/L,2.07×106nfu/L和1.86×106nfu/L,插入片段长度为0.5-4kb,平均分别为1.4kb,1.6kb和1.3kb.筛选发现4个阳性克隆,插入cDNA片段大小分别为2.4 kb,1.8 kb,2.3 kb和2.2 kb.结论:用SEREX方法筛选大肠癌抗原cDNA表达文库,可获得有价值的大肠癌的重组抗原基因克隆,将有利于大肠癌的早期诊断和重组疫苗的研究.
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HCV NS5A反式调节蛋白13研究进展
HCV NS5A反式调节蛋白13(HCV NS5A trans-regulated protein 13,NS5ATP13)又称核螺旋体磷酸化蛋白1(nucleolar and coiled-body phosphoprotein 1,NOLC 1)或核仁磷酸化蛋白140(nucleolar phosphoprotein 140,Nopp140),是Meier等在大鼠肝细胞核中发现并鉴定的一种核定位信号(nuclear localization signal,NLS)结合蛋白[1],作为蛋白伴侣具有细胞核与细胞质中穿梭的功能[2].本实验室在利用抑制性消减杂交的方法筛选HCV NS5A反式作用蛋白时,发现HCV NS5A可以上调该基因的表达[3].下面就NS5ATP13近年的研究进展作一综述.
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影响高龄男性血清甲状旁腺素的独立相关因素
随着我国人口老龄化程度的加重,高龄(≥80岁)男性越来越多。临床常发现高龄男性血清甲状旁腺素( parathyroid hormone , PTH )增高,但经B超和CT等检查未发现有功能亢进的甲状旁腺病灶。人体内源性PTH在甲状旁腺主细胞内质网中合成,是84个氨基酸残基组成的多肽,是体内调节血钙磷水平的主要激素之一,其持续升高可促进骨吸收,导致骨质疏松[1]。维生素D、血钙和血磷可影响血清PTH水平[2],为了解骨代谢指标或其他因素是否会影响高龄男性血清PTH 水平,本研究检测了1144名高龄男性血清PTH、骨代谢和血液生化等指标,并采用多元回归分析方法筛选影响高龄男性PTH的独立相关因素。
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白细胞介素12融合基因联合白细胞介素2对肝癌的基因治疗
我们在肝癌基因治疗目的基因筛选的实验中发现,在大鼠肝癌模型中,IL-12的基因治疗作用为显著[1,2],若同时联合IL-2,有望进一步提高对肝癌的治疗效果.1.材料与方法:大鼠肝癌细胞株CBRH3由中科院细胞所谢弘教授惠赠.以质粒GCp35Ep40PN为模板,PCR分别扩增p35和p40亚基基因.以PCR产物为模板,用p40上游引物和p35下游引物再次进行PCR反应,构建mIL-12融合基因.mIL-12和hIL-2基因分别插入逆转录病毒载体GCXEXPN,命名为GCIL12EXPN和GCXEIL2PN、GCIL12E-IL2PN.按常规方法筛选逆转录病毒载体GCIL12EXPN、GCXEIL2PN、GCIL12E-IL2PN的PA317包装细胞株,测病毒滴度.用CBRH3建立大鼠接种肝癌模型,分为生理盐水、LacZ载体对照组和IL-2、IL-12、IL-12+IL-2治疗组,每组10只大鼠,将包装细胞株脾内注射进行治疗.方差分析结果.
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膀胱移行细胞癌差异表达基因的克隆与鉴定
应用抑制消减杂交(SSH)构建膀胱移行细胞癌差异表达的消减文库,再应用Dot blot方法筛选出差异表达的基因,为研究膀胱癌发生、发展提供实验依据.现报告如下.
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奥氮平等6种非典型抗精神病药治疗精神分裂症的循证药学分析
精神分裂症是发病率较高的精神疾患之一,近年来随着多种非典型抗精神病药物的应用,使精神分裂症的药物治疗呈现多元化局面,但不菲的药品价格也加重了患者的负担.本文通过检索国内相关文献并进行评价,尝试应用循证药学方法筛选出治疗精神分裂症性价比佳的非典型抗精神病药物, 为临床选择安全、有效和经济的治疗方案提供参考.
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浅谈腰椎间盘突出症的治疗方法
腰椎间盘突出症是一种临床上常见的运动系统疾病,该病具有发病率高、缠绵难愈、治疗过程中易有反复、治愈后复发倾向大等特点,历来是医学界的一大难题,在长期的医疗实践中古今中外的医者发明创造了许多治疗方法,但面对众多的治疗方法,如何将这些方法筛选、配伍,终在患者身上应用并取得佳疗效却是一个值得研究的问题.为此,本人根据多年行医及治疗此症经验按两个标准将其治疗方法分类如下.
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主成分logistic回归在筛选乳腺癌监测因素中的应用
乳腺癌是严重危害妇女健康和生命的恶性肿瘤之一,近年来很多国家发病率都有不同程度的上升,我国也不例外.几十年来,很多学者对其病因进行了大量研究,已有许多与乳腺癌发生有密切关系的因素被揭示出来,但确切的病因尚不清楚.本文对重庆市区女性乳腺癌危险因素的病例对照研究资料采用主成分Logistic回归分析方法筛选乳腺癌可能的危险因素,为乳腺癌预防和监测提供信息.
