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片仔癀与阿霉素联用对骨肉瘤耐药细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨片仔癀与阿霉素(ADM)联用对骨肉瘤耐药细胞U2OS/ADM增殖及凋亡的影响.方法:不同浓度片仔癀干预骨肉瘤U2OS细胞和其耐药细胞U2OS/ADM,筛选出无细胞毒作用的片仔癀浓度为联用浓度.ADM、片仔癀与ADM联用干预U2OS/ADM细胞,MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染FCM检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Bax的表达.结果:U2OS细胞和U2OS/ADM2细胞对片仔癀的IC50无统计学差异,U2OS/ADM细胞对片仔癀无交叉耐药;U2OS/ADM细胞对ADM的IC50为(14.57±0.15)μg/mL,片仔癀与ADM联用后其对ADM的IC50为(6.75±0.29)μg/mL,逆转指数为2.16;联用组细胞凋亡率较ADM组显著增加(P<0.05);联用组Bcl-2表达下降(P<0.05),Bax表达上调(P<0.05).结论:片仔癀与ADM联用可提高U2OS/ADM细胞对ADM的敏感性,促进U2OS/ADM细胞凋亡,其机制与改变Bcl-2/Bax的比例有关.
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肠胃清颗粒协同卡铂对人结肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨肠胃清颗粒药物血清协同卡铂对人结肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用2.5%、5.0%、10.0%、20.0%的肠胃清药物血清干预人结肠癌敏感细胞HCT116和耐药细胞HCT116/L-OHP,筛选肠胃清药物血清联用浓度;并用不同浓度卡铂干预HCT116和HCT116/L-OHP,确定卡铂联用时间.采用MTT法检测肠胃清药物血清联用卡铂对HCT116/L-OHP细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布及AnnexinV-FITC试剂盒检测对细胞凋亡的影响.结果 HCT116/L-OHP细胞对卡铂的耐药指数为3.17,卡铂的半数抑制浓度(IC50)为(325.97±29.26)mg/L;筛选出6%的肠胃清药物血清联合卡铂作用于HCT116/L-OHP细胞48h,其IC50为(68.64±5.74) mg/L,逆转指数为4.75.联用组和卡铂组细胞凋亡率均高于空白组,并且联用组细胞凋亡率亦高于卡铂组(P<0.05),各组细胞周期G1、G2、S期分布差异均有统计学意义(P<0.05).结论 肠胃清颗粒药物血清能有效地逆转入结肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP对卡铂的耐药,诱导HCT116/L-OHP凋亡,提高细胞在G2期的分布率,降低在S期的分布率.
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敏感细胞KB与其耐药细胞KBv200脂质过氧化物含量分析及超微结构观察
肿瘤细胞耐药是化疗失败的重要原因.联系影响抗癌药跨膜转运和胞内分布异常的多药耐药现象,本研究对一对耐药细胞KBv200(其耐药表型为MDR)及其敏感细胞KB的超微结构和脂质过氧化物含量进行了分析.超微结构观察到KBv200细胞多聚核糖体数目较KB细胞增多,这可能与耐药相关的酶蛋白类有关,尤其是P-GP.
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多药耐药基因产物在胃癌中的表达及其临床意义
多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指抗某种细胞毒药物的耐药细胞对许多结构上无关和作用机制上不同的其他细胞毒药物产生交叉抗药性,MDR基因的过表达或扩增往往导致肿瘤患者化疗失败[1].
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胃癌耐药相关抗体MGr1筛选文库获得的基因MGr1-Ag1在胃癌组织中表达的研究
目的:为研究肿瘤的多药耐药现象,应用胃癌耐药相关的单克隆抗体MGrl筛选肿瘤耐药细胞表达文库获得的一个稳定阳性克隆的cDNA片段MGrl-Agl,检测MGrl-Agl在胃癌组织中的分布及表达水平.方法:利用原位杂交技术对MGrl-Agl mRNA在胃癌组织中的分布进行了检测,以了解其在胃癌中的表达情况及意义.结果:MGrl-Agl mRNA定位在胃腺体细胞的胞质中,为蓝色小颗粒,呈弥漫性分布.MGrl-Agl mRNA在SGC7901/VCR阳性信号明显高于SGC7901,胃癌与癌旁组织相比,MGrl-Agl mRNA的阳性表达率均有显著差异(P<0.05).MGrl-Agl mRNA在胃癌(50.00%)、癌旁组织(71.42%)、高分化腺癌(68.75%)和中分化腺癌组织(57.14%)中的阳性表达率无显著差别,但高分化组和中分化组都与低分化腺癌组织(10.00%)差别显著(P<0.05).此外,MGrl-AglmRNA还分布于小肠及大肠腺体内,因例数偏少,未做统计.结论:MGrl-Agl与胃癌的分化程度有关,随着组织的分化程度增高,MGrl-Agl mRNA的阳性表达率增加.
