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单细胞凝胶电泳技术在军事毒理学中的应用
由Ostling和Jonhanson首先提出,后又经Singh和Olive建立和改进的单细胞凝胶电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,简称SCGE)技术,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(Comet Assay).它是一种测定和研究单个细胞DNA链断裂的新电泳技术,与传统方法相比,其简便、快速、灵敏、样品量少、无需放射性标记,具有极高的实用价值.
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COULTER EPICS XL型流式细胞仪激光电源特殊故障维修分析
流式细胞仪是 80年代迅速发展起来的快速定量、定性分析细胞的高新技术的仪器。它集中了计算机技术,流体力学,激光技术,光学,电子学和单克隆抗体技术等各项先进科技,对单个细胞行多参数分析。现已广泛应用于临床和科研。 故障现象常规开机系统软件检测报: laser start error(激光启动错误 )。流式细胞仪无激光输出。
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培养基的正确制备及使用
细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种生命科学技术.细胞培养的培养物可以是单个细胞,也可以是细胞群.
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从组织切片上分离单个细胞的相关技术及其应用前景
1 从组织切片上分离单细胞方法的建立从组织切片上进行单个细胞分离,并扩增出靶DNA片段的技术是1993年由德国科隆大学的Hansmann等[1]建立起来的一项新技术,并将其称为分子组织学技术(molecular histology).该方法的大优点在于能够针对所需研究的细胞,将组织形态和分子生物学技术密切结合,特别适用于细胞组成复杂的病变.同年,Trumper等用霍奇金病(HD)淋巴结制备细胞悬液,结合免疫组织化学,用微操纵器从细胞悬液中提取单个Reed-Sternberg(RS)细胞,并成功地进行了聚合酶链反应(PCR)[3].两种方法相比较,前者更具优势,因为从组织切片上提取单个细胞,能密切结合形态学特征,更为直观和准确,同时也能将目的细胞与周围微环境中的背景细胞作相关性研究.获得单个细胞还有其他方法,如流式细胞仪、密度梯度离心、高梯度磁性细胞筛选,但细胞体积较大时,这些方法易导致细胞碎裂,而从组织切片上提取单个细胞不存在类似问题[4].
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基于X染色体基因多态性的克隆性分析技术及其应用
目前认为,来源于单个细胞的增生,即单克隆性是肿瘤的重要特征之一,而以修复为目的之反应性增生涉及多个克隆,增生形成的细胞群体属于多克隆性.因此,确定一个病变的克隆性是区别肿瘤性增生和反应性增生的关键,这一检测统称为克隆性分析(clonality an alysis).很显然,这项技术在肿瘤诊断及研究中有重要价值.
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单细胞测序研究淋巴细胞免疫球蛋白基因重排
淋巴结生发中心的研究有其特殊性,即细胞组成相当复杂,采用常规的全组织研究往往不能针对所需要的细胞。1993年Hansmann等[1]建立了一种从组织切片上提取单个淋巴细胞并进行聚合酶链反应(PCR)的研究方法。该方法的大优点在于能够针对所需细胞进行相应的分子生物学研究,主要被应用于霍奇金病中R-S细胞的起源研究[2]。近,该技术又有了进一步的发展,即出现了单个细胞的DNA测序技术。应用该技术能够获得有关体细胞超突变、克隆相关性,克隆内差异(interclonal diversity)和延续性突变(ongoing mutation)的信息。我们对1例滤泡反应性增生性淋巴结进行了单个细胞PCR和单细胞测序研究,以探讨这些技术在淋巴结研究中的价值。
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利用激光显微切割技术提取高质量RNA
RNA的提取是许多实验研究的第一步,也是一个非常重要的环节.而获得高质量的RNA,又是后续实验进展顺利及结果可靠的有力保障.在以往对肿瘤的研究中我们大多以整块组织为研究对象,但众所周知肿瘤组织中不仅含有肿瘤成分还有间质细胞、炎细胞等成分;有些肿瘤组织还具有异质性的特点,即包含了肿瘤进展不同阶段的病变.这些都造成提取出的RNA不"纯",从而导致研究结果出现一定的偏差.还有些研究以培养的肿瘤细胞为实验材料,虽然部分地解决了细胞单一性的问题,但是细胞在培养过程中是否存在某些附加的突变从而影响实验结果却是值得考虑的.因此如何获取纯净的、高质量的RNA成为亟待解决的问题.1996年美国国立癌症研究所开发出了激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术[1].这是一项在显微镜下从组织切片中分离单一类型细胞群或单个细胞的技术.该技术成功地解决了组织中的细胞异质性问题,是肿瘤学及分子病理学研究的一项革命性技术.