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精神病人生存质量的评价方法与影响因素
生存质量的研究迅速增多,应用甚广,几乎涉及人类生活中的各个方面,在医学领域已被广泛用于癌症及慢性病临床治疗方法筛选,预防性干预措施效果评价及卫生资源分配等决策方面[1].精神障碍已成为当前我国疾病分类中较为严重的一类疾病,精神障碍在我国疾病负担的排名中居首位,已超过了心脑血管、呼吸及恶性肿瘤等疾患,1993年调查精神病的总患病率已由1982年的12.69‰上升到13.47‰,(不含神经症),精神障碍不仅严重影响了患者本人及家属的生活质量,而且也产生不良的社会影响[2].
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重组干扰素诱导的跨膜蛋白表达及其对结直肠癌患者的血清学反应
干扰素诱导的跨膜蛋白1(interferon induced transmembrane protein 1,IFITM1,)是SEREX方法筛选大肠癌组织cDNA文库时获得的结肠癌相关抗原基因[1],本研究利用大肠杆菌表达系统重组IFITM1编码蛋白并研究该蛋白对结直肠癌患者血清的抗血清反应.
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大肠癌中干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因表达及其临床意义
大肠癌(colorectal cancer,CRC)是消化系统常见恶性肿瘤,早期诊断还缺乏简易有效的手段,筛选大肠癌的肿瘤标志物十分必要.我们通过血清学筛选重组cDNA表达文库(SEREX)方法筛选出干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-induced transmembrane protein-1,IFITMP-1)基因[1],进一步研究其在大肠癌中的表达及临床意义.
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一站式640层容积CT检查左肾静脉受压综合征的应用价值
左肾静脉受压综合征,又称胡桃夹综合征(nutcracker syndrome,NCS),是指左肾静脉汇入下腔静脉的行程中在穿行于肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)与腹主动脉(abdominal aorta, AA)之间的夹角内受到挤压,导致血液回流受阻而引起相应的临床症状。影像学检查方法在诊断NCS方面发挥了巨大的作用,是临床诊治NCS过程中不可缺少的环节。动、静脉双期扫描是肾血管CTA检查常规使用的方法[1~3],但传统扫描方法常根据操作人员的个人经验,缺乏相关扫描的量化资料。作者通过运用一站式640层CT检查和多种后处理方法筛选佳的肾血管成像时间。报道如下。
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用相关及回归法筛选与近视眼CCT相关的因素
我们采用多因素相关及回归分析的方法筛选与近视眼中央角膜厚度(central corneal thickenss,CCT)相关的因素,为LASIK矫正近视手术提供参考.
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体内筛选骨肉瘤血管内皮特异性结合肽
体内噬菌体技术则将噬菌体展示技术与动物模型相结合,可以更好地进行肿瘤组织特异性结合肽的筛选.Pasqualini等~[1]和Wadih等~[2]利用该方法筛选出了特异结合脑和肾的噬菌体克隆,1997年他们成功筛选到一条恶性黑色素瘤及乳腺癌上整合蛋白的特异性亲和短肽,,把该肽与化疗药物耦联后进行动物实验,收到了很好的抗肿瘤效果.
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应用蛋白质组学方法筛选人骨肉瘤多药耐药蛋白
多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的一个重要原因[1].大量研究表明[2,3],骨肉瘤多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)等异常表达有关,我们应用蛋白质组学方法筛选耐药细胞与亲本细胞中差异表达的蛋白.
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非编码 RNA 与慢性肺部疾病的研究进展
支气管肺发育不良( bronchopulmonary dysplasia ,BPD)是早产儿常见的慢性肺部疾病(chronic lung disease,CLD),其发病机制尚不明确,目前认为遗传易感因素参与发病,尚无有效的治疗方案。非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是当今研究热点,目前研究已证实,众多的微小RNA ( mi-croRNA,miRNA)参与肺发育与肺部疾病的发生,而长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是继miRNA刚刚兴起的又一璀璨明星。如果能用生物信息学的方法筛选出与BPD相关的ncRNA,分析miRNA与lncRNA之间重要的功能通路及调控网络,可能为我们临床诊治BPD提供新的标靶。本文对这两者与CLD的相关研究进展作一综述。
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Meta分析及其在神经病学中的应用
1 引言循证医学作为近年来临床医学上新兴的一门学科,是21世纪临床医学发展的必然趋势. 目前临床医学模式正逐渐从传统的经验医学向循证医学转变.循证医学是指自觉地、准确地 和公正地应用现有好的证据来为每个病人做出治疗选择[1].循证医学关键也就在 于证据及其质量.目前认为可靠证据是大样本随机试验(RCT)和RCT的系统评价.系统评 价就是在全面收集所有相关临床试验研究基础上,通过科学的方法筛选出合格的研究,继而 对合格的研究进行综合分析和统计学处理,形成较单个研究更为可靠的分析结果,后把结 果以严谨、简明形式予以公布,用于指导临床决策过程[2].其中常用的方法是Met a分析.
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采用简单的沉淀反应方法筛选Ⅲ型高脂蛋白血症
家族性Ⅲ型高脂蛋白血症(HLP)以富含胆固醇为特征.临床上对于Ⅲ型HLP进行鉴别诊断是重要的,这是因为Ⅲ型HLP病人会引发早期冠心病(CAD)及外周动脉粥样硬化和Ⅲ型HLP对饮食治疗及以神经纤维酸为诱导剂治疗反应好.