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长春新碱诱导人胃癌耐药细胞表达P-糖蛋白由核因子-κB活化调控
目的:研究核因子-Kappa B(NF-κB)在胃癌长春新碱耐药细胞中的活化情况,及其对细胞膜P-糖蛋白(P-gp)表达的调控作用.方法:以胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象.采用凝胶电泳迁移率分析检测NF-κB DNA结合活性,细胞-ELISA法检测细胞内IκB-α蛋白和细胞膜P-糖蛋白(P-gp)的表达,免疫细胞化学法观测细胞内P65核转位.结果:SGC7901/VCR耐药细胞中NF-kB的基础活性比敏感细胞高1.4倍.不同浓度VCR(5,10,20,50 μg/L)均可引起耐药细胞NF-κB DNA结合活性增强、Iκ3-α蛋白表达下降和P-gp表达增强,而亲本敏感细胞产生的上述效应均不及耐药细胞明显;SGC7901/VCR耐药细胞中,NF-κB活性与P-gp的表达呈正相关(r=0.977,P<0.01),且NF-κB活化的同时伴有P65核转位.NF-κB抑制剂MG-132可抑制VCR诱导的NF-κB活化及IкB-α降解,同时还能抑制P-gp高表达.结论:胃癌长春新碱耐药细胞中NF-кB活性增强,可能参与调控VCR诱导的细胞膜P-gp高表达.
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汉防己甲素逆转血液系统肿瘤细胞多药耐药的临床研究
一些学者使用钙通道阻滞剂如异搏定(VPL)、尼群地平等药物,逆转肿瘤细胞的耐药性.体外试验中,VPL等药确能增强化疗药物对白血病细胞的杀伤作用,但当应用于人体内时,达到逆转剂量的上述药物皆引起严重的心脏毒副反应[1] .体外试验证实,汉防己甲素(TTD)能显著提高细胞内化疗药物浓度,达到耐药逆转的作用,这一作用在耐药细胞中尤为明显[2,3].所以,我们对多种化疗方案治疗无效多药耐药(MDR)的22例急性白血病(AL)和多发性骨髓瘤(MM)患者,采用自身对照的方法,运用TTD(购于浙江康恩贝集团)逆转其MDR,取得较好疗效.
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官颈癌SiHa/DDP细胞系EMT相关分子表达研究
目的 上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞丢失其上皮细胞特性获得间质细胞特征的过程,与多种抗肿瘤药物耐药相关.本研究通过构建宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/DDP,检测其与亲本细胞之间EMT相关分子的表达差异,建立EMT与宫颈癌顺铂化疗敏感性和相关性模型,为宫颈癌化疗耐药研究提供基础.方法 梯度药物浓度持续诱导建立SiHa耐药细胞系SiHa/DDP,四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测耐药指数,划痕实验及Transwell实验检测体外迁移及侵袭能力,Real-Time PCR及蛋白质印迹法检测EMT相关基因表达.结果 建立耐药细胞系SiHa/DDP(RI=4.48),该细胞侵袭及迁移能力愈合百分比为(64.89±3.91)%,较亲本细胞(17.11±4.49)%增强,t=-12.738,P=0.001;穿膜细胞计数为281.33±27.74,较新本细胞150.33±22.3增强,t=-6.375,P=0.003.mRNA水平上SiHa/DDP细胞E-cadherin,Nano及Oct4表达较SiHa细胞降低,而Snail,Vimentin及N-cadherin表达较SiHa细胞增高,蛋白水平上在顺铂(DDP)浓度0.4μg/mL条件下稳定生长的SiHa细胞株,E-cadherin下调,Snail上调.当DDP浓度稳定至2.0 μg/mL时,检测仍可见E-cadherin下调,但Snail蛋白表达消失,而GSK-3β表达明显增高.结论 耐药细胞系SiHa/DDP呈现EMT表型,SiHa细胞获得顺铂耐药性与EMT相关,SiHa/DDP细胞Snail蛋白表达降低与顺铂上调GSK-3β诱发Snail向胞质转位导致快速降解相关.EMT是另一种耐药相关机制,可能成为逆转宫颈癌耐药治疗的新靶点.