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针吸细胞学检查在肿瘤诊断中的应用
针吸细胞学的诊断足以病理组织学为基础,通过"微观"肿瘤细胞的变化特点来确定其性质的一种诊断手段,其原则与组织学诊断相似,适应于多样性的标本来源及病变种类,其诊断主要通过观察单个细胞的形态,以及细胞团内细胞的排列和生长方式,既能对肿瘤性和非肿瘤性疾病做出诊断和鉴别诊断,又能对肿瘤的良、恶性及其组织学类型做出判断.
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正确认识流式细胞术在血液肿瘤诊断中的价值与作用
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是在近代单克隆抗体技术、激光技术、流体力学和计算机技术发展的基础上,结合细胞生物学、分子免疫学等而发展起来的一种快速、高通量、可同时检测单个细胞多种参数的技术,在血液肿瘤的诊断和预后判断、微小残留病( mini-cal residual disease ,MRD)监测、造血干细胞计数、细胞内成分测定等方面发挥着重要作用。特别是近几年来,FCM技术逐渐向大中型医疗机构推进和普及,按照WHO 2008年出版的新的血液肿瘤的分类方法,一些血液肿瘤的终确诊必须要明确其病变细胞的表型特征和分化、发育阶段,这就要求从事该项工作的人员对FCM技术的内涵有深入的认识,特别要熟悉在血液肿瘤方面的应用和注意事项,正确、客观理解FCM技术在血液肿瘤诊断中的价值和作用。
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叶酸对胃癌前细胞凋亡的影响
目的:研究叶酸对胃癌前细胞凋亡的影响.方法:胃镜下活检,病理证实癌前病变患者38例(结肠型肠上皮化生18例和轻、中度非典型增生20例),癌前病变组织经胃蛋白酶消化液消化成单个细胞后,采用PI单染法和Annexin V FITC/PI双参数染色法用流式细胞仪检测细胞凋亡率.将癌前病变患者随机分为治疗组19例,对照组19例(每组包括结肠型肠上皮化生9例和轻、中度非典型增生10例),治疗组给予叶酸10 mg,3次/d,治疗3 mo,对照组给予硫糖铝1.0 g,3次/d,治疗3 mo,治疗结束后复查组织细胞凋亡率.结果:治疗组治疗后细胞凋亡率增高(P<0.05),对照组治疗后细胞凋亡率无明显变化(P>0.05).结论:叶酸具有诱导胃癌前病变细胞凋亡的作用.
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成纤维细胞生长因子-10上调人角朊细胞TGFα的分泌
目的:探讨成纤维细胞生长因子-10(FGF-10)促创面肉芽组织形成的作用机制.方法:将不同浓度的FGF 10分别加入细胞培养液中,于作用后24、48和72h收集细胞培养上清,采用ELISA方法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF的含量,同时进行细胞计数.结果:当细胞接种密度为2 500细胞/cm2时,24h的培养上清中未能检测到GM-CSF,48h的上清中125 ng/ml和500ng/ml FGF-10组GM-CSF的浓度及单个细胞的GM-CSF的分泌均显著高于对照组(P<0.05).72h的培养上清中仅500ng/ml FGF-10组GM-CSF的分泌量显著高于对照组(P<0.05).当细胞接种密度为5 000细胞/cm2时,16~500ng/ml的FGF-10各组GM-CSF浓度显著高于对照组(P<0.05),但单个细胞的GM-CSF分泌量与对照组无显著差异(P>0.05),48h收集的培养上清中,与对照组相比,FGF-10各组的GM-CSF均未升高,且48h各组单个细胞的GM-CSF分泌量与该培养皿中的细胞总数呈负相关(r=-0.881,P<0.05).结论:实验结果提示FGF-10可能通过刺激GM-CSF的分泌,从而间接作用于成纤维细胞、内皮细胞等,促进创面肉芽组织形成.
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骨质疏松与细胞凋亡
骨质疏松是一种常见的代谢性骨病,以单位体积内骨量减少,骨矿物质沉积减少,而骨的成分含量不变为特点.原发性骨质疏松以绝经后妇女和老年人为常见.在一些全身免疫性疾病(如类风湿关节炎)等,常发生继发性骨质疏松.细胞凋亡是单个细胞受其内在基因编程调节,通过主动生化过程而自杀死亡的现象,又称程序性细胞死亡(PCD).目前认为它在机体正常发育及衰老等过程起重要作用[1].细胞凋亡在胚胎发育、肿瘤、免疫等方面研究较为深入,在骨吸收、骨生成、骨质疏松等方面研究则是新热点[2].以下就骨质疏松与细胞凋亡关系作一综述.