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吉西他滨对人鼻咽癌耐药细胞放射敏感性的影响
中国南方的鼻咽癌以低分化或未分化性非角化癌(WHO分型Ⅱ和Ⅲ型)多见,对放化疗敏感,但是对于首程含顺铂(DDP)的治疗后复发或转移的患者,以顺铂为基础的化疗疗效欠佳,这在很大程度上是由于肿瘤细胞产生了耐药性.
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恶性肿瘤多药耐药研究进展
多药耐药是肿瘤化疗的主要障碍,然而其形成机制非常复杂,单个耐药细胞可以同时具有多种抗药机制,而每个机制又可使肿瘤细胞对不同类型的抗肿瘤药产生多种耐药表型.现将肿瘤细胞多药耐药的研究进展简述如下.
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亲溶酶体剂IHW2对白血病骨髓净化作用的机制初探
对白血病缓解期患者实施自体骨髓移植后,残留白血病细胞会导致复发.因此采取不损伤正常造血干细胞的体外净化手段,清除骨髓中残留白血病细胞,特别是耐药细胞,是消除自体骨髓移植后急性白血病复发的关键.
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红霉素逆转人胃癌细胞多药耐药性的研究
胃肠道肿瘤化疗的耐药性一直是困扰临床医师的一个难题.常用的肿瘤多药耐药性逆转剂由于严重的临床毒副作用,很难在体内达到体外有效的浓度,因而很难在临床上得到应用.红霉素是大环内酯类抗生素,是当今应用为广泛的抗菌药物.随着临床和药理的深入研究,其应用日益拓宽.1989年Hofsli等[1]发现,红霉素在体内可增强阿糖胞苷、放射菌素D、高三尖酯碱、柔红霉素等抗肿瘤药物的抗癌作用,并可逆转某些恶性肿瘤的多药耐药性.但有关红霉素对人胃癌耐药细胞的逆转作用方面的研究尚未见诸文献.
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川芎嗪逆转癌耐药细胞多药耐药的实验研究现状
综合分析川芎嗪逆转癌耐药细胞多药耐药的实验研究现状.对有关文献进行资料综合显示川芎嗪有逆转肝癌、肺癌、胃癌、血癌、和肿癌细胞株KBV200多药耐药性的作用.认为川芎嗪逆转癌耐药细胞多药耐药的作用,药物开发利用将会具有广阔的前景.
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辐射诱导多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的实验研究
目的研究联合应用放、化疗对多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的影响并探讨诱导凋的机制.方法比较放化疗、单纯放疗、单纯化疗的诱导凋亡作用,将HepG2/ADM分为6组,比较各组凋亡率;应用RT-PCR法检测各组HepG2/ADM细胞p53、bcl-2和bax的表达.结果经处理因素作用后,组1~6HepG2/ADM细胞凋亡率分别为2.8±0.3%,5.2±0.5%,10.9±2.3%,31.7±4.1%,11.7±2.8%,35.2±4.5%.放化疗与单纯化疗相比诱导HepG2/ADM凋亡率明显增高(P<0.05).RT-PCR检测组1~6 p53表达分别为:0.22±0.04、0.23±0.02、0.31±0.04、0.55±0.02、0.35±0.04、0.57±0.05;bcl-2表达分别为:0.34±0.03、0.3l±0.04、0.25±0.02、0.14±0.02、0.26±0.03、0.10±0.03;bax表达分别为:0.21±0.02、0.25±0.02、0.29±0.03、0.38±0.03、0.29±0.03、0.41±0.06.结论放化疗联合应用能够显著增加耐药细胞HepG2/ADM凋亡率,这种作用与p53、bax、bcl-2表达调节有关.