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Cell:乳腺癌入侵需要领导细胞和K14蛋白
侵袭是癌症转移过程的重要一步,目前人们还不清楚有多少亚群细胞参与了这一过程。来自美国约翰?霍普金斯大学的研究者们在实验室一个模拟人类患者乳腺癌周围环境的特异3D凝胶中培育了小鼠肿瘤,观察到癌细胞成群浸润到凝胶中,少数细胞在前面,其余的跟在后面,从而确定有一类独特的乳腺癌细胞存在,其可能是引领癌细胞入侵周围组织的“向导”(leader cells)。这个过程就如同光脚的人涉水探险一样,在转移发生之前,处于肿瘤边缘的单个细胞会形成突起,进入到周围组织中,如果条件合适,它们就会引导后续的肿瘤细胞脱离肿瘤界限,入侵到健康组织中,并在新的组织位点形成转移瘤。
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"彗星"分析法及应用
"彗星"分析(Comet assay)又称单细胞凝胶电泳,是以电泳后细胞核DNA的显微镜荧光图像特征而得名的,用以定量分析和测定DNA损伤.这项技术现已被环境毒理学家和肿瘤学家所广泛采用.这是第1次可以在肉眼水平测量样品中全部单个细胞DNA损伤的方法.该方法速度快,敏感性较高,可以检测小如5*!cGy照射后淋巴细胞的初始DNA损伤,以及异质性细胞群体中不同单细胞的所有不同程度的DNA损伤.
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解剖内耳活体标本的超细钨针的制作方法
"工欲善其事,必先利其器”.随着听生理研究的进展,对内耳活体标本进行显微解剖,分离出内耳各种组织乃至单个细胞的技术已成为听觉研究的重要环节[1].一般内耳解剖用钢针的尖端较脆而易折,尖端直径也不可能加工到微米级;而钨丝硬度高、延性强,因此我们借鉴电生理学实验中钨丝微电极的制作方法[2],制做了用于解剖内耳组织的普通钨针和分离单个细胞的超细钨针.
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运动诱导淋巴细胞凋亡及其发生机制研究进展
细胞凋亡主要发生于分散的单个细胞,特征性表现为细胞皱缩、细胞质浓集、核染色质固缩、核裂解,终末期形成凋亡小体[1].而淋巴细胞也能发生凋亡,人体血液和组织的淋巴细胞在正常情况下处于动态平衡状态,免疫应激发生后,淋巴细胞活化,产生免疫因子和抗体,杀灭抗原后,免疫反应需终止或降低强度,此时凋亡扮演着重要的角色,可清除一些损伤或衰老细胞以维持平衡,淋巴细胞凋亡机制缺失易引发自身免疫性疾病的发生[2,3].
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分子影像学的研究和进展
过去的10多年分子生物学有了很大的发展,也对各个医学学科产生了重大影响.基因治疗的需要使得一些基因学家思考如何在活体(in vivo)监控外源性基因的表达.他们开始求助于影像学设备,如正电子发射体层成像(positron emission tomography, PET)[1]、MRI[2,3]和光学成像技术[4,5]等.将分子生物学的技术和现代医学影像学相结合产生了分子影像学这门新的边缘学科.过去的几年间,分子影像学有了较大的发展,利用PET、MRI和光学成像技术已可以在动物模型中发现转基因的表达[1]、胚胎的发育[3]、追踪单个细胞的运动[2],以及发现微小的肿瘤[4,5]等.我国学者也向这一领域做了积极的尝试[6].笔者就近年来分子影像学的研究和进展综述如下.
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电离辐射旁效应及其机理研究进展
近10几年来,对于旁效应(Bystander Effect)的研究已成为生物学和放射生物学领域一个新的热点.随着对辐射损伤研究的深入,人们认识到机体对辐射的反应是群体现象,而不仅仅是单个细胞对损伤的累积反应.关于这方面的工作,国外学者做的相对较多,而国内目前的研究比较少.笔者就这方面的研究做一概述.
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单细胞凝胶电泳技术及其在辐射生物学中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE),又称彗星分析(Comet assay),是利用断裂的DNA碎片在裂解液的作用下,从DNA的超螺旋结构中释放出来,在电泳时移向阳极的彗星样影像而对损伤的DNA进行检测的一种方法,是检测各种哺乳动物细胞DNA断裂的新技术[1].这种技术可以测定单个细胞DNA链的断裂,与传统方法相比,由于其简便、快速、敏感、所需样品量少,无需细胞处于生长状态和使用放射性同位素,故有很强的实用价值.SCGE已广泛用于环境生物监测、辐射生物学、遗传毒理学、药物筛选、毒物致癌机理、肿瘤发病机理、诊疗、衰老和细胞凋亡机理的研究.现就SCGE技术的原理和方法及其在辐射生物学领域的应用作一简要介绍.
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抗肿瘤药物时辰药动学研究进展
人体生理机能及物质代谢方面的变化均呈一定的节律性.生物节律是生命活动的基本特征.生物节律是极其广泛的,就人类而言,从系统、器官、组织水平到单个细胞,乃至各种亚显微结构都有生物节律.机体的各种生理功能、生化过程、治疗作用、不良反应等皆随时间推移而呈节律性变化,由此产生了时间药理学和时间治疗学,因此运用药动学的有关理论知识制定合理的给药方案,对提高药物疗效,降低不良反应具有重要的临床意义.