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彗星分析技术对难治性白血病的早期诊断价值
彗星分析技术(Comet assay)是一项简便、快速、灵敏、直接显示单个细胞DNA损伤的新技术[1].检测DNA损伤的彗星分析是预示肿瘤放、化疗敏感性的很好指标,是检出耐药细胞的简便方法[2].我们应用德国癌症研究中心Schmezer实验室建立的改良Singh慧星分析方法[3]对25例化疗后的急性白血病(AL)患者进行了慧性分析,现报道如下.
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Bcl-XL小分子干扰RNA在结肠癌氟尿嘧啶耐药细胞中的治疗作用
近年来以5-氟尿嘧啶(5-FU)为基础的辅助化疗有效地改善了结肠癌患者的预后,但是不断出现的耐药问题严重影响了其应有的疗效,研究显示5-FU耐药的肿瘤细胞中存在Bcl-2家族蛋白,特别是抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的增加[1,2],这提示Bcl-XL对于耐药肿瘤细胞的存活起着关键的作用,可能是一个潜在的抗肿瘤靶点.因此我们利用靶向Bcl-XL的小分子干扰RNA(siRNA)特异性下调Bcl-XL蛋白,观察其对细胞生长的影响,并探讨Bcl-XL siRNA治疗结肠癌5-FU耐药细胞的作用.
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维拉帕米对多药耐药胃癌细胞耐药逆转作用的研究
肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物产生耐药,并且这些药物之间化学结构及作用机制可以互不相同,这种现象称为多药耐药性(multiple drugs resistance,MDR).目前的研究表明,MDR的产生与耐药细胞膜上P-糖蛋白(P-gp)水平呈正相关,钙通道阻滞剂可对部分肿瘤细胞耐药起逆转作用[1,2].本研究旨在分析肿瘤细胞耐药与P-gp表达的关系;观察维拉帕米(VER)逆转耐药的程度,探讨VER逆转耐药与P-gp的关系.
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肿瘤多药耐药与p53、ras基因异常表达的关系
肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是目前抗肿瘤研究的热点,多种肿瘤的耐药细胞中有多药耐药基因(mdr-1)和(或)多药耐药相关蛋白基因(mrp)的表达增高[1~4],它们的过度表达除受化疗药物的诱导与激活外 ,还受到其他一些因子的调节.现已证实,乳腺癌、胰腺癌、大肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和卵巢癌等多种肿瘤组织存在抑癌基因p53和癌基因ras的异常表达,而且越来越多的研究证明,恶性肿瘤组织中p53、ras基因的异常表达可能对mdr-1和 mrp基因起调控作用.现对近年来有关文献综述如下:
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人参皂甙对白血病耐药细胞化疗药物敏感性的研究
目的:通过观察人参皂甙(GS)协同化疗药物对K562/VCR、K562/Adr白血病耐药细胞株的抑制作用,探讨GS是否能提高肿瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性.方法:选用K562/VCR、K562/Adr两耐药细胞株作为靶细胞,液体培养和半固体集落培养法观察不同浓度的GS对耐药细胞增殖的影响,及GS协同化疗药物对K562/VCR、K562/Adr耐药细胞集落生成的抑制作用.结果:①单用GS作液体培养MTT分析法和集落培养法均显示低、中等浓度的GS5~50μg/ml对细胞增殖无明显影响,但当浓度升高至75μg/ml时,则抑制细胞增殖和集落形成(P<0.01).②当GS与化疗药物联合应用时,即使化疗药物浓度(1μg/ml)不变,K562/VCR、K562/Adr耐药细胞对化疗药物的敏感性与GS呈剂量依赖关系.即GS浓度达到50μg/ml时,化疗药物对细胞的抑制作用明显(P<0.01),且随着GS浓度的升高,抑制作用逐渐增强.结论:GS通过提高耐药细胞对化疗药物的敏感性而与化疗药物起协同作用,同时在一定浓度下,能直接地抑制白血病耐药细胞增殖.
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蛋白酶体抑制剂Bortezomib的临床应用
Bortezomib是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂,通过抑制核因子(NF-κ B)诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞(包括耐药细胞)凋亡,下调MM细胞与基质细胞表达的黏附分子,进而减少细胞因子的分泌,抑制耐药.临床研究表明,Bortezomib是治疗MM有前途的新药.现将Bortezomib的临床应用作一综述.